本文關(guān)鍵詞：IP-10及納米脂質(zhì)體槲皮素對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞的效應(yīng)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《鄭州大學(xué)》 2013年

IP-10及納米脂質(zhì)體槲皮素對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞的效應(yīng)

余斌  

【摘要】：銀屑病是一種病因復(fù)雜的慢性炎癥性、自身免疫性疾病。人群患病率約為2-3%。銀屑病的組織病理結(jié)果顯示為角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增殖,淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞以及大量炎癥因子、趨化因子如IFN-γ、IL-1、CXCL12、CCL19等的浸潤。這些細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞因子及趨化因子共同參與銀屑病的發(fā)病,對(duì)銀屑病局部皮損的形成,以及全身癥狀的產(chǎn)生都發(fā)揮了重要的作用。IFN-γ是關(guān)鍵的細(xì)胞因子之一。T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ,刺激角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生IL-8、CCL20、CXCL9,尤其是CXCL10,這些細(xì)胞因子可以活化更多T細(xì)胞,引起炎癥反應(yīng)的放大。同時(shí),IFN-γ還可誘導(dǎo)THO向TH1轉(zhuǎn)化。IP-10是由IFN-γ誘導(dǎo)產(chǎn)生的分子量約為10kDa的蛋白質(zhì)。IP-10也參與了銀屑病的病理生理過程,其可以趨化多種炎癥細(xì)胞,如T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞等,促進(jìn)細(xì)胞因子釋放；同時(shí)還可促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖。本研究通過對(duì)比IFN-γ和1P-10對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞的效應(yīng),進(jìn)一步探討其在銀屑病發(fā)病中的作用,為銀屑病的病因研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 銀屑病病程較長,是一種反復(fù)發(fā)作的疾病。患者用藥時(shí)間長,且隨著發(fā)病次數(shù)的不斷增加,對(duì)藥物的反應(yīng)也會(huì)隨之降低。目前糖皮質(zhì)激素在銀屑病的治療中應(yīng)用較為廣泛,雖然療效尚可,但長期應(yīng)用,副作用明顯�？梢鹌つw萎縮、毛細(xì)血管擴(kuò)張、毛囊炎、色素沉著或減退等。大面積長期應(yīng)用強(qiáng)效糖皮質(zhì)激素制劑可引起全身反應(yīng),停藥后甚至誘發(fā)膿皰型或紅皮病型銀屑病。隨著人們生活水平的提高,對(duì)生活質(zhì)量的要求增高,安全性更高、療效性更好的藥物有待研發(fā)。槲皮素及其衍生物是一種黃酮類化合物,廣泛存在于植物界,如山楂、茄子、洋蔥等。其生物活性多樣,包括抗炎、抗腫瘤、抗氧化等,目前抗腫瘤是研究的熱點(diǎn),而其對(duì)銀屑病增殖的角質(zhì)形成細(xì)胞效應(yīng)的研究較少。本研究通過對(duì)比納米脂質(zhì)體槲皮素(nQ)及地塞米松(Dex)對(duì)增生的角質(zhì)形成細(xì)胞的效應(yīng),為銀屑病的治療的研究提供一個(gè)新的依據(jù)。 目的： 探討IP-10及干擾素-γ(IFN-γ)對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞的作用及其在銀屑病發(fā)病中的機(jī)制；并對(duì)比納米脂質(zhì)體槲皮素(nQ)及地塞米松(Dex)對(duì)增生的人角質(zhì)形成細(xì)胞的效應(yīng)。 方法 1.MTT方法檢測(cè)細(xì)胞生長率及生長抑制率 根據(jù)加入的藥物,將培養(yǎng)的正常HaCaT細(xì)胞分為nQ組(40μmol/L50/μmol/L、60μmol/L)、Dex組(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)、IFN-γ組(50u/mL、100u/mL、150u/mL)、IP-10組(20ng/μl、30ng/μl、40ng/μl)以及不加藥的對(duì)照組(C)。培養(yǎng)48h后,MTT實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)細(xì)胞生長率及生長抑制率。 2.斑點(diǎn)原位雜交 2.1IP-10及c-myc探針的制備 應(yīng)用隨機(jī)引物法,制備生物素標(biāo)記IP-10和c-myc探針,應(yīng)用mRNA斑點(diǎn)原位雜交檢測(cè)探針靈敏度。2.2mRNA斑點(diǎn)原位雜交 根據(jù)加入的藥物,將培養(yǎng)的正常HaCaT細(xì)胞分為nQ組(50μmol/L)、Dex組(10-6mol/L)、IFN-γ組(100u/mL)、IP-10組(30ng/μl)以及不加藥的對(duì)照組(C)。48h后,提取各組細(xì)胞的總RNA。應(yīng)用IP-10和c-myc探針的mRNA斑點(diǎn)原位雜交技術(shù)對(duì)比檢測(cè)各組]mRNA的雜交信號(hào)。 2.3cDNA斑點(diǎn)原位雜交 (1)根據(jù)加入的藥物,將培養(yǎng)的正常HaCaT細(xì)胞分為nQ組(50μmol/L)、Dex組(10-6mol/L)、IFN-γ組(100u/mL)、IP-10組(30ng/μl)以及不加藥的對(duì)照組(C)。48h后,提取各組細(xì)胞的總DNA。 (2)提取正常男性包皮組織及尋常型銀屑病患者病變組織的總DNA。 (3)應(yīng)用IP-10和c-myc探針的DNA斑點(diǎn)原位雜交技術(shù)對(duì)比檢測(cè)各組細(xì)胞及組織的cDNA的雜交信號(hào)。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行分析,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。采用t檢驗(yàn)比較兩組間總體均值,用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行多個(gè)樣本的兩兩比較,檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為α=0.05,當(dāng)p0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.MTT結(jié)果顯示：IFN-γ及IP-10的GR和nQ及Dex的GSR均呈劑量依賴性,P0.05。 2.斑點(diǎn)原位雜交 2.1IP-10和c-myc探針結(jié)果顯示：兩組探針靈敏度均達(dá)0.1pg/μl。 2.2mRNA原位雜交結(jié)果顯示：IFN-γ及IP-10的信號(hào)高于C組,P0.05； 2.3nQ及Dex的信號(hào)低于C組,P0.05。cDNA原位雜交結(jié)果顯示：IFN-γ及IP-10的信號(hào)高于C組及正常組織,P0.05,IFN-γ及IP-10的信號(hào)與病變組織差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05；聯(lián)合用藥組的信號(hào)與正常對(duì)照組及正常組織的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。 結(jié)論 1.干擾素-γ及IP-10促進(jìn)人角質(zhì)形成細(xì)胞的生長,其作用為劑量依賴性。 2.槲皮素及地塞米松抑制增殖狀態(tài)的人角質(zhì)形成細(xì)胞的生長,其作用為劑量依賴性。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R758.63
【目錄】：

