本文關(guān)鍵詞：Caspase-3、Bax、Bcl-2和Beclin-1在慢性紫外線損傷小鼠模型表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

SD大鼠皮膚光老化動(dòng)物模型建立方法的探索

Construction of Photoaging Model on Sprague-Dawley Rat

中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志 , The Chinese Journal of Dermatovenereology,
 編輯部郵箱,未收錄醫(yī)院皮膚科馬東東
2011年03期
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【作者】 楊汝斌； 萬(wàn)屏； 劉玲； 何黎；

【Author】 YANG Ru-bin1,WAN ping2,LIU-ling2,HE Li2 (1. Department of Dermatology,the First People’s Hospital of Kunming,Kunming 650010,China; 2. Department of Dermatology,the First Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Kunming 650032,China)

【機(jī)構(gòu)】 昆明市第一人民醫(yī)院皮膚科； 昆明醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院皮膚科；

【摘要】 目的探討光老化動(dòng)物模型造模過程中的各個(gè)關(guān)健因素,確定實(shí)用的造模方法。方法模擬日光中UV(UVA+UVB)照射SD大鼠,3次/周,共12周,累計(jì)照射劑量:UVA為148.5J/cm2,UVB為21.38J/cm2;觀察照射部位皮膚的臨床表現(xiàn)、組織病理、超微結(jié)構(gòu)及生化指標(biāo)的改變情況。結(jié)果經(jīng)UVA聯(lián)合UVB照射12周后,SD大鼠具備皮膚光老化模型的臨床表現(xiàn)、組織病理、超微結(jié)構(gòu)及生化指標(biāo)的改變,提示造模成功。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中的造模關(guān)健因素簡(jiǎn)便易行,經(jīng)濟(jì)可靠,可復(fù)制性強(qiáng),為光老化動(dòng)物模型的復(fù)制建立了一種實(shí)用的方法 。 更多還原

【關(guān)鍵詞】 光老化； 動(dòng)物模型； HE染色； 超微結(jié)構(gòu)；

【文內(nèi)圖片】

SD 大鼠皮膚外觀( 正常對(duì)照組; 模型組)

SD 大鼠皮膚組織病理改變 HE ×200( 正常對(duì)照組; 模型組)

SD 大鼠皮膚中Ⅰ型膠原表達(dá) SP ×200( 正常對(duì)照組; 模型組)

SD 真皮膠原的掃描電鏡表現(xiàn) SEM ×600( 正常對(duì)照組; 模型組)

SD 真皮膠原的透射電鏡表現(xiàn) TEM ×1 500( 正常對(duì)照組; 模型組)

【基金】 2008年云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究面上項(xiàng)目(2008ZC115M)

紅景天多糖對(duì)長(zhǎng)波紫外線致大鼠氧化損傷的保護(hù)作用

Protective Effect of Rhodiola Rosea Polysaccharide on UVA-induced Oxidative Damage in Rats

環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué) , Journal of Environmental & Occupational Medicine,
 
2012年01期
 

【作者】 黃冰洋； 魏海； 周權(quán)明； 郭婧； 鐘麗婷； 沈楠； 姜艷霞；

【Author】 HUANG Bing-yang,WEI Hai,ZHOU Quan-ming,GUO Jing,ZHONG Li-ting,SHEN Nan,JIANG Yan-xia(School of Basic Medical Science,Jilin Medical College,Jilin,Jilin 132013,China)

【機(jī)構(gòu)】 吉林醫(yī)藥學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院；

【摘要】 [目的]探討紅景天多糖對(duì)長(zhǎng)波紫外線(ultraviolet A,UVA)輻照大鼠損傷的防護(hù)效果。[方法]用紅景天多糖干預(yù)UVA輻射大鼠,檢測(cè)各組血清、肝臟勻漿中超氧化物歧化物(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH),丙二醛(malondialdehyde,MDA)及羥自由基,觀察紅景天多糖的防護(hù)效果。[結(jié)果]981.71 J/cm2 UVA輻射組血清中SOD、GSH、抑制羥自由基能力明顯低于正常對(duì)照組(P<0.05),MDA含量明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05)。經(jīng)高劑量紅景天多糖干預(yù)的UVA輻射組血清中GSH和抑制羥自由基能力明顯高于UVA輻射組(P<0.05),MDA含量明顯低于UVA輻射組(P<0.05);低劑量組MDA含量明顯低于UVA輻射組(P<0.05),抑制羥自由基能力明顯高于UVA輻射組(P<0.05)。肝組織勻漿中,UVA輻射組SOD活性、抑制羥自由基能力明顯低于正常對(duì)照組(P<0.05);高劑量組SOD活性、抑制羥自由基能力明顯高于UVA輻射組(P<0.05),M... 更多還原

