本文關(guān)鍵詞：ⅡA分泌型磷脂酶A2與銀屑病皮損關(guān)系的研究

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【摘要】：研究目的與內(nèi)容:研究目的:從組織學(xué)和分子生物學(xué)角度探討sPLA2-ⅡA在銀屑病皮損組織中表達(dá),揭示其與銀屑病發(fā)病的相互關(guān)系,以證實(shí)sPLA2-ⅡA在銀屑病皮損發(fā)病中的作用,為銀屑病臨床早期診斷和治療提供依據(jù)和指導(dǎo)。研究內(nèi)容:通過免疫組化方法,檢測sPLA2-ⅡA在銀屑病皮損組織中的表達(dá);通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),檢測血清中sPLA2-ⅡA的含量;采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法檢測sPLA2-ⅡA mRNA表達(dá)水平,從這幾個(gè)方面共同闡明sPLA2-ⅡA表達(dá)水平與銀屑病發(fā)病的關(guān)系,具體內(nèi)容如下:1.通過皮損面積和皮損嚴(yán)重程度指數(shù)(PASI評分)來分析兩者之間的關(guān)系,調(diào)查了解相關(guān)病例臨床信息(例如遺傳史、過敏史等)。2.采用免疫組織化學(xué)方法,對銀屑病患者軀干或四肢部位的皮損進(jìn)行sPLA2-ⅡA指標(biāo)評價(jià)。3.應(yīng)用PASI評分分析銀屑病患者組織中sPLA2-ⅡA表達(dá)水平與銀屑病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。同時(shí)對研究對象外周血sPLA2-ⅡA含量進(jìn)行檢測。4.采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法,檢測研究對象皮膚組織中sPLA2-ⅡA mRNA的表達(dá)水平。方法:銀屑病皮損標(biāo)本是從患者軀干或四肢的典型皮損處采取,非銀屑病對照組標(biāo)本是從其軀干或四肢部位的正常皮膚采取(從外科及骨科手術(shù)中獲得),標(biāo)本部分留取以制備蠟塊切片,余下部分液氮凍存以備提取總RNA待進(jìn)行相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn);采用免疫組織化學(xué)方法檢測銀屑病皮損樣本和對照組樣本sPLA2-ⅡA表達(dá)水平;采用酶聯(lián)免疫吸附方法從血清學(xué)水平檢測研究對象外周血sPLA2-ⅡA的含量變化;應(yīng)用常規(guī)RT-PCR方法,從mRNA水平檢測研究對象皮膚組織中sPLA2-ⅡA的表達(dá)情況。從組織學(xué)、血清學(xué)以及分子生物學(xué)三個(gè)角度共同揭示sPLA2-ⅡA的表達(dá)變化與銀屑病皮損發(fā)病的相互關(guān)系,為進(jìn)一步預(yù)防、治療銀屑病提供理論依據(jù)。結(jié)果:皮損嚴(yán)重程度和PASI評分呈正相關(guān);免疫組織化學(xué)方法發(fā)現(xiàn)sPLA2-ⅡA在銀屑病皮損組織中的表達(dá)顯著高于軀干或四肢部位的正常皮膚,即對照組的皮膚組織;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損患者的血清中sPLA2-ⅡA含量明顯高于對照組;RT-PCR檢測銀屑病皮損組和對照組sPLA2-ⅡA的mRNA表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)皮損組明顯高于對照組sPLA2-ⅡA水平,以上結(jié)果均提示sPLA2-ⅡA是銀屑病發(fā)病的重要特異性靶分子,sPLA2-ⅡA有可能對銀屑病的分子診斷有幫助,未來會成為靶向治療的新靶標(biāo)。結(jié)論:本研究通過免疫組化染色發(fā)現(xiàn)sPLA2-IIA在真皮層中高表達(dá),真皮乳頭血管周圍細(xì)胞漿中可見棕黃色顆粒,這一點(diǎn)與許多國內(nèi)外的研究結(jié)論相符,我們通過免疫組化方法還發(fā)現(xiàn)在銀屑病表皮上層中sPLA2-IIA表達(dá)升高顯著,這一點(diǎn)類似于分化異常的角質(zhì)化細(xì)胞。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損患者的血清中sPLA2-ⅡA含量明顯高于對照組。采用RT-PCR方法檢測到銀屑病皮損組sPLA2-IIA的mRNA表達(dá)水平明顯增高,這一結(jié)果提示銀屑病患者可能在基因轉(zhuǎn)錄水平上激活了sPLA2-IIA,為臨床上進(jìn)一步提高檢測敏感性奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。綜上所述:我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示sPLA2-ⅡA的表達(dá)變化與銀屑病皮損關(guān)系密切,鑒于其它磷脂酶亞型的表達(dá)在正常和銀屑病表皮中的表達(dá)未見報(bào)道,因此,本研究認(rèn)為PLA2-IIA今后可能會成為銀屑病分子診斷和靶向治療的新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：分泌型磷脂酶A2-IIA 銀屑病 免疫組織化學(xué) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 縮略語9-11
• 前言11-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究方法、路線13-15
• 一、免疫組織化學(xué)方法檢測皮膚標(biāo)本sPLA2-ⅡA的表達(dá)水平15-23
• 1.1 對象和方法15-19
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-19
• 1.2 結(jié)果19-21
• 1.2.1 銀屑病患者皮損和對照組皮膚組織中sPLA2 IIA表達(dá)19-20
• 1.2.2 銀屑病患者sPLA2 IIA表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)分布20
• 1.2.3 銀屑病患者PASI評分與sPLA2 IIA表達(dá)的關(guān)系20-21
• 1.3 討論21-22
• 1.4 小結(jié)22-23
• 二、ELISA法檢測外周血sPLA2-ⅡA含量23-30
• 2.1 材料和方法23-27
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法24-27
• 2.2 結(jié)果27-28
• 2.2.1 生化指標(biāo)檢測27
• 2.2.2 sPLA2ⅡA指標(biāo)檢測27-28
• 2.3 討論28-29
• 2.4 小結(jié)29-30
• 三、RT-PCR檢測sPLA2 IIA mRNA在銀屑病患者皮膚組織表達(dá)30-39
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法30-36
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑30-31
• 3.1.2 儀器和設(shè)備31
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)方法31-36
• 3.1.4 統(tǒng)計(jì)處理并分析36
• 3.2 結(jié)果36-37
• 3.2.1 經(jīng)紫外光分光密度儀檢測提取的總RNA36
• 3.2.2 2%甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳鑒定36
• 3.2.3 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）擴(kuò)增sPLA2 IIA的mRNA36-37
• 3.3 小結(jié)37-38
• 3.4 討論38-39
• 結(jié)論39-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明44-45
• 綜述 磷脂酶A2及其亞型的研究進(jìn)展45-65
• 綜述參考文獻(xiàn)58-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡歷66

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本文編號：1075509