本文關(guān)鍵詞：鋅指蛋白PRDM5在黑色素瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移中的作用及分子機(jī)制

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【摘要】：背景惡性黑色素瘤多發(fā)于皮膚,轉(zhuǎn)移性很高,是人類皮膚癌中致死率最高的腫瘤,嚴(yán)重威脅人類健康,因此進(jìn)一步研究黑色素瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,尋找新的分子治療靶點(diǎn),對(duì)于提高黑色素瘤的治療效率有重要意義。PR區(qū)域蛋白家族(PRDI-BF1 and RIZ domain containing,PRDM)屬于鋅指蛋白家族,是一類組織特異性的轉(zhuǎn)錄因子,在細(xì)胞分化和惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中起重要作用,其家族大多數(shù)成員為原癌基因或抑癌基因,與癌癥發(fā)生有密切關(guān)系。PRDM5(又名PFM2)是該家族中新發(fā)現(xiàn)的一員,在多種腫瘤組織中呈低表達(dá),與腫瘤細(xì)胞凋亡有密切關(guān)系,但是其在黑色素瘤中的功能尚缺乏研究。目的1.分析PRDM5對(duì)黑色素瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響;2.研究PRDM5促進(jìn)黑色素瘤轉(zhuǎn)移中的分子機(jī)制。方法1.PRDM5對(duì)黑色素瘤細(xì)胞B16F10增殖能力的影響將構(gòu)建的PRDM5過(guò)表達(dá)和基因沉默質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至黑色素瘤細(xì)胞B16F10細(xì)胞,48h后將細(xì)胞接種至96孔板,MTT檢測(cè)PRDM5過(guò)表達(dá)和基因沉默對(duì)細(xì)胞增殖的影響。將PRDM5基因沉默質(zhì)粒共轉(zhuǎn)至黑色素瘤細(xì)胞,篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞,大量培養(yǎng)并凍存?zhèn)溆�。小鼠皮下注射PRDM5基因沉默穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞,解剖小鼠并稱量腫瘤節(jié)重量,統(tǒng)計(jì)分析PRDM5基因沉默對(duì)黑色素瘤細(xì)胞體內(nèi)增殖的影響。2.PRDM5對(duì)黑色素瘤細(xì)胞B16F10遷移和侵襲能力的影響將prdm5過(guò)表達(dá)和基因沉默質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染細(xì)胞,48h后換無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)過(guò)夜,劃出痕跡并分別在不同時(shí)間測(cè)量劃痕的寬度,以計(jì)算出細(xì)胞的遷移能力。使用corning公司的transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化,以nih-3t3細(xì)胞的條件培養(yǎng)液作為趨化因子。培養(yǎng)24h后,去除上層的細(xì)胞,遷移穿過(guò)的細(xì)胞通過(guò)0.5%結(jié)晶紫染色后計(jì)數(shù)。小鼠尾靜脈注射prdm5基因沉默穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞,解剖小鼠,觀察其主要內(nèi)臟器官腫瘤轉(zhuǎn)移情況,計(jì)算肺部腫瘤數(shù),研究prdm5基因沉默對(duì)細(xì)胞在體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的影響。3.prdm5促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制裂解prdm5基因沉默穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞,提取蛋白質(zhì),同時(shí)將prdm5過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至黑色素瘤細(xì)胞,裂解細(xì)胞提蛋白,免疫印跡檢測(cè)細(xì)胞裂解液中jnk、erk和wnt信號(hào)通路中相關(guān)蛋白表達(dá)及活性水平,通過(guò)加入相應(yīng)抑制劑和sirna等方法,了解細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中有關(guān)的分子機(jī)制。結(jié)果1.prdm5促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞b16f10的增殖通過(guò)mtt法間接檢測(cè)活細(xì)胞數(shù)量,發(fā)現(xiàn)prdm5過(guò)表達(dá)細(xì)胞的數(shù)量明顯多于轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的細(xì)胞。小鼠背部皮下注射prdm5基因沉默穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞,2周后比較腫瘤大小并稱量,發(fā)現(xiàn)來(lái)自prdm5基因沉默(siprdm5)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的腫瘤,不論是大小還是重量都明顯低于sictl穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞引起的腫瘤,說(shuō)明prdm5對(duì)b16f10細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用;2.prdm5促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞b16f10的遷移和侵襲細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),prdm5過(guò)表達(dá)細(xì)胞劃痕最早愈合。細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)計(jì)算穿過(guò)小室細(xì)胞數(shù)量,發(fā)現(xiàn)prdm5基因沉默穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞遷移和侵襲能力最弱。這些結(jié)果表明prdm5促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞遷移和侵襲;3.prdm5通過(guò)mapk/jnk和erk信號(hào)通路促進(jìn)b16f10細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移免疫印跡結(jié)果顯示,PRDM5過(guò)表達(dá)時(shí),細(xì)胞中JNK蛋白表達(dá)及磷酸化水平都明顯上調(diào),ERK磷酸化水平上調(diào),加入抑制劑后磷酸化下調(diào)并且細(xì)胞增殖和侵襲能力也受到抑制,以上結(jié)果都說(shuō)明了,PRDM5主要通過(guò)激活JNK和ERK信號(hào)通路進(jìn)而促進(jìn)B16F10細(xì)胞發(fā)生和轉(zhuǎn)移。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PRDM5對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用,并且主要通過(guò)MAPK/JNK和ERK信號(hào)通路調(diào)節(jié)小鼠黑色素瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移,這將為PRDM5在癌癥發(fā)生中的作用提供分子機(jī)制研究基礎(chǔ),最重要的是為臨床治療黑色素瘤提供新的思路。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.5

