本文關(guān)鍵詞：干擾素-γ對黑色素瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)的影響

  更多相關(guān)文章： 黑色素瘤 干擾素γ 重組 上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 血管內(nèi)皮生長因子類 血管生成擬態(tài)

【摘要】：目的研究干擾素-γ(IFN-γ)在體外對人黑色素瘤細(xì)胞系MUM-2B遷移、侵襲和血管生成擬態(tài)(VM)形成能力的影響,探討其可能的分子機(jī)制。方法以人黑色素瘤細(xì)胞系MUM-2B作為研究對象,分3組進(jìn)行體外培養(yǎng):對照組在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng);實驗組分別在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中加入10μg/L IFN-γ和100μg/L IFN-γ;第一部分:觀察IFN-γ在體外對黑色素瘤細(xì)胞VM形成能力的影響1.利用劃痕實驗觀察不同濃度的IFN-γ對MUM-2B細(xì)胞遷移能力的影響;2.利用Transwell侵襲實驗觀察不同濃度的IFN-γ對MUM-2B細(xì)胞侵襲能力的影響;3.利用三維培養(yǎng)實驗觀察不同濃度的IFN-γ對MUM-2B細(xì)胞體外形成VM管道能力的影響。第二部分:探討IFN-γ對黑色素瘤細(xì)胞VM影響的分子機(jī)制4.利用Western blot檢測不同濃度的IFN-γ對MUM-2B細(xì)胞STAT1磷酸化的影響;5.利用RT-PCR檢測不同濃度的IFN-γ對MUM-2B細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)記物VE-cadherin、Vimentin和E-cadherin在m RNA水平表達(dá)的影響;6.利用Western blot檢測不同濃度的IFN-γ對MUM-2B細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)記物VE-cadherin、Vimentin和E-cadherin在蛋白水平表達(dá)的影響;7.利用Western blot檢測不同濃度的IFN-γ對MUM-2B細(xì)胞EMT相關(guān)調(diào)節(jié)因子Twist1和Slug在蛋白水平表達(dá)的影響;8.利用Western blot檢測不同濃度的IFN-γ對MUM-2B細(xì)胞VEGF在蛋白水平表達(dá)的影響;9.利用明膠酶譜實驗檢測不同濃度的IFN-γ對MUM-2B細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員MMP-2和MMP-9活性的影響。結(jié)果1.劃痕實驗結(jié)果顯示,IFN-γ處理組的細(xì)胞遷移距離均低于對照組,100μg/L IFN-γ處理組的細(xì)胞遷移距離低于10μg/L IFN-γ處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);2.Transwell侵襲實驗結(jié)果顯示,IFN-γ處理組的穿膜細(xì)胞數(shù)均低于對照組,100μg/L IFN-γ處理組的穿膜細(xì)胞數(shù)低于10μg/L IFN-γ處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);3.三維培養(yǎng)結(jié)果顯示,24 h后,對照組細(xì)胞可形成平滑、完整的VM管道樣結(jié)構(gòu);實驗組細(xì)胞均不能形成VM管道樣結(jié)構(gòu);4.Western blot結(jié)果顯示,IFN-γ處理組細(xì)胞的p-STAT1表達(dá)水平均高于對照組,100μg/L IFN-γ處理組細(xì)胞的p-STAT1表達(dá)水平高于10μg/L IFN-γ處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);5.RT-PCR結(jié)果顯示,IFN-γ處理組細(xì)胞的VE-cadherin、Vimentin在m RNA水平的表達(dá)均低于對照組,100μg/L IFN-γ處理組細(xì)胞的VE-cadherin、Vimentin在m RNA水平的表達(dá)低于10μg/L IFN-γ處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);IFN-γ處理組細(xì)胞的E-cadherin在水平的m RNA表達(dá)均高于對照組,100μg/L IFN-γ處理組細(xì)胞的E-cadherinm在水平的m RNA表達(dá)高于10μg/L IFN-γ處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);6.Western blot結(jié)果顯示,IFN-γ處理組細(xì)胞的VE-cadherin、Vimentin在蛋白水平的表達(dá)均低于對照組,100μg/L IFN-γ處理組細(xì)胞的VE-cadherin、Vimentin在蛋白水平的表達(dá)低于10μg/L IFN-γ處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);IFN-γ處理組細(xì)胞的E-cadherin在蛋白水平的表達(dá)均高于對照組,100μg/L IFN-γ處理組細(xì)胞的E-cadherinm在蛋白水平的表達(dá)高于10μg/L IFN-γ處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);7.Western blot結(jié)果顯示,IFN-γ處理組細(xì)胞的EMT調(diào)控因子Twist1和Slug在蛋白水平的表達(dá)均低于對照組,100μg/L IFN-γ處理組細(xì)胞的Twist1和Slug在蛋白水平的表達(dá)低于10μg/L IFN-γ處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);8.Western Blot結(jié)果顯示,IFN-γ處理組組細(xì)胞的VEGF蛋白表達(dá)量均低于對照組,100μg/L IFN-γ處理組細(xì)胞的VEGF蛋白表達(dá)量低于10μg/L IFN-γ處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);9.