本文關(guān)鍵詞：MiR-216b靶向抑制ABCG1表達(dá)對(duì)破骨細(xì)胞分化、融合及生存的影響

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【摘要】：目的:探討miR-216b是否能通過(guò)靶向作用于ABCG1 3'UTR并抑制其表達(dá),觀察過(guò)表達(dá)或沉默miR-216b后對(duì)破骨細(xì)胞分化、融合、生存的影響及相關(guān)機(jī)制。方法:應(yīng)用生物學(xué)信息分析網(wǎng)(microRNA.org)及在線軟件尋找與ABCG1能靶向結(jié)合的Micro RNAs,分析與預(yù)測(cè)各物種間miR-216b的保守性、靶基因、ABCG1 3'UTR序列及miR-216b ABCG1結(jié)合自由能、結(jié)合位點(diǎn)等基本信息。不同濃度(0、10、20、40、80nm)miR-216b mimics或miR-216b inhibitor及不同時(shí)間(0、12、24、48h)處理細(xì)胞,通過(guò)TRAP染色檢測(cè)破骨細(xì)胞生成情況,計(jì)算TRAP陽(yáng)性成熟破骨細(xì)胞數(shù)目、直徑及融合核數(shù)目;實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)ABCG1 m RAN表達(dá)水平,Western blot檢測(cè)ABCG1蛋白質(zhì)表達(dá)水平。miR-216b mimics、miR-216b inhibitor或miR-216b inhibitor+ABCG1 si RNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h后,通過(guò)TRAP染色檢測(cè)破骨細(xì)胞生成情況,計(jì)算TRAP陽(yáng)性成熟破骨細(xì)胞數(shù)目、直徑及融合核數(shù)目;實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)ABCG1 m RAN表達(dá)水平,Western blot檢測(cè)ABCG1蛋白質(zhì)表達(dá)水平,液體閃爍計(jì)數(shù)儀檢測(cè)其膽固醇流出情況。結(jié)果:生物學(xué)信息分析網(wǎng)及在線軟件分析結(jié)果顯示miR-216b在多物種間具有高度保守性,多個(gè)靶標(biāo)預(yù)測(cè)網(wǎng)站發(fā)現(xiàn)miR-216b能與ABCG1 3'UTR發(fā)生靶向結(jié)合并調(diào)控其靶標(biāo)基因的表達(dá)。miR-216b能抑制ABCG1蛋白及m RNA的表達(dá),且對(duì)ABCG1蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)具有時(shí)間與濃度依賴性,進(jìn)而增加破骨細(xì)胞數(shù)目、直徑、融合核數(shù)目,促進(jìn)RAW264.7巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化、融合及其生存。miR-216b inhibitor能上調(diào)ABCG1蛋白及m RNA的表達(dá),且對(duì)ABCG1蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)具有時(shí)間與濃度依賴性,進(jìn)而減少破骨細(xì)胞數(shù)目、直徑、融合核數(shù)目,抑制RAW264.7巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化、融合及其生存。miR-216b inhibitor與ABCG1 si RNA同時(shí)處理細(xì)胞后,證實(shí)miR-216b通過(guò)下調(diào)細(xì)胞內(nèi)ABCG1蛋白表達(dá),減少細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出。結(jié)論:miR-216b通過(guò)靶向抑制ABCG1的表達(dá)減少破骨細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出,促進(jìn)破骨細(xì)胞分化、融合及生存。
【關(guān)鍵詞】：miR-216b ABCG1 破骨細(xì)胞 膽固醇流出
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R580
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料15-19
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑15-16
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)器材16-17
• 2.3 microRNA公共數(shù)據(jù)庫(kù)及在線軟件17-19
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法19-29
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)（RAW264.7/HEK293T）19-20
• 3.2 誘導(dǎo)分化及細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-216b mimics/inhibitor及ABCG1siRNA20-21
• 3.3 細(xì)胞總蛋白的提取21
• 3.4 實(shí)時(shí)定量PCR21-22
• 3.5 Western blot22
• 3.6 抗酒石酸酸性磷酸酶染色22-23
• 3.7 膽固醇流出檢測(cè)23
• 3.8 高效液相色譜法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇23-24
• 3.9 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)24-27
• 3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27-29
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-53
• 4.1 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)提示miR-216b能靶向作用于ABCG1 mRNA3′UTR29-33
• 4.2 不同濃度的miR-216b能下調(diào)破骨細(xì)胞內(nèi)ABCG1表達(dá)及促進(jìn)破骨細(xì)胞形成、分化及融合33-37
• 4.3 不同濃度的miR-216b inhibitor能上調(diào)破骨細(xì)胞內(nèi)ABCG1表達(dá)及抑制破骨細(xì)胞形成、促進(jìn)其凋亡37-42
• 4.4 miR-216b mimics/inhibitor處 理不同時(shí)間對(duì)破骨細(xì)胞內(nèi)ABCG1表達(dá)及破骨細(xì)胞形成、分化及融合的影響42-47
• 4.5 miR-216b通過(guò)靶向抑制ABCG1表達(dá)，，減少胞內(nèi)膽固醇流出，促進(jìn)破骨細(xì)胞形成、融合及生存47-53
• 第5章 討論53-57
• 第6章 結(jié)論57-59
• 參考 文獻(xiàn)59-63
• 主要英文縮略語(yǔ)索引63-65
• 文獻(xiàn)綜述 高脂血癥與骨質(zhì)疏松65-75
• 參考文獻(xiàn)70-75
• 攻讀學(xué)位期間所獲科研成果75-77
• 致謝77-78
• 基金78

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7 王晨;重組腺病毒介導(dǎo)siCXCR2抑制磨損顆粒誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化成熟的作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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