發(fā)布時間：2016-10-22 07:12

  本文關(guān)鍵詞：小鼠骨髓源性DC的提取及其與惡性黑色素瘤細胞融合細胞制備的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《大連醫(yī)科大學(xué)》 2012年

小鼠骨髓源性DC的提取及其與惡性黑色素瘤細胞融合細胞制備的研究

史鵬  

【摘要】：目的：探討GM-CSF和IL-4劑量的變化對原代小鼠骨髓源性樹突狀細胞提取數(shù)量、純度的影響以及應(yīng)用PEG法制備樹突狀細胞和惡性黑色素瘤細胞融合細胞時的適宜分子。 方法：取4周SPF級雄性C57BL/6小鼠，斷頸處死，分離出小鼠股骨和脛骨，取骨髓細胞，應(yīng)用完全培養(yǎng)基重懸細胞，接種于6孔板中，每孔加1.5ML完全培養(yǎng)基，然后置入含5%CO2濃度37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)。貼壁3小時后，棄上清，用含有不同劑量GM-CSF（200,500,1000）和IL-4（200,500,1000）的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，第5天加入TNF-α1.5ML刺激細胞成熟。分別對不同分組的細胞，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，細胞計數(shù)板計數(shù)，流式細胞術(shù)分析樹突狀細胞不同成熟度下細胞因子（MHC-Ⅱ、CD11c、CD80、CD83）表達的變化、測定細胞純度，，免疫熒光技術(shù)測定成熟細胞因子CD83表達。將培養(yǎng)至第七天的成熟樹突狀細胞和對數(shù)生長期的惡性黑色素瘤細胞制備成單細胞懸液，用不完全培養(yǎng)基重懸。應(yīng)用PKH67-GL和PKH26-GL分別染色樹突狀細胞和惡性黑色素瘤細胞。分別應(yīng)用PEG-3000和PEG-4000制備融合細胞。倒置熒光顯微鏡下觀察細胞的融合過程，并進行融合細胞純度和數(shù)量的估算。 結(jié)果：加入GM-CSF濃度為1000U/ml，IL-4濃度為500U/ml組的樹突狀細胞，細胞密度適中，偽足狀的樹突結(jié)構(gòu)明顯，呈現(xiàn)典型的樹突狀細胞結(jié)構(gòu)，明顯的優(yōu)于其他3組（P0.05）。流式細胞術(shù)分析細胞表型的變化證明了樹突狀細胞成熟度改變而致細胞表型變化的特性。免疫熒光檢測成熟樹突狀細胞，可見細胞高表達CD83。應(yīng)用PEG-3000制備的融合細胞，在倒置熒光顯微鏡下觀察，可見大量PKH67-GL（綠色）與PKH26-GL（紅色）染色后的細胞，同時可見激發(fā)出黃光，細胞體積較上述兩種細胞大的融合細胞，融合率約40%-50%，細胞密度和融合率明顯高于PEG-4000制備的細胞。 結(jié)論：1、不同濃度濃度的刺激因子影響原代的提取數(shù)量和純度，提取原代細胞刺激因子適宜的濃度分別為GM-CSF：1000U/ML；IL-4：500U/ML。2、PEG-3000在分子量上最適宜制備樹突狀細胞和惡性黑色素瘤細胞融合細胞。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R739.5
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 莊卓男;張培建;;早期生長反應(yīng)因子-1對肝損傷的作用機制研究進展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2011年06期

2 楊華;鄭勤;;惡性黑色素瘤的免疫治療現(xiàn)狀與進展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年11期

3 陳環(huán)球;文旭;顧榮民;李剛;賴婭娜;張磊;史央;時宏珍;;自體DC細胞疫苗對進展期胃癌術(shù)后同步化療患者免疫功能的影響[J];江蘇醫(yī)藥;2011年06期

4 陳環(huán)球;姚宇鋒;賴婭娜;鄭蘇文;;惡性黑色素瘤術(shù)后自體DC疫苗輔助治療的臨床療效[J];江蘇醫(yī)藥;2011年14期

5 杜娟;劉寶瑞;;生物標志指導(dǎo)下惡性腫瘤的個體化免疫治療[J];中國廠礦醫(yī)學(xué);2009年05期

6 劉璐;李琳;伍衡;閔軍;王捷;曾育杰;褚忠華;;不同誘導(dǎo)方法對人外周血樹突狀細胞體外成熟的影響[J];中華普通外科學(xué)文獻(電子版);2012年01期

7 孟東;時偉鋒;孫春雷;時宏珍;史央;朱晨瑤;唐金海;;負載HER-2/neu多肽的樹突狀細胞激發(fā)特異性CTL反應(yīng)[J];中國腫瘤生物治療雜志;2012年01期

