本文關(guān)鍵詞：大鼠急性CO中毒后遲發(fā)性腦病模型中海馬區(qū)缺氧誘導因子1α及血紅素加氧酶1的表達

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【摘要】：目的:建立急性CO中毒后遲發(fā)性腦病大鼠模型,通過對其行為學的分析、腦組織海馬區(qū)缺氧誘導因子1α(HIF-1α)及血紅素加氧酶1(HO-1)的表達變化及相關(guān)性分析,初步探討以上兩種蛋白可能的致病機制,為進一步研究DEACMP發(fā)病機制提供實驗基礎(chǔ)和參考。方法:1、大鼠經(jīng)過初篩后,將156只健康雄性SPF級SD大鼠(體重280~320g)按隨機數(shù)表法抽樣并分成三組:急性CO中毒后遲發(fā)性腦病組(CO組)及空氣對照組(AC組)各60只、空白對照組(BC組)36只。再將其隨機分配于染毒后1d、3d、7d、14d、21d、28d共6個時間點的亞組中,CO組及AC組每個亞組10只,BC組每個亞組6只。2、CO組采用改良式多次間隔腹腔注射CO法建立DEACMP動物模型,AC組予以相同的方法注射空氣,BC組不做處理。3、通過Morris水迷宮實驗檢測大鼠染毒前后其記憶、認知功能的變化,同時心臟取血測定HbCO濃度,初步判斷造模是否成功;HE染色檢測大鼠海馬區(qū)細胞的形態(tài)學改變;TUNEL染色檢測大鼠海馬CA1區(qū)的細胞凋亡;普魯士藍染色檢測海馬區(qū)鐵離子的表達;免疫組化法初步檢測海馬區(qū)腦組織HIF-1α及HO-1的表達,蛋白質(zhì)印跡法(Western Blotting)半定量檢測大鼠海馬HO-1的表達。4、實驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行分析。結(jié)果:1、DEACMP動物模型:CO組大鼠中毒數(shù)分鐘后逐漸出現(xiàn)四肢無力,運動遲緩,少動,一過性癱瘓,呼吸深大、急促,口唇黏膜呈現(xiàn)櫻桃紅色,部分大鼠出現(xiàn)肌肉強直,肢體抽搐甚至昏迷、死亡。存活的co組大鼠較另兩組進食減少,易激惹,反應欠靈敏。ac組及bc組大鼠無明顯變化。2、動脈血hbco濃度變化:在整個染毒過程中,大鼠體內(nèi)hbco濃度50%持續(xù)維持超過16h。3、morris水迷宮實驗:三組大鼠在染毒前及染毒后7d的組間及組內(nèi)比較平均逃避潛伏期、穿越平臺所在象限總時間及穿越平臺次數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義,而染毒后14d、21d、28d,co組平均逃避潛伏期延長,穿越平臺所在象限總時間縮短、穿越平臺次數(shù)減少,組內(nèi)比較及與另兩組比較差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p0.05)。4、he染色:co組可見大鼠海馬ca1區(qū)細胞排列不規(guī)則,層次不清,錐體細胞數(shù)量變少,細胞間隙增寬,細胞核逐漸碎裂、固縮,細胞腫脹,甚至發(fā)生變性,壞死等。ac組及bc組海馬ca1區(qū)錐體細胞未見明顯異常。5、普魯士藍染色:鏡下可見在co組中,鐵離子在染毒后1d時表達增加,3d達高峰,之后逐漸降低的趨勢。ac組及bc組未見明顯鐵離子表達。6、tunel染色:co組染毒后海馬區(qū)凋亡細胞數(shù)量呈逐漸增加的趨勢,7d時達峰值,之后逐漸下降,28d時仍高于ac組及bc組,差異具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。ac組及bc組各時間點均未見明顯細胞凋亡。7、hif-1α及ho-1蛋白的表達:(1)免疫組化法:co組hif-1α及ho-1的表達從1d至28d呈現(xiàn)先增高,于3d時達峰值,然后逐漸降低的趨勢,至28d時仍高于ac組及bc組,而ac組及bc組中hif-1α及ho-1的表達無明顯變化。(2)蛋白質(zhì)印跡法(westernblotting):co組大鼠海馬ho-1蛋白表達量于1d時增高,3d時達高峰,之后逐漸降低,至28d時仍高于第1d時水平,而在AC組及BC組大鼠海馬的表達量均較少。結(jié)論:1、改良式多次間隔腹腔注射CO染毒法操作簡便易行,所需儀器常見,CO用量少,且易于掌控,不易浪費及污染,可達到其他(如吸入式)模型所具備的條件,是較接近臨床實際的理想模型。2、Morris水迷宮實驗通過對大鼠染毒前后記憶及認知功能的變化比較,并通過檢測中毒大鼠動脈血HbCO濃度變化,對比中毒大鼠的行為變化等方面可初步判定DEACMP模型是否建立成功。3、急性CO中毒后海馬區(qū)HIF-1α表達增加,促進下游因子HO-1的表達增加,兩者協(xié)同促進海馬區(qū)細胞遲發(fā)性凋亡的發(fā)生可能是DEACMP的發(fā)病機制之一。
【關(guān)鍵詞】：急性CO中毒 遲發(fā)性腦病 遲發(fā)性細胞凋亡 HIF-1α HO-1
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R595.1;R-332
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-26
• 結(jié)果26-51
• 討論51-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻62-71
• 英漢縮略詞對照表71-74
• 致謝74-75
• HO-1 在急性CO中毒后遲發(fā)性腦病發(fā)病機制中的相關(guān)研究進展 綜述75-87
• 參考文獻83-87

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