發(fā)布時(shí)間：2017-08-18 18:09

  本文關(guān)鍵詞：過(guò)敏性休克小鼠類胰蛋白酶、類糜蛋白酶及PAR-2的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 小鼠 過(guò)敏性休克 類胰蛋白酶 類糜蛋白酶 PAR-2

【摘要】：目的本實(shí)驗(yàn)以O(shè)VA(Ovalbumin卵蛋白)為致敏原,以昆明種雄性小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)腹腔注射及尾靜脈注射相結(jié)合的方式致敏小鼠從而建立小鼠過(guò)敏性休克動(dòng)物模型。通過(guò)研究過(guò)敏性休克小鼠外周血血清中類胰蛋白酶、類糜蛋白酶及全血PAR-2(proteinase activated receptor,蛋白酶激活受體2)m RNA的表達(dá)及其相關(guān)性,為臨床中過(guò)敏性休克的治療提供新的思路。方法CL級(jí)昆明種雄性小鼠60只(沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院動(dòng)物中心提供),體重16~25g,隨機(jī)分為兩組,對(duì)照組20只,實(shí)驗(yàn)組40只(為保證取得足夠標(biāo)本,本次試驗(yàn)將致敏組與對(duì)照組按1:2配比小鼠數(shù)量,取標(biāo)本失敗率為50%)。實(shí)驗(yàn)中小鼠均分籠飼養(yǎng),每籠5只,小鼠飼料及清水喂養(yǎng)小鼠1周以適應(yīng)環(huán)境。第1天,實(shí)驗(yàn)組小鼠用滅菌1ml注射器腹腔注射OVA溶液0.25ml,1周后再次腹腔注射相同劑量,待免疫后第3周,用胰島素注射器尾靜脈注射OVA 0.5ml誘發(fā)過(guò)敏性休克。對(duì)照組以PBS緩沖液代替OVA溶液,注射方法及液體劑量同致敏組。觀察兩組小鼠癥狀,一小時(shí)后收集足夠血液(枸櫞酸鈉抗凝管采集,摘除眼球取血法),離心后取血清用于ELISA法(enzyme-linked immunosorbent assay,酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)檢測(cè)類胰蛋白酶及類糜蛋白酶表達(dá)水平;以RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄PCR)法檢測(cè)致敏組和對(duì)照組小鼠全血中PAR-2 m RNA相對(duì)表達(dá)量;脊柱離斷后解剖取肺、胃、腸組織,置于40%甲醛固定,HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察。結(jié)果1.癥狀觀察結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組小鼠尾靜脈注射過(guò)敏原后8min內(nèi)出現(xiàn)不同程度的前肢搔鼻類似于洗臉的動(dòng)作,在籠子中活動(dòng)活躍,約25分鐘后表現(xiàn)為轉(zhuǎn)而表現(xiàn)為匍匐不動(dòng),活動(dòng)量減少,精神萎靡,眼睛微瞇等,部分實(shí)驗(yàn)組小鼠在尾靜脈注射后50分鐘左右能回復(fù)正常狀態(tài),其余小鼠癥狀加重,在尾靜脈注射后50min左右出現(xiàn)趴伏不動(dòng)、行動(dòng)遲緩等表現(xiàn),嚴(yán)重者出現(xiàn)呼吸急促、抽搐甚至大小便失禁,少數(shù)1h左右死亡。正常對(duì)照組小鼠1h內(nèi)觀察沒(méi)有出現(xiàn)上述癥狀。2.組織病理觀察結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組光學(xué)顯微鏡鏡下可見(jiàn)肺臟小血管周圍水腫(+++)、出血,肺泡間隔增寬,肺組織結(jié)構(gòu)破壞;胃腸組織切片可見(jiàn)胃腸粘膜水腫、間隙增寬。正常對(duì)照組小鼠各臟器在檢查未見(jiàn)明顯組織形態(tài)學(xué)變化。3.RT-PCR結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組小鼠全血PAR-2 m RNA相對(duì)表達(dá)量為(3.372±0.28),對(duì)照組全血PAR-2 m RNA相對(duì)表達(dá)量為(0.759±0.062),兩組數(shù)據(jù)比較實(shí)驗(yàn)組PAR-2m RNA相對(duì)表達(dá)量明顯高于對(duì)照組,兩組數(shù)據(jù)間差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)4.ELISA結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組小鼠血清類胰蛋白酶含量為(72.378±8.018ug/l),正常對(duì)照組血清類胰蛋白酶含量為(20.265±1.953ug/l),兩組數(shù)據(jù)比較存在有顯著性差異(P0.01)。致敏后小鼠血清類糜蛋白酶含量(16.186±0.959ug/l),對(duì)照組血清類糜蛋白酶含量(34.905±3.972ug/l),組間比較存差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。5.小鼠血PAR-2 m RNA相對(duì)表達(dá)量與類胰蛋白酶、類糜蛋白酶表達(dá)間相關(guān)性PAR-2 m RNA與類胰蛋白酶表達(dá)呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r=0.837,P0.01,外周血PAR-2 m RNA相對(duì)表達(dá)量與血清類糜蛋白酶表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=㧟0.762,P0.01),血清類胰蛋白酶與類糜蛋白酶的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=㧟0.647,P0.01)。結(jié)論:1.本次實(shí)驗(yàn)成功建立了雄性昆明小鼠過(guò)敏性休克動(dòng)物模型,致敏組臨床癥狀觀察及各臟器病理檢查均支持過(guò)敏性休克的診斷。2.PAR-2作為已知類胰蛋白酶的唯一受體,參與了過(guò)敏性休克的發(fā)作過(guò)程,且在過(guò)敏性休克的發(fā)病機(jī)制中起到正調(diào)節(jié)作用。
【關(guān)鍵詞】：小鼠 過(guò)敏性休克 類胰蛋白酶 類糜蛋白酶 PAR-2
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R593.1
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-20
• 1. 材料15-16
• 2. 方法16-20
• 2.1 動(dòng)物分組16
• 2.2 致敏方法16
• 2.3 動(dòng)物解剖、取樣16
• 2.4 組織病理切片16-17
• 2.5 RT-PCR17-19
• 2.6 外周血血清的收集及血清類胰蛋白酶、類糜蛋白酶 ELISA 測(cè)試19-20
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理20
• 結(jié)果20-25
• 1 小鼠過(guò)敏性休克模型的觀察20-21
• 1.1 兩組小鼠的臨床癥狀20
• 1.2 過(guò)敏性休克死亡解剖及組織病理檢查20-21
• 2 RT-PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-22
• 2.1 RT-PCR 產(chǎn)物鑒定21-22
• 2.2 PAR-2 m RNA 表達(dá)水平22
• 3 血清類胰蛋白酶和類糜蛋白酶表達(dá)水平測(cè)定22-23
• 4 小鼠外周血 PAR-2 相對(duì)表達(dá)量與類胰蛋白酶、類糜蛋白酶間相關(guān)性分析23-25
• 討論25-27
• 結(jié)論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-30
• 文獻(xiàn)綜述30-36
• 參考文獻(xiàn)35-36
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況36-37
• 致謝37-38

