本文關(guān)鍵詞：趨化因子CCL11、CCL17、CCL26、CCL27在蕁麻疹患者體內(nèi)的表達(dá)及意義

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【摘要】：蕁麻疹(uricaria)是一種極為常見的過(guò)敏性皮膚疾病,又稱為“風(fēng)疹塊”或“風(fēng)團(tuán)。它的發(fā)病率高達(dá)20%。蕁麻疹屬于免疫系統(tǒng)變態(tài)反應(yīng)性疾病,主要表現(xiàn)為因皮膚、黏膜小血管擴(kuò)張及滲透性增加而出現(xiàn)的一種局限性水腫反應(yīng)。臨床上,根據(jù)病程長(zhǎng)度與發(fā)病頻率將其分為急性蕁麻疹(acute urticaria, AU)與慢性蕁麻疹(chronic uricaria, CU)。AU通常表現(xiàn)為短期內(nèi)痊愈,病程持續(xù)6周以下。相反,CU是指風(fēng)團(tuán)反復(fù)發(fā)作,并連續(xù)超過(guò)6周以上的蕁麻疹。其發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜,受遺傳、環(huán)境以及免疫等多因素共同影響,病因難以確定。研究表明,AU主要由!型變態(tài)反應(yīng)引起,即過(guò)敏原引發(fā)IgE以Fc段與肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞表面的Fc肥大細(xì)胞受體結(jié)合,引發(fā)肥大細(xì)胞脫顆粒反應(yīng),釋放組胺、花生四烯酸衍生物等過(guò)敏介質(zhì),引起平滑肌收縮、免疫細(xì)胞遷移、毛細(xì)血管擴(kuò)張、以及腺體分泌增加等病變。同時(shí),有研究表明,CU的患者的皮損組織中,常伴有趨化因子誘導(dǎo)的嗜酸粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)以及Thl/Th2的失衡。因此,趨化因子,作為最大的細(xì)胞因子亞家族之一,對(duì)誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的遷移有重要作用。根據(jù)趨化因子的蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),氨基末端單個(gè)或兩個(gè)半胱氨酸是否直接比鄰或插入其他氨基酸,將其分為CC趨化因子,CXC趨化因子,C趨化因子,CX3C趨化因子。其中,CC趨化因子不僅具備趨化作用,還能參與免疫調(diào)節(jié)、抗病毒免疫、調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝,同時(shí)在慢性蕁麻疹發(fā)病過(guò)程中可促進(jìn)組胺的釋放而參與過(guò)敏反應(yīng)。研究表明,可分泌CC型趨化因子的嗜酸粒細(xì)胞在CU的皮膚損害處大量地出現(xiàn)。CC型趨化因子通過(guò)將嗜酸粒細(xì)胞趨化到反應(yīng)部位,導(dǎo)致嗜酸粒細(xì)胞分泌包括大量嗜酸粒細(xì)胞衍生的神經(jīng)毒、嗜酸粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白以及嗜酸粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶的毒性成分,從而引起蕁麻疹皮膚的組織損傷和瘙癢等臨床癥狀。作為一種常見過(guò)敏性皮膚疾病,蕁麻疹患者體內(nèi)免疫T輔助細(xì)胞Th (T he1per)細(xì)胞的平衡起非常重要的調(diào)控作用,且受到趨化因子的調(diào)控。Th細(xì)胞可分化為Thl細(xì)胞和Th2細(xì)胞。正常情況下兩者在機(jī)體內(nèi)維持著動(dòng)態(tài)平衡。當(dāng)機(jī)體Th1/Th2的動(dòng)態(tài)平衡被打破,出現(xiàn)Th1/Th2漂移,Th0向Thl分化過(guò)多,往往引起自身免疫性疾病和遲發(fā)性超敏反應(yīng)發(fā)生；另一方面,當(dāng)Th0向Th2分化過(guò)多,往往引起哮喘、CU等過(guò)敏性疾病發(fā)生,當(dāng)機(jī)體免疫功能異�；虻拖聲r(shí),Th2細(xì)胞及其細(xì)胞因子調(diào)控CU的患者血清中IgE水平升高。目前,IgE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)與Th1/Th2細(xì)胞平衡被認(rèn)為是CU發(fā)生的主要調(diào)控機(jī)制。趨化因子與Th1/Th2細(xì)胞失衡與分泌的細(xì)胞因子和變態(tài)反應(yīng)中的介質(zhì)有相互作用。