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1 紀(jì)小龍,徐薪,申明識(shí);黏膜黑色素瘤的常見(jiàn)臨床病理特點(diǎn)[J];診斷病理學(xué)雜志;2002年02期

2 李凌,徐慶中;黑色素瘤高頻超聲表現(xiàn)1例[J];中華超聲影像學(xué)雜志;2002年09期

3 陳燁 ,劉敏賢 ,安秀珍 ,林昌萬(wàn) ,姜影;淚囊黑色素瘤1例報(bào)告[J];吉林醫(yī)學(xué);2003年01期

4 蔡振鑫;黑色素瘤:預(yù)測(cè)致死性特征的30年臨床經(jīng)驗(yàn)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2004年02期

5 Helsing P.,Loeb M. ,馮義國(guó);小直徑黑色素瘤:挪威黑色素瘤隨訪項(xiàng)目[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊(cè));2005年04期

6 Murray C.S.;Stockton D.L.;Doherty V.R. ;黨倩麗;;增厚的黑色素瘤:長(zhǎng)久面對(duì)的挑戰(zhàn)[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊(cè));2005年08期

7 High W.A. ,Quirey R.A. ,Guillén D.R ,R.S. Taylor,劉超;7例甲單元原位黑色素瘤的臨床表現(xiàn)、組織病理和臨床預(yù)后[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊(cè));2005年02期

8 Curtin J.A.;Fridlyand J.;Kageshita T. ;B.C. Bastian;黨倩麗;;黑色素瘤不同位置的基因改變[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊(cè));2006年02期

9 Blaise S.;Rumeau-Trividic M.;Le Brun V.;周少娜;;黑色素瘤伴亞急性原發(fā)性纖維蛋白溶解[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊(cè));2006年04期

10 Weatherhead S.C.;Lawrence C.M. ;潘敏;;黑色素瘤篩查診所:檢出更多的黑色素瘤還是使患者消除顧慮?[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊(cè));2006年Z1期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李東;謝遵江;賀業(yè)春;劉穎;劉麗;;在黑色素瘤組織中免疫細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第八屆組織學(xué)與胚胎學(xué)專業(yè)青年研討會(huì)論文集[C];2004年

2 安菊生;吳令英;李寧;俞高志;劉麗影;;原發(fā)女性生殖道黑色素瘤42例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 陳陸霞;孫保存;張?jiān)娢?賀忠江;;眼內(nèi)移植性黑色素瘤微循環(huán)模式的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

4 楊志濤;陸洪光;;死亡受體和黑色素瘤的抗凋亡作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

5 鐘傳華;楊文治;王曉蘭;;黑色素瘤與痔診治失誤的啟迪[A];2012醫(yī)學(xué)前沿——中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)肛腸分會(huì)第十四次全國(guó)肛腸學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文精選[C];2012年

6 郭軍;;黑色素瘤最新進(jìn)展和未來(lái)趨勢(shì)[A];中國(guó)腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國(guó)腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 孫保存;張?jiān)娢?劉志勇;張丹芳;郭華;;多西環(huán)素影響黑色素瘤微循環(huán)模式的形成[A];第四屆中國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

8 郭偉;;口腔頜面-頭頸黏膜黑色素瘤的個(gè)體化診治與思考[A];中國(guó)腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國(guó)腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

9 孫保存;張丹芳;張?jiān)娢?郭華;張文治;趙秀蘭;;缺血缺氧對(duì)黑色素瘤局部浸潤(rùn)的相關(guān)分子機(jī)制影響的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

10 唐亮;;手術(shù)治療足跟底部皮膚黑色素瘤6例臨床分析[A];2013年全國(guó)激光醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)聯(lián)合會(huì)議暨2013年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)整形美容學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2013年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王倫邋王晨;早期發(fā)現(xiàn)黑色素瘤可挽救生命[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

2 倪方;黑色素瘤早治療可痊愈（三）[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2008年

3 健康時(shí)報(bào)特約記者 管九蘋(píng);澳大利亞免費(fèi)普查黑色素瘤[N];健康時(shí)報(bào);2010年

4 實(shí)習(xí)生 易立;黑色素瘤,是否無(wú)藥可治？[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

5 記者 張e，

本文編號(hào)：1231620