本文關(guān)鍵詞：BMP2在雌激素變化參與的皮膚衰老過(guò)程中的作用機(jī)制研究

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【摘要】：第一部分BMP-2在雌激素抗去勢(shì)大鼠皮膚衰老中的作用研究 目的 探討雌激素水平對(duì)皮膚組織的影響,為臨床上絕經(jīng)后婦女皮膚衰老的發(fā)病機(jī)制及皮膚組織病理學(xué)變化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 30只雌性成年Wistar大鼠,隨機(jī)分為去勢(shì)組(ovariectomized group,Mod, n=10)、假手術(shù)組(sham-operated group,Sham,n=10)、去勢(shì)+雌激素組(ovariectomized and estrogen injection group,OEI,n=10);去勢(shì)組切除雙側(cè)卵巢,大鼠術(shù)前禁水,取6%水合氯醛(0.5mL/100mg)腹腔注射,麻醉后固定四肢,在脊柱兩側(cè)第12肋尾側(cè)剪毛,用2%碘酊皮膚消毒,75%酒精脫碘。沿脊柱后正中線外側(cè)1～1.5cm處,以縱形切口依次切開皮膚、分離肌肉、打開壁層腹膜,進(jìn)入腹膜腔,找到卵巢并切除。假手術(shù)組步驟同去勢(shì)組,但不切除卵巢,只切除卵巢周圍小部分脂肪組織。去勢(shì)+雌激素組：切除大鼠雙側(cè)卵巢后,于術(shù)后第2天開始皮下注射雌二醇0.05mg/d,持續(xù)6天。大鼠飼養(yǎng)6周后腹腔注射水合氯醛后背部?jī)裘?在背部脊柱兩側(cè)分別取全層皮膚,主要為真皮成分,共切割2個(gè)圓形創(chuàng)面,直徑1.8cm,深至皮下,內(nèi)、外兩側(cè)分別做HE染色標(biāo)本和免疫組化標(biāo)本。采用放射免疫方法檢測(cè)了血清雌二醇水平,免疫組化方法檢測(cè)了皮膚組織BMP-2蛋白的表達(dá)；應(yīng)用光學(xué)顯微鏡對(duì)皮膚組織形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察,苦味酸-天狼猩紅染色偏振光分析皮膚膠原沉積,分析大鼠皮膚中Ⅰ和Ⅲ膠原的含量以及Ⅰ/Ⅲ膠原的比例,所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果 1.去勢(shì)組術(shù)后6周后血清雌二醇的濃度顯著低于假手術(shù)組(P0.05),去勢(shì)+雌激素組6周后血清雌二醇的濃度顯著高于去勢(shì)組(P0.05)。 2.去勢(shì)組大鼠喂養(yǎng)6周后皮膚組織各層的細(xì)胞萎縮,導(dǎo)管周圍的結(jié)締組織纖維增加并出現(xiàn)纖維化,部分腺泡失去正常結(jié)構(gòu),主要表現(xiàn)為組織結(jié)構(gòu)排列紊亂,細(xì)胞體積變小,細(xì)胞核沒有明顯變化,細(xì)胞質(zhì)明顯減少,細(xì)胞核密集在一起,腺泡呈現(xiàn)出萎縮的狀態(tài)； 3.苦味酸-天狼猩紅法發(fā)現(xiàn)去勢(shì)組術(shù)后6周皮膚中Ⅰ和Ⅲ膠原的含量以及Ⅰ/Ⅲ膠原的比例顯著低于假手術(shù)組(P0.05),去勢(shì)+雌激素組6周皮膚中Ⅰ和Ⅲ膠原的含量以及Ⅰ/Ⅲ膠原的比例顯著高于去勢(shì)組(P0.05),而假手術(shù)組與去勢(shì)+雌激素組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 4.免疫組化法發(fā)現(xiàn)去勢(shì)組6周皮膚組織BMP-2蛋白表達(dá)明顯高于假手術(shù)組(P0.05),去勢(shì)+雌激素組皮膚組織中BMP-2蛋白水平明顯低于去勢(shì)組(P0.05)。 5.去勢(shì)組血清雌二醇水平與BMP-2蛋白表達(dá)有顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.9600,P=0.0400)。 結(jié)論 去勢(shì)組大鼠6周后皮膚上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂,呈萎縮狀態(tài),功能減退,Ⅰ和Ⅲ膠原的含量以及Ⅰ/Ⅲ膠原的比例明顯降低,BMP-2表達(dá)上調(diào),增加雌激素對(duì)膠原的降解,降低真皮的厚度及彈性,這可能是雌激素水平降低導(dǎo)致皮膚衰老的發(fā)病機(jī)制。 第二部分雌激素對(duì)體外培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞BMP-2表達(dá)的影響 目的 通過(guò)研究雌激素對(duì)體外培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞BMP-2蛋白的影響,探討雌激素減緩皮膚老化的機(jī)制。 