本文關(guān)鍵詞：2型糖尿病大鼠模型的建立及攜帶adipsin基因重組腺病毒治療2型糖尿病大鼠模型的初步研究

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【摘要】：2型糖尿病是由于胰島素抵抗引起的葡萄糖代謝能力下降,并伴隨著代償性胰島素分泌而引起的胰島p細(xì)胞功能缺陷最終胰島素分泌不足導(dǎo)致的疾病。研究表明脂肪細(xì)胞生成的細(xì)胞信號(hào)蛋白adipsin在刺激胰島素分泌、降低胰島素抵抗、控制血糖中具有重要的調(diào)控作用。為研究adipsin在2型糖尿病大鼠模型中的治療作用,本研究通過重組腺病毒系統(tǒng)將adipsin基因傳遞至Zucker Diabetic Fatty (ZDF)大鼠與2型糖尿病SD大鼠體內(nèi),對(duì)2型糖尿病進(jìn)行治療,研究結(jié)果為進(jìn)一步研究脂肪因子adipsin與代謝系統(tǒng)之間相互作用的分子機(jī)制提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究首先利用重組腺病毒表達(dá)系統(tǒng)PadEasy,構(gòu)建pAdEasy-CMV-adipsin腺病毒質(zhì)粒,在HEK293細(xì)胞中成功包裝出重組腺病毒Ad-adipsin,通過PCR和免疫印跡(Western Blot)檢測(cè)adipsin蛋白在HEK293細(xì)胞中獲得了表達(dá)。其次,通過高脂高糖喂養(yǎng)并結(jié)合STZ成功誘導(dǎo)出具有高血糖、高血脂、胰島素抵抗的2型糖尿病SD大鼠模型。在測(cè)定重組腺病病毒滴度后,通過尾靜脈注射Ad-adipsin治療2型糖尿病大鼠模型。結(jié)果顯示,治療后的2型糖尿病模型大鼠的空腹血糖值(FPG)、空腹胰島素值(FINS)、血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)等與注射重組腺病毒Ad-lacZ對(duì)照組2型糖尿病模型大鼠相比有顯著下降(P0.05),并且胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)顯著降低(P0.05),其中治療后的2型糖尿病SD大鼠血糖可以控制在較低水平長(zhǎng)達(dá)6周。治療結(jié)果顯示重組腺病毒Ad-adipsin可以有效的改善2型糖尿病模型大鼠的糖尿病狀況。
【關(guān)鍵詞】：2型糖尿病 adipsin 重組腺病毒 基因治療
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.1;R-332
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 前言7-10
• 第一部分 攜帶Adipsin基因的重組腺病毒構(gòu)建及鑒定10-29
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法10-23
• (一) 實(shí)驗(yàn)材料10-13
• 1、動(dòng)物及細(xì)胞來源10
• 2、主要試劑及耗材10-12
• 3、主要儀器12-13
• (二) 試驗(yàn)方法13-23
• 1、目的基因adipsin克隆引物合成13
• 2、目的基因Adipsin的PCR擴(kuò)增13-14
• 3、穿梭質(zhì)粒pShuttle-CMV-adipsin的構(gòu)建14-15
• 4、pAdEasy-CMV-adipsin腺病毒載體的構(gòu)建15-18
• 5、重組腺病毒質(zhì)粒pAdEasy-CMV-adipsin篩選18-19
• 6、重組腺病毒Ad-adipsin包裝19-20
• 7、重組腺病毒Ad-adipsin擴(kuò)增與形態(tài)觀察20
• 8、重組腺病毒Ad-adipsin滴度測(cè)定20-22
• 9、RT-PCR檢測(cè)基因adipsin在重組重組腺病毒中的轉(zhuǎn)錄情況22
• 10、免疫印跡(Western Blot)檢測(cè)重組腺病毒中adipsin蛋白表達(dá)22-23
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析23-27
• 1、PCR獲取Adipsin目的基因23-24
• 2、Ad-adipsin構(gòu)建相關(guān)質(zhì)粒酶切鑒定24-25
• 3、Ad-adipsin病毒形態(tài)觀察和滴度測(cè)定25-26
• 4、Ad-adipsin重組腺病毒中adipsin基因鑒定和Westernblot鑒定26-27
• 三、討論27-29
• 第二部分 2型糖尿病大鼠模型建立與重組腺病毒Ad-adipsin對(duì)其治療作用的評(píng)價(jià)29-44
• 一、實(shí)驗(yàn)材料及方法29-32
• (一) 實(shí)驗(yàn)材料29-30
• 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物29-30
• 2、主要試劑及耗材30
• 3、主要儀器30
• (二) 實(shí)驗(yàn)方法30-32
• 1、高脂高糖結(jié)合STZ誘導(dǎo)2型糖尿病SD大鼠模型建立30-31
• 2、重組腺病毒Ad-adipsin對(duì)2型糖尿病大鼠模型ZDF大鼠治療作用及評(píng)價(jià)31-32
• 3、重組腺病毒Ad-adipsin對(duì)高脂高糖誘導(dǎo)聯(lián)合STZ 2型糖尿病大鼠治療作用及評(píng)價(jià)32
• 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法32
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析32-42
• 1、高脂高糖喂養(yǎng)聯(lián)合STZ建立2型糖尿病大鼠模型評(píng)價(jià)32-36
• 2、重組腺病毒Ad-adipsin治療ZDF大鼠及評(píng)價(jià)結(jié)果36-39
• 3、重組腺病毒Ad-adipsin治療高脂高糖聯(lián)合STZ誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠及評(píng)價(jià)結(jié)果39-42
• 三、討論42-44
• 小結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 附錄49-56
• 致謝56-57
• 研究生簡(jiǎn)歷57-59

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