本文關(guān)鍵詞：白介素-22改善游離脂肪酸誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景：糖尿病是一種由遺傳、環(huán)境和行為等多種致病因素導(dǎo)致的以慢性血糖升高為特征的內(nèi)分泌代謝性疾病。作為死亡率僅次于腫瘤和心腦血管疾病的第三大慢性非傳染性疾病,糖尿病的并發(fā)癥包括視網(wǎng)膜病變、周圍神經(jīng)病變、糖尿病腎病,而這些不僅增加了社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),而且嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量。隨著經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展,人們的體力勞動(dòng)強(qiáng)度及生活飲食方式發(fā)生了明顯的變化,加上人口老齡化的問題,我國的糖尿病患病率在近年來迅速增長,從1980年的低于1%,1994年的2.5%,2002年的5.5%,2007年的9.7%,增長至如今的11.6%。據(jù)國內(nèi)最新的流行病學(xué)數(shù)據(jù),目前我國有約1億多的成人糖尿病患者,近5億的糖尿病前期人群,因此,糖尿病已成為我國一個(gè)不可忽視的公共衛(wèi)生問題。在2型糖尿病中,由于β細(xì)胞功能衰竭和長期的胰島素抵抗,機(jī)體內(nèi)的胰島素需求不斷增加,而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是胰島素原的主要加工成熟場(chǎng)所,因此導(dǎo)致β細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)不堪負(fù)荷。這一過程加上血液中高水平的脂肪和葡萄糖刺激,激活了細(xì)胞在高分泌活動(dòng)時(shí)的重要適應(yīng)性細(xì)胞信號(hào)反應(yīng),即非折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response, UPR),也就是大家熟知的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,而過度或持久的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激又可干擾β細(xì)胞功能,形成一個(gè)惡性循環(huán)。前期研究表明,胰島β細(xì)胞長期暴露于高脂環(huán)境中,細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生過多的活性氧分子,從而導(dǎo)致氧化應(yīng)激,干擾細(xì)胞的新陳代謝,激活免疫系統(tǒng)；另外,氧化應(yīng)激也可干擾胰島素在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的加工過程,導(dǎo)致胰島素合成減少,刺激免疫系統(tǒng),甚至引發(fā)p細(xì)胞凋亡。因此,在脂毒性的作用下,氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是導(dǎo)致胰島p細(xì)胞凋亡和功能異常的重要因素。而最新的研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)將一種特定的細(xì)胞因子——白介素-22(interleukin-22, IL-22)喂給肥胖與糖尿病小鼠時(shí),可保護(hù)p細(xì)胞免于負(fù)荷并完全恢復(fù)對(duì)血糖的控制,結(jié)果顯示此作用是通過減輕p細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激而達(dá)成的。IL-22,屬于IL-10細(xì)胞因子家族,其受體廣泛分布在皮膚、肝臟、腎臟以及某些呼吸道和胃腸道系統(tǒng)的組織細(xì)胞,其具體效應(yīng)卻因?yàn)榻M織特異性或其他炎性因子環(huán)境的差異而截然不同。早在2008年,研究發(fā)現(xiàn)IL-22受體在胰島中包括p細(xì)胞中豐富表達(dá),提示IL-22具有影響p細(xì)胞的功能及命運(yùn)的能力。隨著研究的深入,人們不僅發(fā)現(xiàn)IL-22可促進(jìn)胰島p細(xì)胞的增殖和減輕糖尿病足的炎癥反應(yīng),而且逐步揭示了IL-22的作用受自噬途徑所調(diào)節(jié)。眾所周知,自噬對(duì)于維持p細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、數(shù)量和功能等具有重要作用,而有研究表明自噬可能通過減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激實(shí)現(xiàn)對(duì)p細(xì)胞的保護(hù)作用。由此,我們猜測(cè),IL-22可減輕高脂引起的氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,其機(jī)制可能與激活自噬途徑有關(guān)。本研究以大鼠INS-1胰島μ細(xì)胞為研究對(duì)象,從細(xì)胞水平研究游離脂肪酸是否引起INS-1胰島p細(xì)胞的氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及IL-22對(duì)其是否有保護(hù)作用,進(jìn)一步明確IL-22是否通過激活自噬途徑拮抗游離脂肪酸引起的氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,從而為糖尿病的發(fā)病機(jī)制和防治策略提供新的理論依據(jù)和思維視角。第一部分游離脂肪酸對(duì)INS-1胰島p細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的影響及白介素-22對(duì)其的作用目的：本部分實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的大鼠INS-1胰島p細(xì)胞為研究對(duì)象,觀察游離脂肪酸對(duì)大鼠胰島p細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有何影響,及IL-22對(duì)高脂影響下的胰島p細(xì)胞是否有保護(hù)作用。方法；1.