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 顧正平,劉曉剛;精制抗狂犬病血清皮試致過(guò)敏性休克1例[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;2000年01期

2 魏妙華,孫蘭平;霍香正氣水引起過(guò)敏性休克1例[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;2000年07期

3 王德才,張玲;中草藥針劑致過(guò)敏性休克51例分析[J];中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志;2000年10期

4 肖錦茂;抗狂犬病血清皮試發(fā)生過(guò)敏性休克二例報(bào)告[J];湖北預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2000年04期

5 朱江風(fēng),陳欽炎,陳秀;過(guò)敏性休克32例診治體會(huì)[J];廣西醫(yī)學(xué);2000年02期

6 許榕椿,方令平,沈順華;林可霉素致過(guò)敏性休克1例[J];海峽藥學(xué);2000年02期

7 王志萍,莊碧瑗,陳瑞蓮;壹枚肽引起過(guò)敏性休克1例[J];海峽藥學(xué);2000年04期

8 歐云鵬;虻叮咬致過(guò)敏性休克2例報(bào)告[J];邯鄲醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校學(xué)報(bào);2000年03期

9 穆雪霞;食用甲魚(yú)致過(guò)敏性休克搶救1例[J];淮海醫(yī)藥;2000年02期

10 劉紅梅,張慧琴;破傷風(fēng)抗毒素皮試致過(guò)敏性休克1例[J];華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 席淑華;;過(guò)敏性休克的救治[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1996年

2 姬新才;伏軍賢;秦國(guó)榮;;90例過(guò)敏性休克搶救的臨床體會(huì)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];1996年

