本文關(guān)鍵詞：胸腺素β4對毛囊重建的作用研究

  更多相關(guān)文章： 胸腺素β4 毛囊重建 毛囊再生 纖連蛋白 小室模型

【摘要】：研究背景：脫發(fā)是困擾許多人的問題,但數(shù)十年來其治療少有突破。目前的脫發(fā)治療藥物多是通過減緩毛囊損失或刺激毛發(fā)增長來發(fā)揮作用,而毛發(fā)移植也只是將其他部位的毛囊移到缺損部,尚不能從根本上解決問題。因此,促進毛囊再生才是解決脫發(fā)的關(guān)鍵。國內(nèi)外關(guān)于毛囊重建的研究表明,毛囊重建的影響因素主要有表皮和真皮來源的種子細胞及其微環(huán)境。目前,采用鼠來源的種子細胞能成功重建毛囊,而大多數(shù)文獻表明采用人來源的種子細胞尚不能實現(xiàn)毛囊重建。胸腺素β 4是由43個氨基酸殘基組成的多肽,最初從胸腺中分離純化獲得,后被發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)分布廣泛。胸腺素D 4在調(diào)節(jié)免疫和神經(jīng)功能方面具有重要作用,也能促進血管生成以及創(chuàng)傷愈合,并促進大小鼠毛發(fā)生長。但是關(guān)于胸腺素β4對人毛囊重建的作用仍了解甚少。本研究運用胸腺素β4體外刺激人來源的毛囊外根鞘細胞和真皮毛乳頭細胞,探討胸腺素β 4在體外對毛囊重建種子細胞的作用；同時,建立毛囊重建小室模型并應(yīng)用此模型評價胸腺素β4對鼠毛囊重建的作用。研究目的：1.檢測胸腺素β 4對體外培養(yǎng)的人毛囊外根鞘細胞和真皮毛乳頭細胞的作用2.構(gòu)建毛囊重建小室模型3.應(yīng)用小室模型評價胸腺素β 4對鼠毛囊重建的作用研究方法和結(jié)果：1.人毛囊外根鞘細胞和人真皮毛乳頭細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定方法：取美容術(shù)后多余頭皮組織,切下含毛乳頭的脂肪層,經(jīng)0.2%的I型膠原酶消化后顯微鏡下挑選水滴樣毛乳頭組織并進行貼壁培養(yǎng)；剩余頭皮組織切成1-2mm細條,于0.25%中性蛋白酶溶液中浸泡過夜,將頭發(fā)拔出后于體視顯微鏡下取毛囊外根鞘中段,胰酶消化后獲取人毛囊外根鞘細胞并接種培養(yǎng)。觀察外根鞘細胞和毛乳頭細胞的細胞形態(tài),并通過免疫熒光染色、流式細胞術(shù)以及特殊染色鑒定人毛囊外根鞘細胞和真皮毛乳頭細胞。結(jié)果：通過顯微解剖法獲得的人毛囊外根鞘細胞具有較強的增殖能力,接種2-3小時后即可發(fā)現(xiàn)有少量細胞貼壁,呈鋪路石狀,符合典型上皮樣細胞特點,7-10天可見細胞融合；免疫熒光染色和流式細胞術(shù)結(jié)果表明人毛囊外根鞘細胞陽性表達Sox9和CD49f等標(biāo)志性基因。應(yīng)用一步酶消化法及水滴狀毛乳頭組織的鏡下挑選獲得的真皮毛乳頭細胞純度較高,受真皮成纖維細胞的污染較少,接種2-3天后可見真皮毛乳頭細胞從毛乳頭組織中遷出,且隨著培養(yǎng)時間的延長,真皮毛乳頭細胞遷出增多,呈長梭形,堿性磷酸酶染色結(jié)果表明該細胞表達毛乳頭細胞的標(biāo)志性基因堿性磷酸酶。2.檢測胸腺素β4對體外培喬的人毛囊外根鞘細胞的作用方法：體外培養(yǎng)人毛囊外根鞘細胞的過程中分別向培養(yǎng)基中添加不同濃度的胸腺素β4,終濃度分別為10ng/mL, 100ng/mL和1000ng/mL,經(jīng)培養(yǎng)24h后觀察其形態(tài)學(xué)改變,獲取細胞并提取RNA,應(yīng)用Real-Time PCR的方法檢測胸腺素β 4對人毛囊外根鞘細胞中毛發(fā)發(fā)育和再生相關(guān)基因的表達。