本文關(guān)鍵詞：SUMO化修飾酶PIASy對高糖誘導(dǎo)的大鼠腎系膜細(xì)胞NF-κB信號(hào)的調(diào)控研究

  更多相關(guān)文章： 糖尿病腎病 炎癥 SUMO化修飾酶PIASy 核因子-κB

【摘要】：目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病一種嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥,其發(fā)病機(jī)制不清,糖代謝和腎臟血流動(dòng)力學(xué)異常所致的病理生理改變是糖尿病腎病發(fā)生的基礎(chǔ)。在糖尿病腎病早期腎組織中可見單核巨噬細(xì)胞浸潤,核因子-κB(neclear factor-κB,NF-κB)等大量炎癥因子產(chǎn)生增加,提示炎癥反應(yīng)是DN發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。而NF-κB作為炎癥調(diào)節(jié)的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子又受多種蛋白質(zhì)翻譯后修飾調(diào)節(jié),如磷酸化、泛素化、小泛素化修飾物(small ubiquitin-related modifier protein,SUMO)修飾。SUMO化修飾是通過蛋白-蛋白相互作用而賦予靶蛋白新的生物特性。它通過加強(qiáng)蛋白質(zhì)穩(wěn)定、DNA修復(fù)、核質(zhì)運(yùn)輸、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控,從而調(diào)控靶蛋白。蛋白質(zhì)的SUMO化修飾通過E1活化酶、E2結(jié)合酶、E3連接酶作用完成對靶細(xì)胞的修飾。其中E3連接酶是底物識(shí)別的關(guān)鍵酶,而PIAS家族是一類E3連接酶,它可加強(qiáng)底物的SUMO化修飾或是作為構(gòu)架蛋白來調(diào)控關(guān)鍵信號(hào)分子的轉(zhuǎn)錄活性。有研究發(fā)現(xiàn)PIASy可誘導(dǎo)IκB激酶γ(IκB kinase,IKKγ)發(fā)生SUMO化,從而激活NF-κB信號(hào)通路。但目前在糖尿病腎病中,SUMO化修飾酶PIASy是否參加NF-κB信號(hào)調(diào)控研究尚少。因此本實(shí)驗(yàn)通過觀察不同時(shí)間和濃度的高糖刺激大鼠腎系膜細(xì)胞后,觀察SUMO化修飾酶PIASy、NF-κB信號(hào)激活關(guān)鍵信號(hào)分子(IκBα、p-IκBα、p-NF-κBp65、IKKγ)和下游炎癥因子白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的表達(dá),再通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染PIASy-si RNA干擾PIASy后再次觀察NF-κB信號(hào)關(guān)鍵因子的改變,同時(shí)觀察PIASy和IKKγ的細(xì)胞定位,旨在探討SUMO化修飾酶PIASy對高糖介導(dǎo)的大鼠腎系膜細(xì)胞的NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控作用和可能機(jī)制,為糖尿病腎病的防治提供新的特異性靶點(diǎn)。方法:(1)細(xì)胞的培養(yǎng)與分組:體外培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞,以高糖作為刺激因子,分為以下三組:(1)正常對照組(NC組):培養(yǎng)基含5.6 mmol/L葡萄糖;(2)高糖干預(yù)組(HG組):按照培養(yǎng)基葡萄糖濃度梯度分3個(gè)組,HG1組:培養(yǎng)基含10 mmol/L葡萄糖;HG2組:培養(yǎng)基含20mmol/L葡萄糖;HG3組:培養(yǎng)基含30 mmol/L葡萄糖;(3)滲透壓對照組(OP組):培養(yǎng)基含5.6 mmol/L葡萄糖+24.4mmol/L甘露醇。(2)各組細(xì)胞培養(yǎng)6h、12h、24h、48h、72h后,用Western-blot檢測PIASy、IκBα、p-IκBα、p-NF-κB的蛋白表達(dá),ELISA檢測培養(yǎng)上清液IL-6、MCP-1濃度。(3)PIASy的RNA干擾研究:篩選出最佳高糖作用濃度和時(shí)間后,細(xì)胞轉(zhuǎn)染PIASy-si RNA,再次進(jìn)行分組::(1)si NC組:細(xì)胞轉(zhuǎn)染control-si RNA加入含5.6mmol/L葡萄糖培養(yǎng)基培養(yǎng);(2)si PIASy組:細(xì)胞轉(zhuǎn)染PIASy-si RNA加入含5.6 mmol/L葡萄糖培養(yǎng)基培養(yǎng);(3)HG+si NC:細(xì)胞轉(zhuǎn)染control-si RNA加入含30 mmol/L葡萄糖培養(yǎng)基作用24h;(4)HG+si PIASy組:細(xì)胞轉(zhuǎn)染PIASy-si RNA加入含30 mmol/L葡萄糖培養(yǎng)基作用24h。(4)采用免疫熒光染色檢測PIASy和IKKγ在細(xì)胞中的表達(dá)及定位。(5)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以x±s表示,多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析,組間多重比較用LSD-t法。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.與NC相比,高糖可以刺激PIASy蛋白和m RNA表達(dá)(P0.05),且呈一定時(shí)間濃度依賴性。2.與NC相比,高糖可以降低IκBα、增加p-IκBα和p-NF-κB蛋白表達(dá)(P0.05),且具有一定時(shí)間濃度依賴性。3.不同時(shí)間和濃度的高糖刺激未改變IKKγ的m RNA和蛋白表達(dá)(P0.05),高糖誘導(dǎo)PIASy和IKKγ在細(xì)胞同一位置的黃色熒光表達(dá)增強(qiáng)。4.高糖可增加系膜細(xì)胞上清液IL-6、MCP-1的水平,并呈時(shí)間濃度依賴性增強(qiáng)(P0.05)。5.細(xì)胞轉(zhuǎn)染PIASy-si RNA后成功抑制PIASy表達(dá)(P0.05)。與si NC組相比,si PIASy組顯示IκBα表達(dá)顯著增強(qiáng)、p-IκBα和p-NF-κB則顯著減弱(P均0.05)。6.細(xì)胞轉(zhuǎn)染PIASy-si RNA后,與si NC組比較顯示IL-6、MCP-1濃度顯著下調(diào)。結(jié)論:1.高糖可使腎系膜細(xì)胞PIASy表達(dá)上調(diào)。2.高糖可抑制IκBα、激活NF-κB,上調(diào)下游炎癥因子的表達(dá)。3.高糖通過系膜細(xì)胞PIASy誘導(dǎo)NF-κB的活化并且促進(jìn)下游炎癥因子的表達(dá),PIASy上調(diào)可能是糖尿病腎病NF-κB炎癥信號(hào)激活的重要機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 炎癥 SUMO化修飾酶PIASy 核因子-κB
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-32
• 結(jié)果32-55
• 討論55-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 英漢縮略詞表70-71
• 致謝71-72
• SUMO化修飾酶對NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控 綜述72-82
• 參考文獻(xiàn)79-82