【關(guān)鍵詞】 紅景天； 多糖； 長(zhǎng)波紫外線； 氧化損傷；

【文內(nèi)圖片】

【基金】 吉林醫(yī)藥學(xué)院大學(xué)生科研基金(編號(hào):200903)

紫外線對(duì)白念珠菌生長(zhǎng)的影響

Effects of Ultraviolet on the Growth of Candida Albicans

【作者】 張蕾；

【導(dǎo)師】 程波；

【作者基本信息】 福建醫(yī)科大學(xué)， 皮膚病與性病學(xué)， 2012， 碩士

【摘要】 目的比較白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株CAF-2經(jīng)不同波長(zhǎng)紫外線照射后，其菌絲形成率及在系統(tǒng)感染小鼠模型中致病力的差異，探討紫外線在抑制白念珠菌活性中的作用，旨在尋找白念珠菌最敏感的紫外線波段，為今后研發(fā)出更高效、低毒的新型光療方法提供理論依據(jù)。方法1、設(shè)置實(shí)驗(yàn)組UVA組、UVB組及對(duì)照組三組，UVA照射劑量0.5、1.0、1.5、2.0、3.0J/cm~2；UVB照射劑量0.5、1.0、1.5、2.0、3.0J/cm~2；對(duì)照組未照射紫外線，實(shí)驗(yàn)組隔天照射一次，共一周。2、將相同劑量（能抑制白念珠菌生長(zhǎng)的前一組劑量）的UVA、UVB照射后及對(duì)照組的白念珠菌加入RPMI1640培養(yǎng)基(含NCS)置37℃水浴箱培養(yǎng)3小時(shí)進(jìn)行菌絲誘導(dǎo)，高倍鏡下觀察菌絲形成情況。3、建立系統(tǒng)性白念珠菌感染小鼠模型，比較各組小鼠脾腎組織菌落形成單位(CFU)計(jì)數(shù)的差異。結(jié)果1、UVA組與對(duì)照組相比菌落偏少，不同劑量間變化不大；UVB組與對(duì)照組相比菌落明顯減少，組內(nèi)隨著照射劑量增加，菌落明顯變少；UVA組最高劑量3.0J/cm~2仍有菌落生長(zhǎng)，UVB組2.0J/cm~2即無(wú)菌落生長(zhǎng)；對(duì)已形成菌落且未經(jīng)紫外線照射的培養(yǎng)皿予2.0J/cm~2UVB照射，菌落不再生長(zhǎng)。2、UVA1.5、UVB1.5J/cm~2照射后的白念珠菌及對(duì)照組白念珠菌菌絲形成率比較（(?)±S，%）分別為：無(wú)照光組菌絲形成率（88.50±5.56），，UVA組（76.58±6.87），UVB組（22.35±8.90），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、成功建立系統(tǒng)性白念珠菌感染小鼠模型，腎組織培養(yǎng)見酵母樣菌落生長(zhǎng)。4、脾腎組織菌落形成單位結(jié)果：各觀察時(shí)間點(diǎn)小鼠脾腎組織CFU：無(wú)照光組>UVA組>UVB組，無(wú)照光組與UVA組，UVB組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P<0.05)。結(jié)論紫外線能抑制白念珠菌生長(zhǎng)；UVB輻射劑量和白念珠菌生長(zhǎng)受限成正比，劑量越大，白念珠菌生長(zhǎng)受限越大；相同劑量下UVB比UVA更能抑制白念珠菌活性，白念珠菌對(duì)UVB的敏感性明顯強(qiáng)于UVA，28℃時(shí)UVB照射劑量≥2.0J/cm~2能抑制白念珠菌生長(zhǎng)。 更多還原