結(jié)果：人毛囊外根鞘細胞經(jīng)不同濃度胸腺素β 4處理后,形態(tài)學(xué)上與未添加藥物的對照組未見明顯差異；添加不同濃度胸腺素β4處理后的人外根鞘細胞中關(guān)于毛囊干細胞標(biāo)志性基因Sox9、 EPCAM、 TCF3,細胞與微環(huán)境相互作用的基因VEGF、 Integrin a 3、Integrin a 5,毛囊再生相關(guān)信號通路中如Wnt、EDA等關(guān)鍵基因Lefl、 EDA、 CCN2、 PDGFA、 Follistatin、 Nfatcl的表達,與未添加藥物的對照組相比未見統(tǒng)計學(xué)差異；各濃度組間未見明顯差異。3.檢測胸腺素β4對體外培養(yǎng)的人真皮毛乳頭細胞的作用方法：體外培養(yǎng)人真皮毛乳頭細胞過程中分別向培養(yǎng)基中添加不同濃度的胸腺素β4,終濃度分別為10ng/mL、 100ng/mL、1000ng/mL,經(jīng)培養(yǎng)24h后觀察其形態(tài)學(xué)改變,獲取細胞并提取RNA,應(yīng)用Real-Time PCR的方法檢測胸腺素β4對人真皮毛乳頭細胞中毛發(fā)發(fā)育和再生相關(guān)基因的表達,對于有明顯改變的基因用Western Blot進行驗證。結(jié)果：人真皮毛乳頭細胞經(jīng)不同濃度胸腺素β 4處理后,形態(tài)學(xué)上與未添加藥物的對照組相比未見明顯差異；添加不同濃度胸腺素β4處理后的人毛乳頭細胞中關(guān)于真皮毛乳頭誘導(dǎo)毛囊再生相關(guān)基因ALP、α-SMA、 ACTG2、 TRPSl、 SERPINF1、 PTGER3,細胞與微環(huán)境相互作用的基因VEGF、HGF、 Laminin5的表達,與未添加藥物的對照組相比未見統(tǒng)計學(xué)差異,且各濃度組間也未見明顯差異。而纖連蛋白(Fibronectin, FN)在添加胸腺素β4的人毛乳頭細胞中的表達較對照組有明顯升高,具有統(tǒng)計學(xué)意義,Western Blot也進一步驗證了FN表達的上調(diào)。4.構(gòu)建毛囊重建小室模型方法：采用直徑lcm的聚乙烯瓶內(nèi)塞作為小室,在裸鼠背部剪一直徑約1cm的全層皮膚缺損創(chuàng)面,將小室植入,縫合小室周邊皮膚以固定。分離C57BL/6新生小鼠的表皮和真皮細胞,混合后注入小室內(nèi)。7天后拆除小室并開始觀察創(chuàng)口部位的毛囊重建情況。30天后對創(chuàng)口部位皮膚取材并進行HE染色,對其形態(tài)結(jié)構(gòu)進行觀察。結(jié)果：裸鼠創(chuàng)口小室植入部位可見毛囊重建,新生毛發(fā)大體觀和鏡下觀與正常無明顯差異,且排列極性、生長密度良好。對部分無毛囊重建的創(chuàng)口分析,發(fā)現(xiàn)模型構(gòu)建中小室植入的位置對毛囊再生的成功具有重要的影響。5.應(yīng)用小室模型評價胸腺素β4對鼠毛囊重建的作用方法：小室模型的建立同上,在重懸細胞時加入不同濃度的胸腺素β4混勻,使其終濃度分別為10ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL并連續(xù)6天在小室中繼續(xù)加入不同濃度的胸腺素β4。7天后拆除小室并開始觀察創(chuàng)口部位的毛囊重建情況。30天后對創(chuàng)口部位皮膚取材并進行HE染色,對其形態(tài)結(jié)構(gòu)進行觀察。結(jié)果：添加不同濃度胸腺素β4的創(chuàng)口部位的毛囊重建情況與未添加藥物的對照組相比無明顯差異,各濃度組間也未見明顯差異。研究結(jié)論：1.胸腺素β4可能通過上調(diào)人真皮毛乳頭細胞中纖連蛋白的表達而作用于毛囊重建。2.小室模型是一個有效的毛囊重建模型；小室植入位置影響毛囊重建小室模型的構(gòu)建效果。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R758.71