明膠酶譜結(jié)果顯示,IFN-γ處理組細(xì)胞MMP-2和MMP-9的活性均低于對照組,100μg/L IFN-γ處理組細(xì)胞MMP-2和MMP-9的活性均低于10μg/L IFN-γ處理組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);結(jié)論1.劃痕實驗、Transwell細(xì)胞侵襲實驗和三維培養(yǎng)實驗結(jié)果顯示,加入不同濃度的IFN-γ后,MUM-2B細(xì)胞的遷移距離縮短、細(xì)胞侵襲數(shù)量減少,體外管道形成能力減弱,提示IFN-γ可以在體外抑制黑色素瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和管道形成能力。2.RT-PCR和Western Blot結(jié)果顯示,IFN-γ可促進(jìn)MUM-2B細(xì)胞STAT1的磷酸化,抑制MUM-2B細(xì)胞間充質(zhì)標(biāo)記物VE-cadherin、Vimentin的表達(dá),促進(jìn)上皮標(biāo)記物E-cadherin的表達(dá),抑制EMT調(diào)控因子Twist1和Slug的表達(dá),提示IFN-γ可通過激活STAT1信號通路而抑制EMT過程,進(jìn)而抑制黑色素瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和VM的形成。3.Western Blot和明膠酶譜實驗結(jié)果顯示,IFN-γ可抑制MUM-2B細(xì)胞VEGF的表達(dá),抑制MMP-2和MMP-9的活性,提示IFN-γ可通過抑制VEGF的表達(dá)而抑制黑色素瘤細(xì)胞VM的形成,也可通過抑制VEGF而抑制MMP-2和MMP-9的活性,使其不能為VM的形成提供的足夠空間基礎(chǔ),從而抑制VM的形成。
【關(guān)鍵詞】：黑色素瘤 干擾素γ 重組 上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化 血管內(nèi)皮生長因子類 血管生成擬態(tài)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語13-14
• 前言14-17
• 研究現(xiàn)狀、成果14-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、IFN-γ 在體外對黑色素瘤細(xì)胞VM形成能力的影響17-24
• 1.1 材料與方法17-21
• 1.1.1 實驗用細(xì)胞系17
• 1.1.2 實驗試劑17
• 1.1.3 主要實驗儀器17-18
• 1.1.4 實驗溶液配制18
• 1.1.5 MUM-2B細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)及傳代18-19
• 1.1.6 細(xì)胞凍存19
• 1.1.7 細(xì)胞計數(shù)19
• 1.1.8 實驗分組19
• 1.1.9 劃痕實驗19
• 1.1.10 Transwell侵襲實驗19-20
• 1.1.11 三維培養(yǎng)20
• 1.1.12 統(tǒng)計學(xué)分析20-21
• 1.2 結(jié)果21-24
• 1.2.1 IFN-γ 對MUM-2B細(xì)胞遷移能力的影響21-22
• 1.2.2 IFN-γ 對MUM-2B細(xì)胞侵襲能力的影響22-23
• 1.2.3 IFN-γ 對MUM-2B細(xì)胞體外VM管道形成能力的影響23-24
• 二、IFN-γ 對黑色素瘤細(xì)胞VM影響的分子機(jī)制24-39
• 2.1 材料與方法24-33
• 2.1.1 實驗試劑24-25
• 2.1.2 主要實驗儀器25-26
• 2.1.3 實驗溶液配制26-28
• 2.1.4 實驗分組28
• 2.1.5 Western Blot28-29
• 2.1.6 RT-PCR29-31
• 2.1.7 明膠酶譜實驗31-32
• 2.1.8 統(tǒng)計學(xué)分析32-33
• 2.2 結(jié)果33-39
• 2.2.1 IFN-γ 對MUM-2B細(xì)胞STAT1磷酸化的影響33
• 2.2.2 IFN-γ 對MUM-2B細(xì)胞EMT標(biāo)記物mRNA水平的影響33-34
• 2.2.3 IFN-γ 對MUM-2B細(xì)胞EMT標(biāo)記物蛋白表達(dá)水平的影響34-35
• 2.2.4 IFN-γ 對MUM-2B細(xì)胞EMT調(diào)控因子在蛋白水平表達(dá)的影響35-36
• 2.2.5 IFN-γ 對MUM-2B細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)水平的影響36-37
• 2.2.6 IFN-γ 對MUM-2B細(xì)胞MMP-2 和MMP-9 活性表達(dá)水平的影響37-39
• 討論39-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明52-53
• 綜述 腫瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)相關(guān)分子通路的研究進(jìn)展53-70
• 綜述參考文獻(xiàn)62-70
• 致謝70

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本文編號：1053059