【關(guān)鍵詞】 白念珠菌； 紫外線； 菌絲形成率； 念珠菌��； 小鼠模型；

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第一次照光UVA組和對(duì)照組（劑量依次為UVA0.5、1.0、1.5、2.0、3.0J/cm2）

第三次照光UVA組和對(duì)照組

第一次照光UVB組和對(duì)照組（劑量依次為UVB0.5、1.0、1.5、2.0、3.0J/cm2）

第二次照光UVB組和對(duì)照組

第三次照光UVB組和對(duì)照組

對(duì)已形成菌落的培養(yǎng)皿照射2.0J/cm2的UVB，觀察一周見菌落表面干燥，光澤度減小，未見變大

對(duì)照組菌絲形成圖像（×400）

網(wǎng)絡(luò)出版投稿時(shí)間】2012-10-24

Caspase-3、Bax、Bcl-2和Beclin-1在慢性紫外線損傷小鼠模型表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)及意義

Analyze the Expression and Significant of Caspase-3、Bax、Bcl-2and Beclin-1in Epidermal Keratinocytes of Chronic UV-damaged Mice

【作者】 王瑩；

【導(dǎo)師】 周之海；

【作者基本信息】 天津醫(yī)科大學(xué)， 皮膚病與性病學(xué)， 2012， 碩士

【摘要】 隨著全球環(huán)境的劇烈變化,人類生存活動(dòng)受到紫外線輻射(Ultraviolet, UV)的威脅日益加劇,皮膚在接受慢性紫外線照射過程中可能出現(xiàn)皮膚粗糙、皺紋形成、彈性下降、色素沉著增多等,甚至可能引起各種良性或惡性腫瘤等。近年來(lái)越來(lái)越多的學(xué)者致力于慢性UV損傷的研究,但其與凋亡和自噬的關(guān)系仍未明確。目的完善建立慢性UV損傷小鼠模型。觀察慢性紫外線損傷對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠背部皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及Bax、Bcl-2、Beclin-1等凋亡與自噬相關(guān)蛋白表達(dá)強(qiáng)度的變化,分析其生物學(xué)意義。方法采用UV治療儀(UVA+UVB)光源對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行照射,完善建立慢性UV損傷小鼠模型。UV照射劑量從最小紅斑量(UVB0.07J/cm2,UVA0.7J/cm2)開始,每周增加0.5個(gè)紅斑量,1次/d；每周照射5天,共9周。UVB總劑量達(dá)9.45J/cm2,UVA總劑量達(dá)94.5J/cm2。通過肉眼觀察、組織學(xué)觀察、顯微鏡下小鼠表皮厚度的測(cè)量及膠原纖維、彈力纖維特殊染色等方法發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠背部UV照光部位皮膚的臨床表現(xiàn)和組織學(xué)改變與慢性UV損傷的人類皮膚較為吻合,確定慢性... 更多還原

【關(guān)鍵詞】 紫外線； 角質(zhì)形成細(xì)胞； 慢性UV損傷； Bax； Bcl-2； Beclin-1；

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SD大鼠光老化模型中氧化性損傷及燈盞花素的保護(hù)作用

Effect of breviscapin inhibiting oxidative stress in the skin of SD rat photoaging model

中國(guó)老年學(xué)雜志 , Chinese Journal of Gerontology,
 編輯部郵箱,
2012年06期
 

【作者】 楊汝斌； 萬(wàn)屏； 劉玲； 何黎；

【Author】 YANG Ru-Bin,WAN Ping,LIU Ling,et al. The First People′s Hospital of Kunming,Kunming 650010,Yunnan,China

【機(jī)構(gòu)】 大理學(xué)院附屬醫(yī)院； 昆明醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院皮膚科；

