本文關(guān)鍵詞：MED27促進黑色素瘤生長的功能與分子機制研究

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【摘要】：目的:人類調(diào)控復(fù)合物MED由28個亞基組成,MED27是基中的一個,其在人體中廣泛表達,是轉(zhuǎn)錄起始階段普遍需要的酶。MED27被發(fā)現(xiàn)與甲狀腺激素受體相互作用并通過與其它轉(zhuǎn)錄因子和輔因子結(jié)合一起行使甲狀腺激素受體功能。此外,新的研究結(jié)果證明了它參與HIV-1的轉(zhuǎn)錄過程。MED27蛋白的敲低,與其他MED蛋白質(zhì)的敲低相結(jié)合,能夠顯著削弱病毒復(fù)制,但是不影響細胞的生存力。盡管如此,迄今為止,與MED家族的其它成員相比,MED27在人類疾病中的功能作用仍然很少報道,特別是其在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的功能更是知之甚少。前期研究中,我們基于si RNA文庫篩選出一系列影響黑色素瘤生長的關(guān)鍵基因,發(fā)現(xiàn)其中之一為MED27。本論文擬在此基礎(chǔ)上,進一步研究MED27在黑色素瘤發(fā)生發(fā)展中的功能和具體的分子機制,從而為黑色素瘤的診斷和治療提供新靶標(biāo)。方法:(1)以si RNA library screen文庫為實驗新技術(shù),尋找影響黑色素瘤細胞生長的潛在靶基因。(2)應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)來過表達或敲低MED27的表達,通過體外實驗研究其對細胞增殖、遷移、周期、凋亡等生物學(xué)功能的影響,以及相關(guān)分子信號通路的變化。(3)應(yīng)用免疫印跡、免疫組化等技術(shù)檢測人腫瘤細胞和正常細胞以及組織芯片標(biāo)本中MED27的表達水平,并結(jié)合細胞特性和臨床資料分析MED27的腫瘤特異性表達和它們在預(yù)測預(yù)后上的價值。(4)應(yīng)用免疫共沉淀技術(shù)檢測MED27與轉(zhuǎn)錄共活化子p65,p300的相互作用,以及對i NOS表達的影響。(5)建立黑色素瘤裸鼠動物模型,進一步驗證MED27對腫瘤生長以及對i NOS表達的影響。結(jié)果:(1)在本實驗中,我們通過si RNA library篩選鑒定出MED27基因,發(fā)現(xiàn)其能夠影響黑色素瘤細胞的生長。(2)MED27在黑色素瘤細胞和組織中高表達。(3)MED27過表達或敲低表達可以相應(yīng)地促進或抑制黑色素瘤細胞的增殖。(4)MED27過表達或敲低表達可以相應(yīng)地活化或抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信號通路。(5)MED27敲低表達誘導(dǎo)細胞周期阻滯和抑制黑色素瘤細胞遷移。(6)MED27敲低表達上調(diào)Bax蛋白/細胞色素C/半光天冬酶的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,促進細胞凋亡。(7)MED27通過NF-κB信號通路影響i NOS的表達。(8)MED27敲低表達抑制小鼠模型中黑色素瘤的增長。結(jié)論:臨床資料分析表明MED27高表達與黑色素瘤病人預(yù)后存在負相關(guān)性;體外實驗分析發(fā)現(xiàn)抑制MED27的表達可以通過失活PI3K/AKT和MAPK/ERK信號通路抑制細胞的增值,導(dǎo)致細胞周期阻滯,并通過活化cytochrome C/caspase信號通路促進黑色素瘤細胞的凋亡。同時我們的研究發(fā)現(xiàn),MED27通過靶向NF-κB信號通路可以正向調(diào)控炎癥因子i NOS的表達。動物模型進一步驗證了上述結(jié)論�？傊�,我們的實驗研究為黑色素瘤的治療提供了新靶點,并為尋找其它腫瘤治療靶點提供了新思路。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.5

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4 實習(xí)生 易立;黑色素瘤,是否無藥可治？[N];科技日報;2011年

5 記者 張e，

本文編號：1147534