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中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者嚴(yán)少衛(wèi);[N];健康報(bào);2009年

2 記者熊學(xué)莉 通訊員吳劉佳;[N];健康報(bào);2010年

3 吳劉佳;[N];中國醫(yī)藥報(bào);2010年

4 劉鈞天;[N];健康報(bào);2011年

5 湖南中醫(yī)學(xué)院附二院主任醫(yī)師 歐陽恒;[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2002年

6 皮膚科專家 楊美平 整理;[N];家庭醫(yī)生報(bào);2005年

7 楊可輔（作者系成都市青羊銀屑病研究所主任醫(yī)師）;[N];四川日?qǐng)?bào);2001年

8 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院皮膚科 李斌 范斌;[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2004年

9 蒲成學(xué);[N];中藥報(bào);2000年

10 北京大學(xué)人民醫(yī)院皮膚科 陳周 張建中;[N];健康報(bào);2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陸小年;Toll樣受體2在銀屑病皮損中的表達(dá)及其對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

2 程暉;全基因組關(guān)聯(lián)研究搜尋中國漢族人銀屑病易感基因[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

3 周梅娟;涼血活血復(fù)方治療進(jìn)展期銀屑病的隨機(jī)、雙盲對(duì)照研究及相關(guān)機(jī)制探討[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

4 周炯;整合素和細(xì)胞外基質(zhì)在硬皮病與銀屑病皮損角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中的比較研究[D];浙江大學(xué);2012年

5 曹經(jīng)江;胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7通過調(diào)控TGF-β1信號(hào)通路抑制HaCaT細(xì)胞生長[D];華中科技大學(xué);2011年

6 高春芳;轉(zhuǎn)化生長因子βs及受體在銀屑病皮損和外周血中的表達(dá)與意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

7 向麗萍;竹Ⅱ?qū)︺y屑病患者NGF、NGF受體的影響及遠(yuǎn)期療效觀察[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2006年

8 李慧;SERPINB1在銀屑病中的表達(dá)及功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

9 史曉蔚;角蛋白17（K17）作為自身抗原銀屑病發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 朱坤舉;吸煙、飲酒與銀屑病關(guān)聯(lián)研究的meta分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 倪成;MHC區(qū)基因多態(tài)性與漢族人銀屑病相關(guān)性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

2 許曉娟;銀屑病與兒童孤獨(dú)癥的易感基因的突變研究[D];中南大學(xué);2010年

3 顏文飛;NGF、KGF在銀屑病中的表達(dá)和意義[D];浙江大學(xué);2001年

4 葛宏松;中國漢族人尋常型銀屑病與HLA單倍型相關(guān)性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2003年

5 林大東;血小板活化因子乙酰水解酶活性及基因單核苷酸多態(tài)性與銀屑病的關(guān)系[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

6 張可欣;“斑發(fā)于陽明”理論指導(dǎo)銀屑病辨證與治療的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

7 趙艷霞;銀屑病的發(fā)病與治療的回顧性分析[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2003年

8 羅東;優(yōu)化ALA-PDT的封包時(shí)間對(duì)豚鼠銀屑病模型生物效應(yīng)的影響[D];暨南大學(xué);2011年

9 安仕萍;中國北方漢族人群HLA-Cw位點(diǎn)等位基因與銀屑病相關(guān)性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

10 郝平生;中醫(yī)藥治療銀屑病的研究進(jìn)展及艾儒棣治療白疕之臨床經(jīng)驗(yàn)[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2003年

  本文關(guān)鍵詞：IP-10及納米脂質(zhì)體槲皮素對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞的效應(yīng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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