本文關(guān)鍵詞： 皮膚 角蛋白細(xì)胞 細(xì)胞分離 平板形成克隆實(shí)驗(yàn)　出處：《臨床皮膚科雜志》2016年06期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的:探索一種簡(jiǎn)單快速無(wú)需分開(kāi)表皮和真皮即可分離得到人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)并進(jìn)行體外培養(yǎng)的方法。方法:取皮膚組織切碎后,先用含分散酶和Ⅰ型膠原酶的消化液37℃浸泡60 min,然后加入胰酶消化30 min,再加入DNA酶繼續(xù)消化5 min以獲得單個(gè)細(xì)胞;加入含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)基中和消化,用100μm細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾,離心后,用含10 mmol/L Rock蛋白激酶抑制劑的DMEM培養(yǎng)基(含10%FBS)培養(yǎng),3 d后換成Cn T07培養(yǎng)基。每2 d換液1次,培養(yǎng)過(guò)程中,觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。結(jié)果:與傳統(tǒng)分散酶分離表皮KC方法相比,用該方法分離得到的表皮KC數(shù)量較多,第1代以克隆形式生長(zhǎng)并且生長(zhǎng)較快;傳代后細(xì)胞呈角質(zhì)細(xì)胞形態(tài),主要表達(dá)未分化的角質(zhì)蛋白K5,生長(zhǎng)曲線(xiàn)和形成單細(xì)胞克隆能力和傳統(tǒng)分離的表皮KC相近,并稍?xún)?yōu)于傳統(tǒng)方法。采用新方法成功地從帶毛發(fā)的頭皮組織分離出大量的表皮KC并表達(dá)正常的角質(zhì)蛋白。結(jié)論:該法得到的表皮KC形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)及形成單克隆的能力都接近或優(yōu)于傳統(tǒng)方法。該方法簡(jiǎn)單高效,具有較高的實(shí)用價(jià)值,尤其為以后臨床上大量分離患者的表皮KC用于細(xì)胞治療奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to explore a simple and rapid method for isolation and culture of human epidermal keratinocytes without separating epidermis from dermis. The cells were digested at 37 鈩，

本文編號(hào)：1451288