因此,闡明趨化因子在蕁麻疹發(fā)生中的作用對(duì)于CU的治療具有重要意義。目前對(duì)于CU的治療關(guān)鍵是鑒別、清除病因和減少接觸誘發(fā)因素。CU發(fā)病重要基礎(chǔ)是IgE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng),繼而引起肥大細(xì)胞與嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒現(xiàn)象。近年來(lái),過(guò)敏原檢測(cè)及特應(yīng)性免疫治療是國(guó)際變態(tài)反應(yīng)界廣泛開展的一項(xiàng)新型的檢測(cè)及治療方法。皮下注射特異性免疫治療(SCIT)作為臨床的經(jīng)典免疫方法曾經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用,但由于安全性不足而被舌下特異性免疫治療(sublingual immunotherapy, SLIT)所替代。SLIT作為唯一針對(duì)過(guò)敏性疾病的對(duì)癥治療,由于療效顯著、安全性高、使用方便,在臨床上獲得廣泛應(yīng)用。它是一種通過(guò)使變應(yīng)原明確的患者反復(fù)多次接觸相應(yīng)的劑量逐步遞增至維持劑量變應(yīng)原,幫助患者從根本上脫敏的治療方法。相比一次靜脈注射大劑量過(guò)敏原,舌下給藥變應(yīng)原能夠更加方便、安全地對(duì)患者進(jìn)行過(guò)敏刺激。變應(yīng)原與上皮細(xì)胞結(jié)合穿過(guò)口腔黏膜,其后被樹突狀細(xì)胞捕獲到達(dá)淋巴結(jié),與原始的CD4+T細(xì)胞相互作用,調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡與相應(yīng)細(xì)胞因子的分泌。其可能的作用機(jī)理是利用封閉抗體(主要是IgG型),使變應(yīng)原與相應(yīng)抗體結(jié)合,從而阻斷IgE結(jié)合變應(yīng)原,形成不產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)的免疫復(fù)合物。它具有副作用小、療效持久的顯著優(yōu)勢(shì),目前在治療CU的療效中得到廣泛臨床認(rèn)可。但是有效SLIT對(duì)CU的治療效果和內(nèi)在機(jī)制的尚未完全闡明。本課題旨在研究CC型趨化因子CCL11(嗜酸粒細(xì)胞活化趨化因子,eotaxin-1), CCL17 (thymus and activation-regulated chemokine), CCL26 (eotaxin-3)以及CCL27 (cutaneous T cell-attracting chemokine)在CU發(fā)病機(jī)制中的作用,從而為制定相應(yīng)的治療方案提供依據(jù)。同時(shí)初步探究了特異性免疫治療在治療CU患者中的臨床療效與對(duì)四種趨化因子表達(dá)的影響,旨在為CU的特異性免疫治療提供臨床和實(shí)驗(yàn)室的依據(jù)。本研究的第一部分首先應(yīng)用定量實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)與基于Luminex平臺(tái)的液相芯片多因子檢測(cè)Bioplex技術(shù)檢測(cè)了27例AU (AU)患者,24例CU (CU)患者,以及25例健康志愿者的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中四種趨化因子CCL11、CCL17、 CCL26、CCL27mRNA表達(dá)水平與血清中的蛋白含量,并包括25例健康人作為對(duì)照。另外,還應(yīng)用ELISA法檢測(cè)]PBMCs中 CCL11、CCL17、CCL26、CCL27與血清中Thl和Th2細(xì)胞因子以及IgE含量的相互關(guān)系。并利用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法分析四種趨化因子與患者病程、UAS評(píng)分以及Th1/Th2分泌的細(xì)胞因子之間的相關(guān)性。本課題的第一部分研究發(fā)現(xiàn),CUPBMCs中的三種趨化因子CCL11、 CCL17、CCL26的mRNA表達(dá)水平和蛋白含量顯著高于健康者(P0.05)。并且,在AU的患者PBMCs中表現(xiàn)更為顯著(P 0.05)。CCL27的mRNA表達(dá)和蛋白含量雖在AU組患者中顯著增加(P0.05),但在CU患者中略有下降(P0.05)。蕁麻疹患者PBMCs中趨化因子含量的改變,指示其與蕁麻疹發(fā)生具有相關(guān)性。