【摘要】 目的探討燈盞花素抗光老化的作用機(jī)制,為防治光老化性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 SD大鼠隨機(jī)分成6組,模擬日光中UV(UVA+UVB)長(zhǎng)期照射,造成皮膚光老化模型。觀察皮膚的組織結(jié)構(gòu)和膠原纖維改變;測(cè)定各組SD大鼠皮膚中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、羥脯氨酸(HYP)含量。結(jié)果燈盞花素中、高劑量組大鼠皮膚紅斑、脫屑、皺紋等光老化改變明顯比模型組輕。燈盞花素低、中、高劑量組皮膚光老化病理改變逐漸減輕。模型對(duì)照組SD大鼠皮膚組織中SOD、GSH-Px活性明顯降低,HYP含量顯著減少,MDA含量明顯增加(P<0.01);燈盞花素中、高劑量組的皮膚組織中SOD、GSH-Px活性和HYP含量明顯增高而MDA降低(P<0.01)。結(jié)論燈盞花素可通過抑制氧自由基的生成,降低SOD及GSH-Px消耗,提高SOD及GSH-Px活力,抑制MDA的合成和含量升高,從而減少紫外線引起的氧化損傷,發(fā)揮其抗光老化作用。 更多還原

【關(guān)鍵詞】 燈盞花素； 光老化； 羥脯氨酸； 超氧化物歧化酶； 過氧化物酶； 丙二醛；

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SD 大鼠皮膚外觀

SD 大鼠皮膚組織病理改變( HE，×200)

【基金】 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究面上項(xiàng)目(2008ZC115M)

1320nmND：YAG激光治療皮膚光老化的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究

【作者】 尚君蘭；

【導(dǎo)師】 李付廣；

【作者基本信息】 鄭州大學(xué)， 免疫學(xué)， 2012， 碩士

【摘要】 背景與目的皮膚光老化主要指人的皮膚受紫外線等外界環(huán)境因素的影響出現(xiàn)衰老的現(xiàn)象,主要表現(xiàn)為皮膚粗糙、皺紋色斑出現(xiàn)等,不僅影響一個(gè)人的外表,而且與皮膚癌有正相關(guān)性,它的發(fā)病機(jī)制目前不完全清楚。皮膚光老化的治療方法較多,YAG激光治療是近幾年發(fā)展起來(lái)的除皺緊膚術(shù),具有創(chuàng)傷小,臨床愈合快的特點(diǎn),在臨床上治療皮膚光老化取得了不錯(cuò)的療效,但其具體治療機(jī)制目前并不清楚。本研究通過大鼠皮膚光老化動(dòng)物模型,進(jìn)一步研究皮膚光老化和YAG激光治療的機(jī)制,以期對(duì)皮膚光老化的臨床治療有所幫助。方法選取雄性SD大鼠40只作為研究對(duì)象,隨機(jī)選取10只作為對(duì)照組,其余30只復(fù)制皮膚光老化模型,模型復(fù)制成功后再隨機(jī)分成三組(光老化組、激光治療組、自然恢復(fù)組),每只大鼠皮膚處理部位分別做組織病理HE染色,并提取RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,做SYBR Green Ⅰ real time PCR檢測(cè)四組大鼠皮膚中β-actin、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、CTGF、TGF-β1的mRNA表達(dá)情況。結(jié)果肉眼觀察：光老化組大鼠背部皮膚增厚,粗糙,出現(xiàn)較深皺紋,經(jīng)YAG激光治療后大鼠皮膚光老化癥狀減輕,而自然恢復(fù)組變化不明顯；顯微鏡觀察：光老化組大鼠皮膚HE染色,表皮紊亂,疏松增厚、厚薄不均,真皮膠原纖維斷裂、排列扭曲紊亂,有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),YAG激光治療后,癥狀明顯改善；與對(duì)照組相比,光老化組Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、CTGF、TGF-β1mRNA表達(dá)明顯降低,YAG激光治療后,這些基因mRNA表達(dá)明顯升高,激光治療組與自然恢復(fù)組相比,除CTGF外,Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、TGF-p的mRNA表達(dá)均明顯升高。結(jié)論1320nmND:YAG激光治療大鼠皮膚光老化效果顯著,其治療機(jī)制可能與其能夠刺激皮膚中Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、TGF-β1mRNA表達(dá)升高有關(guān)。 更多還原

【關(guān)鍵詞】 光老化； 動(dòng)物模型； Ⅰ型膠原； Ⅲ型膠原； 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1； 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子； 大鼠；

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網(wǎng)絡(luò)出版投稿人】 鄭州大學(xué)

