本文關(guān)鍵詞：大鼠急性CO中毒后遲發(fā)性腦病模型中海馬區(qū)缺氧誘導(dǎo)因子1α及血紅素加氧酶1的表達(dá)

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【摘要】：目的:建立急性CO中毒后遲發(fā)性腦病大鼠模型,通過對(duì)其行為學(xué)的分析、腦組織海馬區(qū)缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)及血紅素加氧酶1(HO-1)的表達(dá)變化及相關(guān)性分析,初步探討以上兩種蛋白可能的致病機(jī)制,為進(jìn)一步研究DEACMP發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和參考。方法:1、大鼠經(jīng)過初篩后,將156只健康雄性SPF級(jí)SD大鼠(體重280~320g)按隨機(jī)數(shù)表法抽樣并分成三組:急性CO中毒后遲發(fā)性腦病組(CO組)及空氣對(duì)照組(AC組)各60只、空白對(duì)照組(BC組)36只。再將其隨機(jī)分配于染毒后1d、3d、7d、14d、21d、28d共6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的亞組中,CO組及AC組每個(gè)亞組10只,BC組每個(gè)亞組6只。2、CO組采用改良式多次間隔腹腔注射CO法建立DEACMP動(dòng)物模型,AC組予以相同的方法注射空氣,BC組不做處理。3、通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測大鼠染毒前后其記憶、認(rèn)知功能的變化,同時(shí)心臟取血測定HbCO濃度,初步判斷造模是否成功;HE染色檢測大鼠海馬區(qū)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;TUNEL染色檢測大鼠海馬CA1區(qū)的細(xì)胞凋亡;普魯士藍(lán)染色檢測海馬區(qū)鐵離子的表達(dá);免疫組化法初步檢測海馬區(qū)腦組織HIF-1α及HO-1的表達(dá),蛋白質(zhì)印跡法(Western Blotting)半定量檢測大鼠海馬HO-1的表達(dá)。4、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。結(jié)果:1、DEACMP動(dòng)物模型:CO組大鼠中毒數(shù)分鐘后逐漸出現(xiàn)四肢無力,運(yùn)動(dòng)遲緩,少動(dòng),一過性癱瘓,呼吸深大、急促,口唇黏膜呈現(xiàn)櫻桃紅色,部分大鼠出現(xiàn)肌肉強(qiáng)直,肢體抽搐甚至昏迷、死亡。存活的co組大鼠較另兩組進(jìn)食減少,易激惹,反應(yīng)欠靈敏。ac組及bc組大鼠無明顯變化。2、動(dòng)脈血hbco濃度變化:在整個(gè)染毒過程中,大鼠體內(nèi)hbco濃度50%持續(xù)維持超過16h。3、morris水迷宮實(shí)驗(yàn):三組大鼠在染毒前及染毒后7d的組間及組內(nèi)比較平均逃避潛伏期、穿越平臺(tái)所在象限總時(shí)間及穿越平臺(tái)次數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而染毒后14d、21d、28d,co組平均逃避潛伏期延長,穿越平臺(tái)所在象限總時(shí)間縮短、穿越平臺(tái)次數(shù)減少,組內(nèi)比較及與另兩組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4、he染色:co組可見大鼠海馬ca1區(qū)細(xì)胞排列不規(guī)則,層次不清,錐體細(xì)胞數(shù)量變少,細(xì)胞間隙增寬,細(xì)胞核逐漸碎裂、固縮,細(xì)胞腫脹,甚至發(fā)生變性,壞死等。ac組及bc組海馬ca1區(qū)錐體細(xì)胞未見明顯異常。5、普魯士藍(lán)染色:鏡下可見在co組中,鐵離子在染毒后1d時(shí)表達(dá)增加,3d達(dá)高峰,之后逐漸降低的趨勢。ac組及bc組未見明顯鐵離子表達(dá)。6、tunel染色:co組染毒后海馬區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)量呈逐漸增加的趨勢,7d時(shí)達(dá)峰值,之后逐漸下降,28d時(shí)仍高于ac組及bc組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。ac組及bc組各時(shí)間點(diǎn)均未見明顯細(xì)胞凋亡。7、hif-1α及ho-1蛋白的表達(dá):(1)免疫組化法:co組hif-1α及ho-1的表達(dá)從1d至28d呈現(xiàn)先增高,于3d時(shí)達(dá)峰值,然后逐漸降低的趨勢,至28d時(shí)仍高于ac組及bc組,而ac組及bc組中hif-1α及ho-1的表達(dá)無明顯變化。(2)蛋白質(zhì)印跡法(westernblotting):co組大鼠海馬ho-1蛋白表達(dá)量于1d時(shí)增高,3d時(shí)達(dá)高峰,之后逐漸降低,至28d時(shí)仍高于第1d時(shí)水平,而在AC組及BC組大鼠海馬的表達(dá)量均較少。結(jié)論:1、改良式多次間隔腹腔注射CO染毒法操作簡便易行,所需儀器常見,CO用量少,且易于掌控,不易浪費(fèi)及污染,可達(dá)到其他(如吸入式)模型所具備的條件,是較接近臨床實(shí)際的理想模型。2、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)通過對(duì)大鼠染毒前后記憶及認(rèn)知功能的變化比較,并通過檢測中毒大鼠動(dòng)脈血HbCO濃度變化,對(duì)比中毒大鼠的行為變化等方面可初步判定DEACMP模型是否建立成功。3、急性CO中毒后海馬區(qū)HIF-1α表達(dá)增加,促進(jìn)下游因子HO-1的表達(dá)增加,兩者協(xié)同促進(jìn)海馬區(qū)細(xì)胞遲發(fā)性凋亡的發(fā)生可能是DEACMP的發(fā)病機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：急性CO中毒 遲發(fā)性腦病 遲發(fā)性細(xì)胞凋亡 HIF-1α HO-1
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R595.1;R-332
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-26
• 結(jié)果26-51
• 討論51-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-71
• 英漢縮略詞對(duì)照表71-74
• 致謝74-75
• HO-1 在急性CO中毒后遲發(fā)性腦病發(fā)病機(jī)制中的相關(guān)研究進(jìn)展 綜述75-87
• 參考文獻(xiàn)83-87

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本文編號(hào)：624357