實(shí)驗(yàn)分組探討不同濃度棕櫚酸(palmitate acid, PA)對(duì)INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響時(shí)按以下分組：空白對(duì)照組、BSA對(duì)照組、0.1mM PA組、0.25mM PA組、0.5mMPA組、0.75mM PA組,分別作用細(xì)胞24h;探討PA作用不同時(shí)間對(duì)INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響時(shí)按以下分組：空白對(duì)照組、6h組、12h組、24h組、36h組、48h組,以0.5mM PA作用細(xì)胞；探討PA對(duì)INS-1細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響時(shí)按以下分組：空白對(duì)照組、0.5mM PA組、NAC組,分別作用細(xì)胞24h；探討IL-22對(duì)PA作用下的INS-1細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響時(shí)按以下分組：空白對(duì)照組、0.5mMPA組、0.5mM PA+50ng/ml IL-22組,分別作用細(xì)胞24h。2.INS-1細(xì)胞培養(yǎng)復(fù)蘇大鼠INS-1胰島p細(xì)胞后,用含10%胎牛血清、50μmmol/L β-巰基乙醇、10mmol/L HEPES試劑、1mmol/L丙酮酸鈉,100mg/L鏈霉素和1×10SIU/L青霉素的RPMI-1640完全培養(yǎng)基,置于37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)細(xì)胞。2-3天換液或傳代一次。3. DCFH-DA熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧將INS-1細(xì)胞接種在六孔板中,同步化處理后按實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行干預(yù)。培養(yǎng)結(jié)束后,各組中分別加入終濃度為10μM的DCFH-DA,37℃、5%孵箱內(nèi)避光孵育20-30min后,用PBS洗滌細(xì)胞三次。加入0.5mL的無血清RPMI-1640培養(yǎng)基并在熒光倒置顯微鏡下觀察拍照。隨后用胰酶消化并收集細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組的熒光強(qiáng)度,由此判斷細(xì)胞內(nèi)的活性氧情況。4. Western blot法檢測(cè)細(xì)胞GRP78及CHOP蛋白的表達(dá)水平INS-1細(xì)胞培養(yǎng)在六孔板中,同步化處理后按各組處理因素(空白對(duì)照組、0.5mM PA組、0.5mM PA及500μmol/ml NAC聯(lián)合處理組)。收集各組細(xì)胞后,提取細(xì)胞總蛋白,隨后用BCA法測(cè)定其蛋白濃度。當(dāng)SDS-PAGE電泳結(jié)束后即可進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,并室溫封閉2h。洗膜三次后加入兔抗鼠GRP78、CHOP及GAPDH多克隆抗體室溫孵育2h,然后洗膜三次,用HRP標(biāo)記的二抗室溫振蕩孵育2h。洗膜三次后,用ECL發(fā)光液1ml孵育5分鐘,顯影、定影并掃描為圖像。圖像用Quantity One圖像分析軟件進(jìn)行灰度分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,方差齊時(shí),多樣本比較采用單向方差分析(One-Way ANOVA)檢驗(yàn),組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)；方差不齊時(shí),多樣本比較采用校正Welch檢驗(yàn),組間兩兩比較采用Dunnett T3法。P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.PA對(duì)INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響1.1不同濃度PA對(duì)細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響INS-1細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)24小時(shí)后,熒光顯微鏡下觀察0.1、0.25、0.5mM及0.75mM PA組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度比空白對(duì)照及BSA對(duì)照組明顯增強(qiáng),而且0.1、0.25mM及0.5mM PA組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度隨PA的濃度升高而增強(qiáng)。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,0.1、0.25、0.5mM及0.75mM PA作用INS-1細(xì)胞24h后,細(xì)胞內(nèi)的ROS含量(DCFH平均熒光強(qiáng)度)分別是183.045±3.169,283.117±3.973,326.479±4.097,164.069±4.174,均顯著高于空白對(duì)照組(100.000±3.436)和BSA對(duì)照組(106.205±3.637)(P=0.000)。而且,0.25mM PA組顯著高于O.1mM PA組(P=0.000),0.5mM PA組顯著高于0.25mM PA組(P=0.000)及0.1mM PA組(P=0.000)。1.2 PA作用不同時(shí)間對(duì)INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響0.5mM PA分別作用INS-1細(xì)胞6h、12h、24h、36h、48h后,熒光顯微鏡顯示,6h、12h、24h、36h、48h組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度比空白對(duì)照組明顯增強(qiáng),而且6h、12h及24h這三組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度隨時(shí)間的延長而增強(qiáng)。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,0.5mM PA分別作用INS-1細(xì)胞6h、12h、24h、36h及48h,細(xì)胞內(nèi)的ROS含量分別為177.168±5.091,245.154±3.095,255.227+2.153,119.409±2.605, 115.237±2.162,均高于空白對(duì)照組(100.000±1.521)(P=0.000)。而且,12h組顯著高于6h組(P=0.000),24h組顯著高于6h組(P=0.000)及12h組(P=0.001)。2.PA通過氧化應(yīng)激途徑對(duì)INS-1細(xì)胞引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在以上PA作用不同濃度、不同時(shí)間對(duì)INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響實(shí)驗(yàn)中,我們得出0.5mM PA干預(yù)細(xì)胞24小時(shí)是最合適的濃度和時(shí)間。