網(wǎng)絡(luò)出版投稿時(shí)間】2012-07-10 【網(wǎng)絡(luò)出版年期】2012年 10期

分類號(hào)】R758.1

【下載模擬干細(xì)胞Niche同步實(shí)現(xiàn)表皮干細(xì)胞擴(kuò)增與皮膚替代物構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)研究

Mimicking Stem Cell Niche for Amplification of ESCs and Construction of Skin Substitute in One-step

【作者】 紀(jì)世召；

【導(dǎo)師】 夏照帆；

【作者基本信息】 第二軍醫(yī)大學(xué)， 外科學(xué)， 2012， 博士

【摘要】 研究背景表皮干細(xì)胞主要位于皮膚基底層和毛囊隆突部，由于細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較少且增殖慢，因此如何快速擴(kuò)增表皮干細(xì)胞一直是皮膚組織工程研究中的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。目前主要利用表皮干細(xì)胞對(duì)基底膜的顯著黏附特性進(jìn)行分離、純化，采用二維平面的培養(yǎng)方式進(jìn)行培養(yǎng)，同時(shí)為了保證干細(xì)胞的單一及清除分化增殖能力不強(qiáng)的細(xì)胞，傳代擴(kuò)增時(shí)需要首先將基底膜的主要成份之一Ⅳ型膠原平鋪于培養(yǎng)皿，但仍然難以避免多次傳代培養(yǎng)后細(xì)胞克隆形成率明顯下降、細(xì)胞逐漸分化、增殖活性降低等缺點(diǎn)，而且由于表皮干細(xì)胞固有的慢增殖特性，傳統(tǒng)的二維培養(yǎng)方式難以在較短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增足量的細(xì)胞。微載體培養(yǎng)是一種大規(guī)模擴(kuò)增貼壁依賴型細(xì)胞的技術(shù)，提供了細(xì)胞單層培養(yǎng)時(shí)不具備的三維立體空間，模擬了細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境，不僅可以大量擴(kuò)增細(xì)胞，而且有利于維持細(xì)胞表型、防止分化，現(xiàn)已廣泛地應(yīng)用于生物制藥領(lǐng)域。最近，有研究者采用微載體培養(yǎng)技術(shù)擴(kuò)增干細(xì)胞取得良好效果，如以Cultispher-S、Cytodex、Solohill、Matrigel-coated cellulose等擴(kuò)增間充質(zhì)干細(xì)胞及胚胎干細(xì)胞，不僅在短時(shí)間內(nèi)可大量擴(kuò)增，而且維持其多向分化潛能。因此我們?cè)O(shè)想，采用微載體技術(shù)為表皮干細(xì)胞提供更適于其生長(zhǎng)、增殖的三維立體空間。然而，目前研制的微載體多以生物材料人工合成，盡管有研究者采用表面改良或修飾等仿生技術(shù)處理，但缺乏基底膜結(jié)構(gòu)，仍難以模擬表皮干細(xì)胞生長(zhǎng)的體內(nèi)niche微環(huán)境，不利于表皮干細(xì)胞的粘附、增殖。研究表明人羊膜是理想的細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增載體，具有天然的人體最厚的基底膜，其基本結(jié)構(gòu)與皮膚、角膜基底膜相似，此外基質(zhì)中含有豐富的生長(zhǎng)因子，如NGF、HGF、KGF、bFGF、TGF-β1、EGF等，可以在體外模擬干細(xì)胞生長(zhǎng)的niche微環(huán)境，因此羊膜被用于角膜緣干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增和移植。本研究利用羊膜固有的生物學(xué)特性，制備具有完整基底膜結(jié)構(gòu)和生物學(xué)活性的三維立體微粒羊膜，以其作為一種天然的新型微載體，結(jié)合旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行表皮干細(xì)胞的體外培養(yǎng)與擴(kuò)增，評(píng)價(jià)其培養(yǎng)、擴(kuò)增表皮干細(xì)胞的效果及維持干細(xì)胞特性的作用。