方法 將皮膚標(biāo)本,用含有抗生素的PBS液清洗皮膚組織的血液和污漬,剪去皮膚組織后,用0.25%胰蛋白酶消化清潔皮膚標(biāo)本,4℃條件下作用14h,分離表皮和真皮組織,棄去表皮組織后,把其余的真皮組織用含1%膠原酶的37℃的MEM液,在5%二氧化碳培養(yǎng)箱中作用4h,以分離成纖維細(xì)胞,收集和洗滌所得的細(xì)胞,新分離出的成纖維細(xì)胞密度約4x104/mL,加入到含10%胎牛血清的MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng),待成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)成密集單層后,細(xì)胞密度約16x104/mE,以1：3的比例進(jìn)行傳代,在孵化箱中培養(yǎng)48h,待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞密度約達(dá)12x104/mL時(shí),供后續(xù)的實(shí)驗(yàn)使用。所有細(xì)胞都在無(wú)血清MEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h,然后將將細(xì)胞分為4組：第1組為雌激素刺激組：分別向3個(gè)培養(yǎng)瓶中加入不同濃度的雌激素(1×10-1mol/L,1×10-2mol/L,1×10-3mol/L);第2組為Noggin拮抗組：分別向3個(gè)培養(yǎng)瓶中加入含不同濃度BMP2拮抗劑noggin (Noggin終濃度10,20,30μg/ml);第3組為雌激素刺激+noggin拮抗組：分別向3個(gè)培養(yǎng)瓶中加入含不同濃度的雌激素(雌激素終濃度分別為：1×10-1mol/L,1×10-2mol/L,1×10-3mol/L)+含不同濃度Noggin (Noggin終濃度10,20,30μg/mL)第4組為正常對(duì)照組：不做任何干預(yù)的體外培養(yǎng)皮膚成纖維細(xì)胞。取每組體外培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞中,采用Western blot檢測(cè)大鼠成纖維細(xì)胞中BMP2蛋白,以及免疫組化法觀察大鼠成纖維細(xì)胞中BMP2顆粒的多少,從而判斷BMP-2蛋白的表達(dá)水平。透射電鏡觀察不同雌激素濃度處理組對(duì)于成纖維細(xì)胞形態(tài)的影響。 結(jié)果 體外培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞,增殖活躍,形態(tài)表現(xiàn)良好,出現(xiàn)典型的梭形和柳葉形,用細(xì)胞計(jì)數(shù)法描繪細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線,結(jié)果顯示：潛伏期為0至2天,指數(shù)生長(zhǎng)期為2～5天,然后進(jìn)入平臺(tái)期。對(duì)成纖維細(xì)胞用雌二醇干預(yù),免疫細(xì)胞化學(xué)的結(jié)果顯示低劑量組與對(duì)照組作比較,兩組的BMP-2蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,高劑量組的雌激素與對(duì)照組相比,高劑量組的雌激素組的BMP-2表達(dá)蛋白水平下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。透射電鏡下觀察到成纖維細(xì)胞體積變小,細(xì)胞質(zhì)減少,細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則,核染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮,出現(xiàn)在細(xì)胞核膜下的邊緣,由于不同的切片的染色質(zhì)凝集可以采取不同的形式在細(xì)胞核不同切面的位置,邊界清楚,核膜間隙寬度的變化不等。成纖維細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的主要病理顯示線粒體腫脹,線粒體嵴結(jié)構(gòu)損傷,顯示空泡或云霧狀的變化,胞質(zhì)內(nèi)可見許多髓樣結(jié)構(gòu)。 結(jié)論 高濃度的雌激素可以下調(diào)成纖維細(xì)胞BMP-2蛋白的表達(dá)水平,減少BMP-2對(duì)膠原的降解,但是低濃度的雌激素沒有此作用。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R751