因此,在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中,我們使用該濃度及時(shí)間為合適的干預(yù)條件。各組細(xì)胞經(jīng)干預(yù)24h后,PA組的GRP78及CHOP蛋白表達(dá)水平分別為2.207±0.085,2.105-0.164,顯著高于空白對(duì)照組(0.979±0.040,1.088±0.057)(P0.05),而NAC組的GRP78及CHOP蛋白表達(dá)水平分別為1.613±0.063,1.788±0.093,顯著低于PA組(P0.05)。3.IL-22對(duì)PA誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響3.1 IL-22對(duì)PA誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響INS-1細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)24小時(shí)后,熒光顯微鏡下觀察PA組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度比空白對(duì)照組明顯增強(qiáng),而PA+IL-22組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度比PA組顯著減少。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,PA組細(xì)胞內(nèi)的ROS含量(DCFH平均熒光強(qiáng)度)是827.265±134.803,顯著高于空白對(duì)照組(100.000±7.961)(P=0.000)。PA+IL-22組細(xì)胞的ROS含量為239.207±148.325,與PA組相比顯著降低(P=0.000)。3.2IL-22對(duì)PA誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響各組細(xì)胞干預(yù)24h后,PA組的GRP78及CHOP蛋白表達(dá)水平分別為2.485±0.101,2.270±0.127,顯著高于空白對(duì)照組(1.083±0.170,1.076±0.164)(P0.05)。PA+IL-22組細(xì)胞的GRP78及CHOP蛋白表達(dá)水平分別為1.877±0.056,1.489±0.042,與PA組相比顯著降低(P0.05)。結(jié)論：PA能以劑量及時(shí)間依賴性誘導(dǎo)INS-1胰島μ細(xì)胞氧化應(yīng)激增強(qiáng),并且通過增加細(xì)胞內(nèi)ROS的含量使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白GRP78、CHOP的表達(dá)增多；而加入IL-22后,PA引起的INS-1胰島μ細(xì)胞內(nèi)ROS含量及GRP78、CHOP等表達(dá)水平明顯減少。本部分實(shí)驗(yàn)證明IL-22對(duì)PA誘導(dǎo)的INS-1胰島μ細(xì)胞氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有保護(hù)作用。第二部分白介素-22對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)INS-1胰島μ細(xì)胞氧化及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的保護(hù)作用的相關(guān)機(jī)制目的：通過上述實(shí)驗(yàn)我們觀察到IL-22對(duì)PA誘導(dǎo)的INS-1胰島μ細(xì)胞氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有保護(hù)作用,本部分實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步明確該保護(hù)作用的相關(guān)機(jī)制,為防治糖尿病提供新的理論依據(jù)。方法：1.透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)自噬的超微結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)分組：空白對(duì)照組；PA組(含0.5mM PA); PA+IL-22組(含0.5mM PA及50ng/ml IL-22)。將INS-1細(xì)胞培育于六孔板中,各孔同步化處理后按實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)細(xì)胞24h。丟棄培養(yǎng)液并用PBS溶液洗滌2次后,用細(xì)胞刮收集細(xì)胞并離心�！毓鼙诰徛尤�3%戊二醛溶液于4℃固定2h后,漂洗三次。然后,用丙酮梯度脫水和1%醋酸鈾塊染2小時(shí),完全浸滲后用環(huán)氧樹脂包埋。接著將標(biāo)本超薄切片,并用醋酸鈾和枸櫞酸鉛雙重染色。最后,置于透射電子顯微鏡下觀察并攝片。2.細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)LC3B的表達(dá)實(shí)驗(yàn)分組同上。各孔同步化處理后按實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)細(xì)胞24小時(shí)后,丟棄細(xì)胞培養(yǎng)液并漂洗3次。然后用4%多聚甲醛固定后,用PBS溶液洗滌3次。封閉后,用1%BSA稀釋的一抗4℃孵育過夜。漂洗3次后,加入1%BSA稀釋的相應(yīng)二抗于室溫孵育1h。漂洗三次后加入5μg/ml DAPI染色2min,并用抗淬滅封片劑封片。最后,利用熒光顯微鏡觀察、拍照。3. Western blot法檢測(cè)細(xì)胞Beclin-1、LC3B、GRP78及CHOP蛋白的表達(dá)水平檢測(cè)Beclin-1及LC3B蛋白的表達(dá)水平時(shí)實(shí)驗(yàn)分為3組：空白對(duì)照組；PA組(含0.5mM PA); PA+IL-22組(含0.5mM PA及50ng/ml IL-22)。檢測(cè)GRP78及CHOP蛋白的表達(dá)水平時(shí)實(shí)驗(yàn)分為4組：空白對(duì)照組；PA組(含0.5mM PA); PA+IL-22組(含0.5mM PA及50ng/ml IL-22); PA+IL-22+3-MA組(含0.5mM PA、50ng/ml IL-22及5mM3-MA)。具體方法同第一章。4. DCFH-DA熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧實(shí)驗(yàn)分組：空白對(duì)照組；PA組(含0.5mM PA); PA+IL-22組(含0.5mM PA及50ng/ml IL-22); PA+IL-22+3-MA組(含0.5mM PA、50ng/ml IL-22及5mM 3-MA).具體方法同第一章。