在此基礎(chǔ)上構(gòu)建含表皮干細(xì)胞的皮膚替代物，并評(píng)估其作為皮膚替代物修復(fù)全層皮膚缺損的可行性。研究方法1．羊膜微載體的制備及特征檢測(cè)1.1羊膜獲取及微載體制備經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，產(chǎn)婦知情同意，選擇肝炎病毒抗體、梅毒抗體及HIV均為陰性的剖腹產(chǎn)婦的胎盤組織，鈍性分離絨毛膜，剝離羊膜。采用反復(fù)凍融結(jié)合DNA酶消化法去除羊膜細(xì)胞，片狀羊膜經(jīng)冷凍裂解技術(shù)均質(zhì)化制備微粒，然后在真空密閉條件下冷凍干燥，通過金屬篩網(wǎng)篩選過濾，獲得300-600μm的微粒羊膜。1.2羊膜微載體物理特征及組織結(jié)構(gòu)檢測(cè)采用掃描電鏡觀察mAM的形狀及大小，石蠟包埋切片HE染色及表面HE染色觀察羊膜細(xì)胞的去除情況及組織結(jié)構(gòu)，免疫組化染色和透射電鏡觀察mAM保留的基底膜結(jié)構(gòu)。1.3生長(zhǎng)因子及DNA含量分析Western blotting、Elisa測(cè)定mAM基質(zhì)中的生長(zhǎng)因子含量：EGF、bFGF、HGF、TGF-β1、KGF，NGF。DNA試劑盒測(cè)定DNA含量，Hoechst染色觀察mAM表面殘存DNA情況。1.4mAM組織相容性檢測(cè)通過mAM浸提液實(shí)驗(yàn)觀察mAM基質(zhì)對(duì)細(xì)胞的毒性，大鼠皮下移植實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)mAM的組織相容性，Masson三色染色檢測(cè)羊膜膠原基質(zhì)降解過程。2．mAM培養(yǎng)、擴(kuò)增表皮干細(xì)胞并構(gòu)建皮膚替代物2.1mAM培養(yǎng)、擴(kuò)增表皮干細(xì)胞分離培養(yǎng)表皮干細(xì)胞，以mAM作為微載體，結(jié)合旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)擴(kuò)增表皮干細(xì)胞，定期取材標(biāo)本以hoechst33342熒光標(biāo)記，熒光顯微鏡下觀察表皮干細(xì)胞黏附增殖情況。2.2表皮干細(xì)胞增殖活性及特性檢測(cè)以常規(guī)二維培養(yǎng)作為對(duì)照，采用CCK-8測(cè)定微載體培養(yǎng)、擴(kuò)增表皮干細(xì)胞的增殖活性，免疫組化檢測(cè)表皮干細(xì)胞的表面特征標(biāo)記：β1整合素、CK19、P63及CK10的表達(dá)情況。2.3構(gòu)建并擴(kuò)增含表皮干細(xì)胞的皮膚替代物以mAM作為真皮支架，在三維旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)體系下，種植表皮干細(xì)胞，構(gòu)建含表皮干細(xì)胞的皮膚替代物，借助“球碰球”傳接技術(shù)，通過加入新的羊膜微載體擴(kuò)增皮膚替代物。行組織切片HE染色及電鏡掃描觀察含表皮干細(xì)胞皮膚替代物的形態(tài)特征。2.4皮膚替代物移植全層皮膚缺損創(chuàng)面以裸鼠全層皮膚缺損創(chuàng)面為動(dòng)物移植模型，將構(gòu)建好的含表皮干細(xì)胞的皮膚替代物移植創(chuàng)面，觀察其修復(fù)全層皮膚缺損創(chuàng)面的效果，定期測(cè)定創(chuàng)面愈合率，并行組織學(xué)檢測(cè)。研究結(jié)果1.mAM物理特性及DNA含量通過物理反復(fù)凍融3次，輔助DNase酶消化可完全去除羊膜中的細(xì)胞及核酸，利用冷凍裂解技術(shù)可制備mAM，其外觀白色、半透明狀，呈六面體，形狀不規(guī)則，大小在300-600μm之間，厚度為80-250μm。mAM基質(zhì)中核酸基本去除干凈，去除率達(dá)85±4.15%。