3 周紹喻;普忠文;;維生素K_1致過(guò)敏性休克3例[A];玉溪市第十二屆內(nèi)科學(xué)術(shù)年會(huì)講義[C];2008年

4 崔娜;劉大為;王郝;周翔;張青;;致死性過(guò)敏性休克的心功能評(píng)價(jià)[A];第三屆重癥醫(yī)學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2009年

5 尹佳;;中國(guó)一線臨床醫(yī)生面臨的新挑戰(zhàn):過(guò)敏性休克[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)2009年全國(guó)變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

6 喬永靈;;雙黃連針劑致過(guò)敏性休克2例[A];中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)會(huì)基層中醫(yī)藥會(huì)議�？痆C];1997年

7 李長(zhǎng)深;徐德琴;楊玉蘭;尹長(zhǎng)奎;吳閨英;;過(guò)敏性休克51例搶救的體會(huì)(摘要)[A];第三次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];1990年

8 戴日靜;;抗栓酶—3號(hào)致過(guò)敏性休克2例[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國(guó)第五次急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];1994年

9 李華林;汪吉儀;;過(guò)敏性休克41例搶救分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國(guó)第五次急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];1994年

10 林雪玲;;二例碘劑過(guò)敏性休克搶救的體會(huì)[A];2000年全國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;過(guò)敏性休克的發(fā)生機(jī)制[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

2 付德明;警惕林可霉素過(guò)敏性休克[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

3 何山 云南省第一人民醫(yī)院兒科醫(yī)師;搶救過(guò)敏性休克：“快”字當(dāng)頭[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2011年

4 本報(bào)記者 慕欣　魏平 藍(lán)愉華(實(shí)習(xí));搶救過(guò)敏性休克：腎上腺素大劑量還是小劑量[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2011年

5 洪悅民;過(guò)敏性休克的急救體會(huì)[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

6 雷招寶;維生素K1注射液的過(guò)敏性休克反應(yīng)值得注意[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

7 王樂(lè)民;兩種注射劑可引起過(guò)敏性休克[N];健康報(bào);2007年

8 北京市房山區(qū)長(zhǎng)陽(yáng)鎮(zhèn)夏場(chǎng)村衛(wèi)生室 張海濱邋博士;警惕身邊的“炸彈”[N];健康報(bào);2008年

9 記者 王建影　特約記者 段文利;過(guò)敏性休克死亡多因搶救藥物選擇不當(dāng)[N];健康報(bào);2008年

10 特約記者段文利;吃面條后跑步能致人死命?[N];健康報(bào);2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 李亦梅;包蟲(chóng)病所致過(guò)敏性休克患者免疫學(xué)保護(hù)性因素的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

2 高彩榮;過(guò)敏性休克和猝死的法醫(yī)病理學(xué)診斷研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬龍;Th17細(xì)胞在囊型包蟲(chóng)病所致過(guò)敏性休克中的作用[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2016年

2 謝洪波;IgE、P物質(zhì)在過(guò)敏性休克死亡豚鼠臟器中的表達(dá)及法醫(yī)學(xué)意義[D];南昌大學(xué);2016年

3 黃建偉;TLR4在過(guò)敏性休克死亡豚鼠中的表達(dá)及法醫(yī)學(xué)意義[D];南昌大學(xué);2016年

4 陳潔;過(guò)敏性休克小鼠類胰蛋白酶、類糜蛋白酶及PAR-2的表達(dá)[D];大連醫(yī)科大學(xué);2016年

5 王昌亮;豚鼠過(guò)敏性休克組織中相關(guān)介質(zhì)的表達(dá)及法醫(yī)學(xué)意義[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

6 李曉潔;血管細(xì)胞黏附分子-1在過(guò)敏性休克大鼠器官中的作用及其表達(dá)規(guī)律[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

7 林屹;人體組織的過(guò)敏性休克實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2006年

8 常利民;預(yù)防接種后發(fā)生的過(guò)敏性休克及其他相關(guān)疾病參考診斷標(biāo)準(zhǔn)的探索性研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2012年

9 景麗霞;采用流式細(xì)胞術(shù)分析過(guò)敏性休克大鼠嗜堿性粒細(xì)胞活化試驗(yàn)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2014年

10 王巖;關(guān)于過(guò)敏性休克死者蛋白酶激活受體-2和SC5b-9的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：695987