8 周亞星;吳文溪;;miRNA調(diào)控樹突狀細胞成熟機制研究進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年01期

9 牛超;許建婷;徐東升;李薇;崔久嵬;金浩范;;IFN-α聯(lián)合GM-CSF誘導(dǎo)胃癌患者外周血單個核細胞分化為樹突狀細胞[J];中國腫瘤生物治療雜志;2013年04期

10 姚宇鋒;賴婭娜;陳環(huán)球;;自體DC疫苗對惡性黑色素瘤術(shù)后患者免疫功能的影響[J];中國腫瘤外科雜志;2011年04期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 錢琤;原發(fā)性膽汁性肝硬化患者外周血T細胞microRNA表達譜及其調(diào)控機制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 張曉穎;鋅指蛋白A20在急性髓性白血病樹突狀細胞中的作用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 陳煜哲;高效非病毒基因載體的構(gòu)建及重組樹突狀細胞應(yīng)用于腫瘤的免疫治療[D];浙江大學(xué);2012年

2 周亞星;大鼠骨髓來源樹突狀細胞成熟過程中microRNA表達譜變化及意義[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

3 王耀聰;應(yīng)用MALDI-TOF-MS技術(shù)分析轉(zhuǎn)移和非轉(zhuǎn)移黑色素瘤患者外周血清蛋白的差異表達[D];鄭州大學(xué);2013年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杜楠;李留樹;肖文華;王希良;孫同柱;;二硝基苯修飾B16細胞對黑色素瘤小鼠療效的實驗研究[J];感染.炎癥.修復(fù);2008年03期

2 杜楠;李留樹;肖文華;唐卓斌;孫同柱;;二硝基氟苯修飾的黑色素瘤細胞激活樹突狀細胞誘導(dǎo)特異性T細胞反應(yīng)[J];生物技術(shù)通訊;2006年04期

3 劉紅菊;陶曉南;辛建保;尚丹;熊先智;周瓊;;空載樹突狀細胞注射對荷瘤鼠腫瘤的免疫作用研究[J];中國新藥雜志;2007年20期

4 吳佩澤;楊明會;楊雪梅;;樹突狀細胞的補體攻膜復(fù)合物C5b-9模型的建立[J];中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2008年03期

5 于益芝;王建莉;曹雪濤;;樹突狀細胞分化發(fā)育的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);1998年06期

6 常凌愛,路士華,楊莉;樹突狀細胞在免疫學(xué)中的作用[J];邯鄲醫(yī)學(xué)高等�？茖W(xué)校學(xué)報;1999年01期

7 劉恩梅,羅嘉慧,涂文偉,劉宇隆;胰島素樣生長因子1誘導(dǎo)臍血CD14~+單核細胞轉(zhuǎn)化樹突狀細胞分化成熟的研究[J];中華兒科雜志;2001年11期

8 劉福生,王忠誠,歷俊華,林松,任銘,肖慶,張亞卓;腫瘤抗原致敏樹突狀細胞瘤苗治療顱內(nèi)膠質(zhì)瘤的實驗研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2002年02期

9 劉美娜;樹突狀細胞與婦科腫瘤生物治療[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊;2002年06期

10 吳軍,王捷,楊太成,賴晃文,鄭文嶺,王曉懷;鈣離子載體對外周血單核細胞來源的樹突狀細胞的影響[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2003年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉修恒;;小鼠骨髓源性不同成熟度樹突狀細胞培養(yǎng)鑒定[A];第十七屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 張慶紅;胡玉珍;呂順艷;鐘延清;;雌激素影響大鼠樹突狀細胞的分化、成熟和功能[A];中國生理學(xué)會第六屆全國青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2003年

3 郭大偉;梁健;姜曉峰;王學(xué)范;魏云濤;姜洪磊;;GPC3基因轉(zhuǎn)染的樹突狀細胞誘導(dǎo)抗肝癌HepG2細胞殺傷作用的研究[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

4 張新華;鐘翠平;顧云娣;顧曉;范強;王國強;周播江;;TGF-β1基因轉(zhuǎn)染樹突狀細胞增強移植心臟耐受性并降低Fractalkine的表達[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

5 于益芝;劉書遜;王文雅;張明徽;郭振紅;徐紅梅;齊潤姿;安華章;曹雪濤;;TRAIL在樹突狀細胞殺傷活化T細胞中的作用[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

6 尤長宣;羅榮城;張軍一;蘇瑾;廖旺軍;鄭航;Paul L Hermonat;;基因轉(zhuǎn)移制備樹突狀細胞的實驗研究[A];第一屆中國腫瘤靶向治療技術(shù)大會論文集[C];2003年