2.mAM組織結(jié)構(gòu)及生長(zhǎng)因子檢測(cè)mAM基底膜結(jié)構(gòu)保存完整，羊膜上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等去除完全，膠原組織連續(xù)、排列規(guī)則，可見層粘連蛋白、Ⅳ型膠原蛋白連續(xù)分布，貫穿于整個(gè)基底膜，同時(shí)基質(zhì)中保留了多種生長(zhǎng)因子：NGF、HGF、KGF、bFGF、TGF-β1、EGF。3.mAM浸提液毒性及組織相容性評(píng)價(jià)mAM浸提液細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)不含任何毒性，而且以其培養(yǎng)細(xì)胞增殖速度明顯高于對(duì)照組。大鼠皮下移植發(fā)現(xiàn)mAM組織相容性良好，移植后未見明顯急性炎癥或排斥反應(yīng)，14d時(shí)顯示許多微血管形成，30d時(shí)mAM開始降解，90d時(shí)基本降解完全，與周圍組織融合，膠原纖維排列整齊。4.mAM培養(yǎng)、擴(kuò)增表皮干細(xì)胞表皮干細(xì)胞種植后半小時(shí)即可見粘附于mAM表面，呈立體三維生長(zhǎng)。培養(yǎng)第3天開始mAM培養(yǎng)擴(kuò)增細(xì)胞相對(duì)增殖活性即明顯高于培養(yǎng)皿，培養(yǎng)7、14天時(shí)，相對(duì)增殖活性分別為326±28%、535±47%，遠(yuǎn)高于常規(guī)的培養(yǎng)皿培養(yǎng)方法（232±21%，307±32%，P＜0.05）。同時(shí)干細(xì)胞特征檢測(cè)可見表皮干細(xì)胞高表達(dá)β1整合素、K19及P63。5.構(gòu)建并擴(kuò)增含表皮干細(xì)胞的皮膚替代物以mAM為真皮支架，表皮干細(xì)胞為種子細(xì)胞可成功構(gòu)建含表皮種子細(xì)胞的活性皮膚替代物，培養(yǎng)14d表皮干細(xì)胞已形成2-3層。利用“球碰球”傳接技術(shù)，通過加入新的mAM即可實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)增含表皮干細(xì)胞的皮膚替代物。6.皮膚替代物移植修復(fù)全層皮膚缺損創(chuàng)面移植后2周，可見ESC-mAM組新生表皮形成，而對(duì)照組可見殘存創(chuàng)面，創(chuàng)面收縮明顯；移植后4周可見ESC-mAM、mAM組愈合表皮下微粒充填真皮基質(zhì)，ESC-mAM組伴有表皮乳突樣結(jié)構(gòu)形成，類似正常皮膚，而對(duì)照組表皮細(xì)胞基底處平整未見乳突樣結(jié)構(gòu)形成。研究結(jié)論1、反復(fù)凍融輔助DNA酶消化法可有效去除羊膜細(xì)胞成份，結(jié)合冷凍裂解可以制備微粒羊膜，其不僅具備一般微載體的特性，而且具有完整的基底膜結(jié)構(gòu)，同時(shí)基質(zhì)中保存了多種生物活性物質(zhì)。2、微粒羊膜作為一種新型的微載體，可以為表皮干細(xì)胞的體外培養(yǎng)、擴(kuò)增提供近似體內(nèi)生理的Niche微環(huán)境，可在迅速擴(kuò)增表皮干細(xì)胞的同時(shí)，維持干細(xì)胞增殖活性，防止其分化。3、微粒羊膜具備良好的組織相容性，可以作為真皮支架快速構(gòu)建含表皮干細(xì)胞的皮膚替代物，并修復(fù)全層皮膚缺損創(chuàng)面，改善創(chuàng)面愈合質(zhì)量。即mAM可以同步完成表皮干細(xì)胞的大量擴(kuò)增與皮膚替代物的快速構(gòu)建。4、通過加入新的羊膜微載體的方式即可以實(shí)現(xiàn)含表皮干細(xì)胞皮膚替代物的快速擴(kuò)增，縮短了體外培養(yǎng)時(shí)間，改善了皮膚替代物的傳統(tǒng)構(gòu)建模式，提高了皮膚替代物從實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建到臨床應(yīng)用的效率，為促進(jìn)皮膚替代物向臨床轉(zhuǎn)化與應(yīng)用提供新方法和新思路。

  本文關(guān)鍵詞：Caspase-3、Bax、Bcl-2和Beclin-1在慢性紫外線損傷小鼠模型表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。