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：同第一章。結(jié)果：1.IL-22可誘導(dǎo)PA作用下的INS-1細(xì)胞的自噬發(fā)生1.1透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)自噬的超微結(jié)構(gòu)各組細(xì)胞干預(yù)24h,利用透射電子顯微鏡可見,在空白對(duì)照組,細(xì)胞內(nèi)線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器結(jié)構(gòu)正常,胞質(zhì)中未發(fā)現(xiàn)空泡化改變,僅可見少量自噬；在PA組(含0.5mM PA)可見自噬相關(guān)結(jié)構(gòu)增多,線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器較空白對(duì)照組腫脹,且胞質(zhì)出現(xiàn)輕微空泡化改變：在PA+IL-22組(含0.5mM PA及50ng/ml IL-22)中,胞質(zhì)出現(xiàn)空泡化改變,并出現(xiàn)大量包含細(xì)胞內(nèi)容物及細(xì)胞器的自噬相關(guān)結(jié)構(gòu)。1.2熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)LC3B蛋白的表達(dá)水平用細(xì)胞免疫熒光法觀察INS-1細(xì)胞質(zhì)內(nèi)LC3B的表達(dá)情況：LC3B為綠色熒光,細(xì)胞核為藍(lán)色。各組細(xì)胞干預(yù)24h后,利用熒光顯微鏡,可見PA+IL-22組細(xì)胞內(nèi)LC3B的表達(dá)顯著高于空白對(duì)照組及PA組。1.3 IL-22上調(diào)PA作用下的INS-1細(xì)胞內(nèi)Beclin-1及LC3B蛋白的表達(dá)水平各組細(xì)胞干預(yù)24h后, western blot結(jié)果顯示：PA+IL-22組的Beclin-1及LC3B蛋白表達(dá)水平分別為2.177±0.166,1.464±0.105,顯著高于空白對(duì)照組(0.629±0.065,0.118±0.004)及PA組(1.071±0.084,0.773±0.091)(P0.05)。2.IL-22通過自噬途徑減輕PA誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激2.1 IL-22通過自噬途徑減輕PA誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞的氧化應(yīng)激INS-1細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)24小時(shí)后,熒光顯微鏡下觀察PA組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度比空白對(duì)照組明顯增強(qiáng),而PA+IL-22組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度比PA組顯著減少。然而,在PA+IL-22+3-MA組,IL-22的上述作用可被逆轉(zhuǎn),該組細(xì)胞的熒光強(qiáng)度比PA+IL-22組顯著增強(qiáng)。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,PA組細(xì)胞內(nèi)的ROS含量(DCFH平均熒光強(qiáng)度)是370.467±25.461,顯著高于空白對(duì)照組(100.000±3.657)(P=0.000)。PA+IL-22組細(xì)胞的ROS含量為164.377±16.999,與PA組相比顯著降低(P=0.000)。然而,加入自噬阻斷劑3-MA后,IL-22的上述作用可被逆轉(zhuǎn),PA+IL-22+3-MA組細(xì)胞的ROS含量為283.853±8.530,比PA+IL-22組顯著增加(P=0.000)。2.2 IL-22通過自噬途徑減輕PA誘導(dǎo)的INS-1細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激INS-1細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)24h后,western blot結(jié)果顯示：PA組的GRP78及CHOP蛋白表達(dá)水平分別為2.520±0.027,2.546±0.054,顯著高于空白對(duì)照組(1.136±0.013,1.115±0.019) (P0.05)。PA+IL-22組細(xì)胞的GRP78及CHOP蛋白表達(dá)水平分別為1.671±0.062,1.529±0.015,與PA組相比顯著降低(P0.05)。然而,加入自噬阻斷劑3-MA后,IL-22的上述作用可被逆轉(zhuǎn),PA+IL-22+3-MA組細(xì)胞的GRP78及CHOP蛋白表達(dá)水平分別為2.106±0.081,2.263±0.033,比PA+IL-22組顯著增強(qiáng)(P0.05)。結(jié)論：IL-22能誘導(dǎo)PA作用下的INS-1胰島μ細(xì)胞自噬的發(fā)生,并通過自噬途徑減輕PA誘導(dǎo)的INS-1胰島μ細(xì)胞氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。
【關(guān)鍵詞】：白介素-22 游離脂肪酸 氧化應(yīng)激 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 自噬
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.1
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-24
• 前言24-32
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 第一部分 游離脂肪酸對(duì)INS-1胰島B細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的影響及白介素-22對(duì)其的作用32-55
• 1. 材料與試劑33-38
• 2. 方法與步驟38-42
• 3. 結(jié)果42-47
• 4. 討論47-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 第二部分 白介素-22對(duì)游離脂肪酸誘導(dǎo)INS-1胰島B細(xì)胞氧化及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的保護(hù)作用的相關(guān)機(jī)制55-73
• 1. 材料與試劑55-59
• 2. 方法與步驟59-61
• 3. 結(jié)果61-67
• 4. 討論67-70
• 參考文獻(xiàn)70-73
• 全文小結(jié)73-74
• 英文縮略詞表74-75
• 碩士研究生期間發(fā)表論文情況75-76
• 致謝76-77