Thl細(xì)胞因子IL-2、TNF-α的表達(dá)在AU組和CU組患者中均顯著降低(P0.05),且CU組顯著低于AU組(P0.05)；Th2細(xì)胞因子IL-4表達(dá)在AU組和CU組患者中均顯著增加(P0.05),且CU組顯著高于AU組(P0.05),Th2細(xì)胞因子IL-10表達(dá)在CU組患者中顯著增加(P0.05),并高于AU組患者(P0.05),指示蕁麻疹的發(fā)生伴隨Thl/Th2失衡。 進(jìn)一步分析患者血清中Thl與Th2分泌的細(xì)胞因子發(fā)現(xiàn),AU患者的CCL17和CCL27與Thl細(xì)胞因子呈負(fù)相關(guān)性；其CCL11、CCL17和CCL27與Th2細(xì)胞因子呈正相關(guān)性。CU患者的CCL17、 CCL26和CCL27與Thl細(xì)胞因子呈負(fù)相關(guān)性；其CCL17和CCCL27與Th2細(xì)胞因子呈正相關(guān)性；其CCL11僅與Th2細(xì)胞因子的IL-4具有正相關(guān)性(P0.05)；其CCL26與Th2細(xì)胞因子呈負(fù)相關(guān)性,進(jìn)一步證明Thl、Th2與蕁麻疹的發(fā)生發(fā)展有顯著相關(guān)性。然而,調(diào)控CU的重要免疫球蛋白IgE的水平,在AU組和CU組患者中較對(duì)照組均無(wú)顯著變化(P0.05)。而且CU患者PBMCs中趨化因子含量與血清總IgE和外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)顯著相關(guān)性(P0.05)。以上結(jié)果表明,CU能夠促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化,同時(shí)抑制Th0細(xì)胞向Thl細(xì)胞分化,破壞機(jī)體Th1/Th2的動(dòng)態(tài)平衡。而CCL11、CCL17、CCL26、CCL27不僅與Thl/Th2平衡相關(guān),而且與蕁麻疹的嚴(yán)重程度密切相關(guān),因而可作為AU、CU潛在的輔助診斷指標(biāo),對(duì)未來(lái)蕁麻疹病情及時(shí)診斷具有重要臨床意義。在第二部分研究中,采用變應(yīng)原點(diǎn)刺試驗(yàn)方法對(duì)CU患者進(jìn)行了過(guò)敏原的檢測(cè),并和正常對(duì)照比較,特別是比較這兩者在主要的過(guò)敏粉塵螨陽(yáng)性率方面的差異。將對(duì)粉塵螨過(guò)敏的CU隨機(jī)分成兩組,一組采用SLIT治療方法,另一組接受常規(guī)的抗組胺治療作為對(duì)照組。研究?jī)山M在療效上的差異以及對(duì)PBMCs中四種CC型趨化因子,Th1/Th2細(xì)胞因子表達(dá)水平的差異。研究發(fā)現(xiàn),CCL17、 CCL26和CCL27在蕁麻疹中、重度患者組中的表達(dá)水平顯著高于輕度組和中度組(P0.05)。表明趨化因子CCL17、CCL26和CCL27水平與蕁麻疹的嚴(yán)重程度成正相關(guān),這對(duì)蕁麻疹病情診斷具有一定意義。而經(jīng)過(guò)兩種治療后,SLIT免疫治療組患者的癥狀積分下降指數(shù)SSRI在治療后第16周和24周分別為(0.41±0.19)和(0.73±0.21),對(duì)照組患者第16周和24周的SSRI分別為(0.31±0.15)和(0.47±0.18)。統(tǒng)計(jì)分析表明SLIT免疫治療顯著高于對(duì)照組(P0.05)。免疫治療組和對(duì)照組總有效率分別為72.2%和33.3%,并且免疫治療組顯著高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。綜上所述,SLIT治療方法對(duì)蕁麻疹治療有效,且與常規(guī)抗組胺治療方法有協(xié)同作用,同時(shí)也說(shuō)明SLIT治療CU的機(jī)制不同于抗組胺治療。試驗(yàn)表明SLIT可顯著降低CCL11, CCL17, CCL26表達(dá)水平(P0.05),提高CCL27表達(dá)水平(P0.05),增強(qiáng)Thl細(xì)胞因子IL-2、TNF-2表達(dá)水平(P0.05),并降低Th2細(xì)胞因子IL-4與IL-10表達(dá)水平(P0.05)。 結(jié)果提示SLIT可通過(guò)調(diào)節(jié)趨化因子CCL11, CCL17, CCL26, CCL27表達(dá)含量,顯著糾正機(jī)體Th1/Th2漂移,恢復(fù)機(jī)體Th1/Th2的動(dòng)態(tài)平衡,而常規(guī)治療療效不及SLIT,對(duì)趨化因子及Th細(xì)胞因子水平并無(wú)明顯的改善作用,進(jìn)一步證明趨化因子CCL11, CCL17, CCL26, CCL27與CU的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系,它們可能作為蕁麻疹診斷及療效評(píng)判的潛在生物標(biāo)志物以及治療CU的新靶點(diǎn)。