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1 圣晶;;防止皮膚早衰要講科學(xué)調(diào)理[J];健身科學(xué);2000年02期

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3 周艷;;維生素能否延緩皮膚衰老[J];醫(yī)藥與保健;2007年07期

4 林曉;潘文嘉;;靈芝多糖抗皮膚衰老作用研究[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2009年09期

5 劉月恒;來(lái)吉祥;董銀卯;何聰芬;;基質(zhì)金屬蛋白酶-1與皮膚衰老的研究進(jìn)展[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2010年20期

6 周彤，金錫鵬，林惠芬，黃雷鳴，，沈光祖;一種中草藥成份對(duì)延緩皮膚衰老的生理作用研究[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;1995年06期

7 段振離;;永葆肌膚年輕的秘訣[J];健康;2006年01期

8 關(guān)英杰,金錫鵬,魏少敏,林惠芬,沈光祖;景天類植物延緩皮膚衰老的實(shí)驗(yàn)研究[J];衛(wèi)生研究;2002年01期

9 ;如何預(yù)防皮膚衰老[J];決策與信息;2003年02期

10 李勤;劉宏偉;程飚;;草藥與皮膚衰老——草藥在醫(yī)學(xué)美容方面的應(yīng)用及未來(lái)發(fā)展系列講座一[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2008年01期

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1 李大鐵;;皮膚衰老及光電物理技術(shù)在美容皮膚科的應(yīng)用[A];2011年全國(guó)中醫(yī)美容學(xué)術(shù)年會(huì)暨貴州省醫(yī)學(xué)美學(xué)與美容學(xué)、激光醫(yī)學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

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6 萬(wàn)苗堅(jiān);賴維;呂瑛;易金玲;謝淑霞;蘇向陽(yáng);關(guān)小敏;楊素蓮;區(qū)鳳仙;;羊胎素抗皮膚衰老功效的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

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1 周 虹;40歲后皮膚如何保養(yǎng)?[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

2 郭旭光;老人注意延緩皮膚衰老[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2006年

3 ;要想皮膚好吃得別太飽[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

4 郭旭光;老年人注意延緩皮膚衰老[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

5 蒲昭和;多樣化飲食延緩皮膚衰老[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

6 蒲昭和;多樣化飲食延緩皮膚衰老[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2003年

7 湖南省疾病預(yù)防控制中心 柳君;老人皮膚也需保養(yǎng)[N];健康報(bào);2007年

8 杜恩;皮膚有白點(diǎn)誤當(dāng)白癜風(fēng)[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2006年

9 江雪;皮膚衰老的十大因素[N];中國(guó)勞動(dòng)保障報(bào);2003年

10 曉婷;皮膚“喝水”老得慢[N];大眾科技報(bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周密思;小柴胡湯延緩皮膚衰老的理論與實(shí)驗(yàn)研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2012年

2 顏小榮;BMP2介導(dǎo)的成骨通路在顱咽管瘤鈣化中的機(jī)制研究及顱咽管瘤雞胚絨毛尿囊膜移植瘤模型的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

3 鄭敏;BMP2對(duì)H9c2心肌細(xì)胞組蛋白乙酰化修飾的調(diào)控作用及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

4 周小平;補(bǔ)益營(yíng)衛(wèi)延緩皮膚衰老的理論和實(shí)驗(yàn)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

5 宋佳;BMP2和BMP7基因共轉(zhuǎn)染BMSC/PRP凝膠組織工程材料的構(gòu)建及體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

6 米萌;條件性基因敲除方法研究?jī)?nèi)源性BMP2在小鼠骨折愈合中的生物學(xué)作用[D];中南大學(xué);2012年

7 張年春;重組BMP2和Angiopoietin-1腺病毒誘導(dǎo)肌源性干細(xì)胞成骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 宋曉彬;VEGF及BMP2基因修飾對(duì)血管化組織工程骨的影響及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2012年

9 吳景東;絞股藍(lán)抗皮膚光老化的實(shí)驗(yàn)研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2006年

10 陳劍;BMP2和BMP7基因共轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

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1 譚拯;BMP2在雌激素變化參與的皮膚衰老過(guò)程中的作用機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

2 曾勇;多指標(biāo)人體皮膚測(cè)量系統(tǒng)的研究[D];武漢理工大學(xué);2005年

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4 張杰;新疆杏漿中果酸的提取及其抗皮膚衰老性能研究[D];江南大學(xué);2012年

5 侯雪峰;GX-50抗皮膚衰老的研究[D];上海交通大學(xué);2013年

6 宋肖靜;GX50對(duì)與皮膚衰老相關(guān)的NF-κB通路的調(diào)節(jié)作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

7 李威;BMP2基因轉(zhuǎn)染大鼠頰粘膜成纖維細(xì)胞與異種燒結(jié)骨復(fù)合組織工程的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

8 王琦;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在不同年齡組皮膚自然衰老中的表達(dá)及意義[D];中南大學(xué);2007年

9 任慶麗;維絲膠囊延緩自然衰老小鼠皮膚衰老的實(shí)驗(yàn)研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2009年

10 馬卓飛;衛(wèi)氣虛與皮膚衰老的相關(guān)理論及實(shí)驗(yàn)研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2006年

本文編號(hào)：1203362