本文關(guān)鍵詞：人毛囊體外保存的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 毛囊 玻璃化凍存 組織工程皮膚

【摘要】：研究背景： 毛囊的體外保存對(duì)于臨床毛發(fā)移植具有重要意義,很多學(xué)者利用低溫以及玻璃化深低溫凍存等各種不同方法體外保存人完整毛囊,但效果均不理想,研發(fā)更有效的玻璃化冷凍保護(hù)劑是解決問(wèn)題的關(guān)鍵。另外,毛囊再生與皮膚微環(huán)境具有復(fù)雜而密切的聯(lián)系,組織工程皮膚在一定程度上模擬了毛囊生長(zhǎng)環(huán)境,本研究首次嘗試?yán)媒M織工程技術(shù)在體外常溫保存毛囊。 目的： 1.添加促進(jìn)毛囊再生的相關(guān)生長(zhǎng)因子,優(yōu)化玻璃化冷凍保護(hù)劑。 2.組織工程技術(shù)模擬毛囊的生長(zhǎng)環(huán)境,探討常溫保存毛囊方法。 方法： 1.將臨床取得的健康頭皮分離為單個(gè)無(wú)損傷毛囊后,隨機(jī)分為體外培養(yǎng)組、慢速凍存組、玻璃化凍存組和細(xì)胞因子玻璃化凍存組。分別凍存24小時(shí),72小時(shí),1個(gè)月,6個(gè)月。通過(guò)長(zhǎng)度測(cè)量、HE染色和免疫熒光染色檢測(cè)毛囊活性。 2.將分離的毛囊單位插入由成纖維細(xì)胞和Ⅰ型鼠尾膠原構(gòu)建的組織工程真皮后,分 3次鋪入角質(zhì)形成細(xì)胞,浸沒(méi)培養(yǎng)1周、氣-液界面培養(yǎng)3周后,通過(guò)鏡下觀察、HE染色和免疫組化檢測(cè)組織工程皮膚和毛囊的生長(zhǎng)狀態(tài)。 結(jié)果： 1.經(jīng)過(guò)不同時(shí)間凍存后復(fù)溫,細(xì)胞因子HGF玻璃化凍存組毛囊5天內(nèi)生長(zhǎng)率和生長(zhǎng)長(zhǎng)度高于其他凍存組,與體外培養(yǎng)組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；HE染色結(jié)果顯示該組毛囊細(xì)胞數(shù)量多于其他凍存組,且組織結(jié)構(gòu)更完整；免疫熒光染色顯示該組毛囊的干細(xì)胞存活數(shù)量明顯多于慢速凍存組和未加因子玻璃化凍存組。 2.經(jīng)過(guò)4周體外培養(yǎng),植入毛囊的組織工程皮膚鏡下觀察可見毛囊和皮脂腺等皮膚附屬器存在,毛囊形態(tài)維持21天未見毛乳頭損壞,該時(shí)間明顯長(zhǎng)于體外懸浮培養(yǎng)。HE染色顯示植入毛囊的組織工程皮膚表面可見分層角化的表皮形成,免疫組化染色顯示其分化標(biāo)志物Keratin4和Keratin10表達(dá)陽(yáng)性,表皮真皮連接處基底膜特異性標(biāo)志物L(fēng)aminin和Ⅳ型膠原呈連續(xù)表達(dá)。 結(jié)論： 加入細(xì)胞因子HGF優(yōu)化玻璃化冷凍保護(hù)劑的玻璃化凍存技術(shù)可長(zhǎng)期有效保存毛囊。復(fù)合毛囊單位的組織工程皮膚可以延長(zhǎng)常溫體外毛囊生存時(shí)間,并促進(jìn)組織工程皮膚表皮組織的分化和成熟。這兩種方法均為臨床毛發(fā)移植手術(shù)方式改進(jìn)提供了基礎(chǔ),為毛囊的體外培養(yǎng)和組織工程皮膚的構(gòu)建提供了新的思路和方法。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R758.71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 于小川;冷凍保護(hù)劑低溫連續(xù)導(dǎo)入方法及神經(jīng)干細(xì)胞凍存的研究[D];大連理工大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：1143392