綜上所述,本研究通過(guò)檢測(cè)多種趨化因子及Th1/Th2相關(guān)的細(xì)胞因子水平進(jìn)行大量統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,分析了在CU發(fā)生與治療過(guò)程中趨化因子與Th1/Th2平衡及各種細(xì)胞因子含量之間的相關(guān)性。結(jié)果表明趨化因子CCL11、CCL17、 CCL26、CCL27調(diào)控Th1/Th2平衡。CU的發(fā)生機(jī)制中,趨化因子可能促使Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化,同時(shí)抑制Th0細(xì)胞向Thl細(xì)胞分化,從而升高Th2細(xì)胞因子,降低Thl細(xì)胞因子,破壞機(jī)體Th1/Th2的動(dòng)態(tài)平衡,進(jìn)一步顯著地放大蕁麻疹的癥狀。同時(shí),CCL17、CCL26和CCL27水平與蕁麻疹的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。SLIT治療CU療效顯著,這種顯著效果可能與患者CCL11、CCL17、 CCL26、CCL27水平以及機(jī)體通過(guò)趨化因子等細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)來(lái)調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡有密切的相關(guān)性。這些結(jié)果都進(jìn)一步表明四種趨化因子CCL11、CCL17、CCL26、 CCL27深度參與蕁麻疹的發(fā)病過(guò)程,可能作為潛在的蕁麻疹病情活動(dòng)評(píng)估的生物標(biāo)志物,如果作為靶點(diǎn),來(lái)阻斷疾病發(fā)生發(fā)展,還具有的臨床應(yīng)用前景。另外,無(wú)論是從臨床還是實(shí)驗(yàn)室的角度,對(duì)于確定變應(yīng)原的CU, SLIT展示了有效的治療效果,它能針對(duì)病因治療,改善臨床癥狀,減少疾病復(fù)發(fā),對(duì)于發(fā)作頻繁、癥狀頑固的患者也是值得推薦的療法。本研究的技術(shù)亮點(diǎn)是利用液相多因子平臺(tái),檢測(cè)血清中趨化因子含量。該方法相對(duì)于傳統(tǒng)ELISA準(zhǔn)確高效,節(jié)省珍貴的臨床樣本,而且能夠在同一試驗(yàn)中獲得多重因子檢測(cè)結(jié)果,使獲得的數(shù)據(jù)更為準(zhǔn)確且具有可比性。本研究的不足之處在于獲得的樣本量較少,尤其是采用常規(guī)治療作為對(duì)照組例數(shù)少,進(jìn)一步的臨床應(yīng)用尚需更多樣本進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)與分析。而且這一復(fù)雜的CU調(diào)控機(jī)制有眾多的趨化因子。未來(lái)以更多重的檢測(cè)方法,揭示CU趨化因子表達(dá)譜的變化,對(duì)揭示CU調(diào)控機(jī)理將會(huì)有重大意義。
【關(guān)鍵詞】：蕁麻疹 趨化因子 診斷 特異性免疫治療
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R758.24
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 前言18-27
• 第一章 趨化因子CCL11、CCL17、CCL26、CCL27在AU、CU中的表達(dá)27-66
• 1 資料和方法27-42
• 2 結(jié)果42-58
• 3 討論58-65
• 4 小結(jié)65-66
• 第二章 趨化因子CCL11、CCL17、CCL26、CCL27在CU治療后的表達(dá)66-87
• 1 材料和方法66-72
• 2 結(jié)果72-83
• 3 討論83-86
• 4 小結(jié)86-87
• 結(jié)論87-88
• 參考文獻(xiàn)88-105
• 文獻(xiàn)綜述105-120
• 縮略詞表120-123
• 致謝123-124
• 攻讀學(xué)位期間成果124-125

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 唐利;惠坤;李承新;;EAACI/GA2LEN/EDF/WAO蕁麻疹指南:治療[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2010年09期

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本文編號(hào)：1001155