發(fā)布時(shí)間：2018-03-17 12:26

  本文選題：丙酸桿菌　切入點(diǎn)：色素減退　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：進(jìn)行性斑狀色素減少癥（progressive macular hypomelanosis，PMH）是一種易被誤診的色素減退性皮膚病，其臨床特征為軀干部對稱出現(xiàn)邊界不清的圓形、橢圓形色素減退斑，并常于軀干中線處融合成片狀。它不癢不痛也無炎癥。20世紀(jì)80年代，為了描述一種發(fā)生于法國人身體上的色素紊亂皮膚病，Guillet等人首次提出了進(jìn)行性斑狀色素減少癥，世界各地陸續(xù)均有報(bào)道，近年來國內(nèi)分別以“花斑癬樣色素減退”、“青少年特發(fā)性淺色斑”進(jìn)行過報(bào)道。但目前缺乏公認(rèn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且該病的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，主要由以下四種假說：○1基因‘融合’學(xué)說○2遺傳學(xué)說○3真菌感染學(xué)說○4痤瘡丙酸桿菌學(xué)說；目前較為認(rèn)可的是痤瘡丙酸桿菌感染學(xué)說[2]，但國內(nèi)尚無對該病致病菌及作用方式相關(guān)方面的研究。目的：對進(jìn)行性斑狀色素減少癥（PMH）患者所分離的致病菌進(jìn)行初步鑒定和分析；并將PMH患者皮損分離出的痤瘡丙酸桿菌加入角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCat株）的培養(yǎng)體系，以痤瘡患者皮損處分離出的痤瘡丙酸桿菌及痤瘡丙酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株（NCTC737）做對照組，來觀察不同來源細(xì)菌對HaCat細(xì)胞株分泌IFN-γ、IL-6、TNF-α細(xì)胞因子的影響，從而推測可能的發(fā)病機(jī)制。 方法： 需氧法、厭氧法分別從PMH及痤瘡患者皮損處培養(yǎng)病原菌，應(yīng)用革蘭氏染色、ATB Rapid ID32A系統(tǒng)鑒定及細(xì)菌16sDNA測序鑒定，將測序結(jié)果通過Blast比對，與已知菌進(jìn)行同源性分析，確定細(xì)菌種屬。然后用DNASTAR建立細(xì)菌的系統(tǒng)發(fā)育樹。取正常人（色素痣患者）皮膚細(xì)菌培養(yǎng)做對照。 將PMH患者皮損分離出的痤瘡丙酸桿菌加入角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCat株）的培養(yǎng)體系，以痤瘡患者皮損處分離出的痤瘡丙酸桿菌及痤瘡丙酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株（NCTC737）做對照組，來觀察不同來源細(xì)菌對HaCat細(xì)胞株分泌IFN-γ、IL-6、TNF-α細(xì)胞因子的影響。 結(jié)果： 1.WOOD燈觀察 41例PMH患者中35例皮損區(qū)燈下可見局限性點(diǎn)狀紅色熒光，占85.4%，正常皮膚處未見點(diǎn)狀紅色熒光。295例尋常型痤瘡患者中，195例粉刺型中，其中90例可見紅色熒光，183例丘疹型中痤瘡患者中17例可見紅色熒光。 2.病原菌的分離培養(yǎng)和鑒定 11例PMH患者正常皮膚處取材培養(yǎng)，在常規(guī)血平板和厭氧血平板中均未見菌落形成；皮損區(qū)取材作需氧及厭氧培養(yǎng)，需氧培養(yǎng)的未發(fā)現(xiàn)有菌落生成，厭氧培養(yǎng)有9例有菌落形成，菌落為圓形、白色、不透明、光滑、不溶血伴有臭味，Wood燈下表現(xiàn)為紅色熒光，革蘭氏染色陽性，短棒狀桿菌、無芽孢、莢膜和鞭毛，經(jīng)ATB Rapid ID32A系統(tǒng)鑒定為痤瘡丙酸桿菌。用厭氧培養(yǎng)法從13例尋常型痤瘡皮損做培養(yǎng)，9例培養(yǎng)出革蘭氏陽性菌，經(jīng)鑒定7株均為痤瘡丙酸桿菌，1株為腸桿菌，1株為Lysinibacillus菌。正常人（色素痣患者）皮膚組織培養(yǎng)未見細(xì)菌生長。 3.16sDNA測序分析及系統(tǒng)發(fā)育樹的建立 分別對來自面部尋常型痤瘡皮損處的痤瘡丙酸桿菌和PMH背部皮損處培養(yǎng)的痤瘡丙酸桿菌進(jìn)行16sDNA測序，測序結(jié)果經(jīng)Blast分析16株為痤瘡丙酸桿菌（9株來自于PMH患者，7株來源于痤瘡患者），在NCBI上選取痤瘡丙酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(DSM16379,NR040847.1)與顆粒丙酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株（DSM20700,NR025276.1）一起做phylogenetic tree和sequence distances后發(fā)現(xiàn)來自PMH皮損區(qū)的菌株為痤瘡丙酸桿菌，與痤瘡丙酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株相似度均大于99.7%。 4.痤瘡丙酸桿菌對HaCat細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響 PMH分離的痤瘡丙酸桿菌與HaCat株共培養(yǎng)分泌的IFN-γ、IL-6量較空白對照組含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；較標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTC737組含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；較痤瘡患者分離出的痤瘡丙酸桿菌株含量升高，，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05） PMH分離的痤瘡丙酸桿菌與HaCat株共培養(yǎng)分泌的TNF-α量較空白對照組含量降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；較標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTC737組含量降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；較痤瘡患者分離出的痤瘡丙酸桿菌株升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=1.47,P＞0.05） 結(jié)論： 進(jìn)行性斑狀色素減少癥皮損區(qū)可以分離自痤瘡丙酸桿菌，而周圍正常皮膚及正常人的正常皮膚未能培養(yǎng)出痤瘡丙酸桿菌；P.anes致PMH患者色素減退，可能是由于影響角質(zhì)形成細(xì)胞分泌如IFN γ、 IL-6等細(xì)胞因子，從而影響黑素細(xì)胞的生物學(xué)活性，影響黑素合成而導(dǎo)致
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R758.733

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本文編號：1624738