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1 杜海榮;nano-TiO_2與PbAc聯(lián)合誘導(dǎo)人胚肝細(xì)胞氧化應(yīng)激和凋亡作用研究[D];華中科技大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王穎;七鰓鰻PHB2增強(qiáng)細(xì)胞氧化應(yīng)激耐受的作用及機(jī)制初探[D];遼寧師范大學(xué);2015年

2 唐季清;麥胚抗氧化肽RVF對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激的調(diào)控及其機(jī)理研究[D];長沙理工大學(xué);2014年

3 胡敏靈;白介素-22改善游離脂肪酸誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

4 李娜;脂聯(lián)素對(duì)高糖環(huán)境下RPE細(xì)胞氧化應(yīng)激及凋亡的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

5 成靚;轉(zhuǎn)錄因子FOXM1在細(xì)胞氧化應(yīng)激中特定功能的研究[D];湖南大學(xué);2013年

6 王蔚;細(xì)胞氧化應(yīng)激過程中受PRAK調(diào)控的磷酸化蛋白的鑒定[D];東北林業(yè)大學(xué);2010年

7 韓雪琳;熱休克蛋白90在HepG2細(xì)胞氧化應(yīng)激與適應(yīng)中的作用研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

8 周清;Exendin-4對(duì)甲基乙二醛誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

9 孫艷;HO-1在軟脂酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 李鋌;多巴胺D1受體對(duì)RGC-5細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用及其機(jī)理研究[D];吉林大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：641310