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳實;陳質(zhì)庵;;胸腺素治療小兒哮喘免疫狀態(tài)研究[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);1987年03期

2 關(guān)有彥,周偉煒;胸腺素在腫瘤研究方面的新進展[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);2001年03期

3 楊新軍,董巧敏;胸腺素治療特發(fā)性血小板減少性紫癜[J];實用兒科臨床雜志;2005年03期

4 白建剛;饒紅霞;;胸腺素α1臨床應(yīng)用進展[J];中外醫(yī)療;2008年26期

5 A.L.Goldstein;劉士廉;;胸腺素在治療原發(fā)性免疫缺陷病和惡性腫瘤中的應(yīng)用[J];生理科學(xué)進展;1978年02期

6 衛(wèi)仲升;盧君健;;胸腺素臨床應(yīng)用的探討[J];皮防戰(zhàn)線;1980年Z2期

7 方家駒;;胸腺素的作用[J];國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊;1980年02期

8 徐賢秀;胸腺素用于治療免疫缺陷病和癌癥的研究概況[J];江蘇醫(yī)藥;1981年07期

9 張月琴;;“胸腺素”技術(shù)鑒定會在萊陽召開[J];臟器生化制藥;1981年03期

10 李在連;馮永堂;楊堯輝;吳國慶;;豬胸腺素免疫活性的研究——對豬淋巴細胞E受體的激活試驗[J];臟器生化制藥;1981年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 王先遠;金宏;劉佃辛;李培兵;;人胸腺素β4基因表達、純化與鑒定[A];中國營養(yǎng)學(xué)會特殊營養(yǎng)第五屆學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

2 梁炳友;李佑漢;;胸腺素在燒傷臨床應(yīng)用研究[A];全國第三屆燒傷外科學(xué)術(shù)交流會議論文摘要[C];1991年

3 馬鳳龍;崔雪志;傅興倫;劉煥奇;;重組胸腺素α1在大腸桿菌中的表達與活性檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

4 陳黎龍;束剛;朱曉彤;高萍;江青艷;崔志英;高淑靜;傅偉龍;;胸腺素a1對離體培養(yǎng)的雞脾臟淋巴細胞分泌功能及其基因表達的影響[A];中南地區(qū)第六屆生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

5 周宇飛;袁漢英;呂紅;;人超氧化物歧化酶-胸腺素α1在畢赤酵母中的表達、純化與活性檢測[A];2012年中國青年遺傳學(xué)家論壇會議文集[C];2012年

6 王臣;趙戰(zhàn)勤;牛明福;丁軻;劉一塵;李銀聚;吳庭才;張春杰;程相朝;;胸腺素TP5-囊素樣肽融合基因的克隆、表達及活性檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

7 薛曉暢;顏真;張英起;;胸腺素a1串聯(lián)體基因的克隆表達、產(chǎn)物純化及其生物學(xué)活性研究[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 馬志高;胸腺素的臨床應(yīng)用[N];中國醫(yī)藥報;2002年

2 王淑坤;胸腺素含金量亟待提高[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

3 王唯民;人體衰老與胸腺有關(guān)[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2007年

4 程樹元;“短命”胸腺助你“長命百歲”[N];中國中醫(yī)藥報;2005年

5 本報特約撰稿人 蔡德山;胸腺素類藥物高端致勝[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

6 本報特約撰稿人 蔡德山;調(diào)價助推胸腺素市場優(yōu)勝劣汰[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

7 馬佳;擦胸增“胸腺素”揉腹減“將軍肚”[N];保健時報;2004年

8 金健;磨擦胸背強體質(zhì)[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2006年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 李憲奎;人胸腺素β4在大腸桿菌中的克隆、表達、純化及生物學(xué)活性鑒定[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

2 馮秀萍;重組人胸腺素β16的表達、純化和胸腺素β16的應(yīng)用研究[D];吉林大學(xué);2009年

3 陳玉輝;利用番茄和大腸桿菌表達胸腺素α1的研究[D];上海交通大學(xué);2007年

4 修朝陽;I.人甲狀旁腺素1～34肽的制備 II.人胸腺素α1的制備及其與干擾素α-1b的融合表達[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2002年

5 周亮;胸腺素α1的克隆表達及其作用機理研究[D];浙江大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方賢磊;重組胸腺素β4對放射性間質(zhì)性肺炎的治療作用及其機制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 王曉磊;用煙草（Nicotiana tabacum L.）表達具有生物活性的胸腺素β4[D];上海交通大學(xué);2013年

3 張沖;高致病性PRRSV誘導(dǎo)仔豬胸腺內(nèi)細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 楊穎;胸腺素β4對毛囊重建的作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

5 管占利;重組人胸腺素Tα1工藝的研究[D];長春工業(yè)大學(xué);2011年

6 陳穎;胸腺素β4影響毛囊生長的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

7 梁蘭;豬白介素15（IL-15）基因克隆及與胸腺素α1融合表達[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2009年

8 趙雙;重組人胸腺素β4的表達純化及生物學(xué)活性檢測[D];蘭州大學(xué);2012年

9 苗紅;重組胸腺素α1的表達和純化研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

10 張珍;重組人胸腺素β4（Tβ4）串聯(lián)體的表達、純化、鑒定及生物學(xué)活性檢測[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

，

本文編號：1203434