本文關(guān)鍵詞：大鼠ASIC1基因啟動子熒光素酶報告質(zhì)粒的構(gòu)建及其功能鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建大鼠酸敏感離子通道1(ASIC1)基因啟動子熒光素酶報告質(zhì)粒pGL3-ASIC1-promoter,并進行功能的鑒定。方法設(shè)計、合成ASIC1啟動子引物,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)從大鼠全基因組DNA中擴增出ASIC1啟動子片段;NheⅠ和XhoⅠ雙酶切后將目的片段連接到pGL3-Basic報告載體上;構(gòu)建的pGL3-ASIC1-promoter重組質(zhì)粒和pRLTK內(nèi)參質(zhì)粒瞬時共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞檢測ASIC1啟動子活性。結(jié)果 PCR擴增得到大鼠ASIC1基因啟動子片段;成功構(gòu)建pGL3-ASIC1-promoter報告基因載體,菌落PCR和測序結(jié)果表明啟動子DNA序列正確。與空質(zhì)粒pGL3-Basic轉(zhuǎn)染組相比,pGL3-ASIC1-promoter質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的熒光素酶活性明顯增加(P0.01)。結(jié)論成功構(gòu)建了大鼠ASIC1基因啟動子報告基因載體,為探究ASIC1轉(zhuǎn)錄表達的調(diào)控機制奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： ASlC 啟動子 熒光素酶 報告基因
【基金】：國家自然科學(xué)基金(編號:81271949)
【分類號】：R593.22
【正文快照】： 酸敏感離子通道(acid sensing ion channels, ASICs)是一類胞外H+激活的陽離子通道,屬于阿米洛利敏感的上皮鈉通道/退變素(epithelial Na+channels/degenerin,ENaC/DEG)超家族,廣泛地表達在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)以及非神經(jīng)組織中,通過介導(dǎo)Na+和Ca2+內(nèi)流參與各種病理生理效應(yīng)⑴

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