7 葛長勇;李鴻鈞;孫茂盛;馮婷婷;靳昌忠;姚航平;吳南屏;;滅活SV40致敏的猴樹突狀細胞的生物學(xué)特性研究[A];2008年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

8 葛長勇;李鴻鈞;謝天宏;張光明;易山;孫茂盛;吳南屏;;恒河猴樹突狀細胞的生物學(xué)特性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第四次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

9 張堯;靳風(fēng)爍;蘭衛(wèi)華;李彥峰;張克勤;吳剛;葉錦;;聯(lián)合應(yīng)用塞萊西布和CpG-ODN對樹突狀細胞功能的影響[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

10 夏強;劉衛(wèi)彬;陳振光;張瑩;黃如訓(xùn);;胸腺成熟樹突狀細胞與重癥肌無力發(fā)生的相關(guān)性分析[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王雪飛;[N];健康報;2004年

2 章靜波;[N];健康報;2009年

3 記者 白毅;[N];中國醫(yī)藥報;2009年

4 方彤;[N];健康報;2006年

5 本報記者 沈湫莎;[N];文匯報;2011年

6 張獻懷;[N];中國醫(yī)藥報;2004年

7 記者　毛黎;[N];科技日報;2006年

8 楊淑娟;[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 ;[N];中國醫(yī)藥報;2006年

10 章米力;[N];健康報;2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 潘建平;γ-干擾素對樹突狀細胞分化和功能成熟的調(diào)控及其基因修飾的樹突狀細胞抗腫瘤免疫機制研究[D];浙江大學(xué);2002年

2 朱偉國;PPAR-γ激動劑吡格列酮抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)樹突狀細胞免疫激活致動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的研究[D];浙江大學(xué);2010年

3 王正昕;腫瘤微環(huán)境中浸潤性樹突狀細胞的表型和免疫學(xué)功能的研究及其臨床意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2000年

4 周向陽;新型熱休克蛋白HSP-DC激活樹突狀細胞及其佐劑效應(yīng)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

5 趙鴻;未成熟樹突狀細胞聯(lián)合骨髓移植誘導(dǎo)大鼠異體腎移植免疫耐受的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

6 陳玉丙;樹突狀細胞抗原負載及MAGE-3 DNA瘤苗研制[D];吉林大學(xué);2004年

7 王宏偉;肺間質(zhì)樹突狀細胞在多器官功能障礙綜合征中的免疫激活與免疫耐受作用研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2010年

8 趙毅;青藤堿對RA患者樹突狀細胞免疫功能的影響及機制研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

9 劉海波;Fas信號激活樹突狀細胞炎性復(fù)合體形成的生物學(xué)意義與分子機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 趙娟;受者來源的PIR-B轉(zhuǎn)染的樹突狀細胞對小鼠異基因骨髓移植GVHD的保護作用[D];華中科技大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史鵬;小鼠骨髓源性DC的提取及其與惡性黑色素瘤細胞融合細胞制備的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

2 邵鵬;黃芪多糖對樹突狀細胞表型及功能成熟的影響[D];浙江大學(xué);2006年

3 吳鳴宇;黑色素瘤基因（MAGE-1）相關(guān)肽負載樹突狀細胞對肝癌細胞殺傷作用的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2003年

4 孟冬梅;急性髓細胞白血病細胞來源的樹突狀細胞的誘導(dǎo)及功能研究[D];青島大學(xué);2003年

5 梁軍利;IFN-β1a對多發(fā)性硬化樹突狀細胞分泌的細胞因子影響的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

6 黃祺琦;耐受性樹突狀細胞來源的exosome治療小鼠免疫介導(dǎo)性再生障礙性貧血的實驗研究[D];南昌大學(xué);2010年

7 初曉霞;淋巴瘤樹突狀細胞的表達與臨床分期、惡性度及預(yù)后的相關(guān)性研究[D];青島大學(xué);2002年

8 劉麗燕;MyD88在OK-432誘導(dǎo)樹突狀細胞成熟中的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

9 郭佳;TLR配體誘導(dǎo)骨髓來源樹突狀細胞獲得產(chǎn)生全反式維甲酸的能力[D];浙江大學(xué);2011年

10 才志剛;凍融抗原沖擊致敏的樹突狀細胞誘導(dǎo)產(chǎn)生肺癌特異性免疫應(yīng)答的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

  本文關(guān)鍵詞：小鼠骨髓源性DC的提取及其與惡性黑色素瘤細胞融合細胞制備的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：148819