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐勇,黃頌敏,付平,張杰,張海燕,劉小菁;蛋白激酶C亞型在高糖誘導(dǎo)腎系膜細(xì)胞中的表達(dá)[J];中華腎臟病雜志;2002年03期

2 徐玲;蔣嵐;馬紅艷;徐勇;楊軍;;高糖對大鼠腎系膜細(xì)胞Iκ B-α表達(dá)影響的泛素化研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2010年24期

3 苗春生;于曉艷;李才;石艷;;糖基化終末產(chǎn)物對大鼠腎系膜細(xì)胞胰島素樣生長因子-1表達(dá)的影響[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年01期

4 顧峻菱;徐勇;馬紅艷;鐘海花;史小玲;徐玲;楊軍;;泛素蛋白酶體途徑對高糖刺激腎系膜細(xì)胞連接蛋白43表達(dá)和纖維連接蛋白分泌影響的初步觀察[J];中國糖尿病雜志;2010年04期

5 黃頌敏,徐勇,付平,張海燕,劉小青;血管緊張素Ⅱ及氯沙坦對腎系膜細(xì)胞蛋白激酶C亞型表達(dá)及轉(zhuǎn)位的影響[J];中華內(nèi)科雜志;2003年01期

6 周桂華,李才,苗春生;糖基化終產(chǎn)物對大鼠腎系膜細(xì)胞結(jié)締組織生長因子作用的研究[J];中國病理生理雜志;2005年02期

7 李妍;趙久陽;;緩激肽對高糖誘導(dǎo)腎系膜細(xì)胞JNK通路活化的影響[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2013年07期

8 趙志濤,于曉艷,李才,苗春生,崔倫文;糖基化終末產(chǎn)物對大鼠腎系膜細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2活性和表達(dá)的影響[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年06期

9 李錦;白雪源;崔少遠(yuǎn);傅博;陳香美;;雷帕霉素對高糖誘導(dǎo)的腎系膜細(xì)胞自噬抑制、氧化損傷和衰老的影響[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年04期

10 王玉,李曉玫,王海燕;白介素-1β通過JNK/p38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控腎系膜細(xì)胞表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白[J];生理學(xué)報(bào);2002年03期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 萬沁;鐘�；�;徐勇;何建華;馬紅燕;;泛素蛋白酶體途徑對高糖刺激的腎系膜細(xì)胞[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會(huì)暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

2 王小剛;吳慧娟;陳琦;趙仲華;張志剛;郭慕依;;轉(zhuǎn)染結(jié)締組織生長因子基因的大鼠腎系膜細(xì)胞纖連蛋白和Ⅳ型膠原表達(dá)的改變[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

3 王宇暉;;黃芪金櫻子合劑改善氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的大鼠腎系膜細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[A];浙江省腎臟病骨干醫(yī)師學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2005年

4 南慶玲;徐勇;;高糖作用的腎系膜細(xì)胞SnoN/Ski蛋白表達(dá)及泛素化研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

5 文秀英;余杰;許明旺;劉浩;熊亮;;SIK1在糖尿病大鼠腎組織和高糖培養(yǎng)的腎系膜細(xì)胞表達(dá)的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

6 馮志美;任萌;何爽;楊川;丁鶴林;嚴(yán)勵(lì);;mIR-155對高糖培養(yǎng)大鼠腎系膜細(xì)胞血管緊張素Ⅱ受體1和細(xì)胞基質(zhì)蛋白表達(dá)作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

7 高陳林;徐勇;;高糖對腎系膜細(xì)胞組蛋白H2A泛素化的影響及作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 林伊鳳;馬端;蔣濤;郭泓s，

本文編號(hào)：614136