本文關(guān)鍵詞：缺氧誘導(dǎo)因子1α-腎損傷分子1通路對(duì)高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)的影響

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【摘要】：背景與目的糖尿病腎病(diabetic nephrophy, DN)是糖尿病(diabetic mellitus, DM)發(fā)病率較高的微血管并發(fā)癥之一,同時(shí)也是導(dǎo)致終末期腎臟病(end stage renal disease, ESRD)的主要原因,而進(jìn)行性腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibrosis,RIF)則是DN進(jìn)展的重要病理基礎(chǔ)。但其RIF的發(fā)生機(jī)制至今尚未完全闡明。因此,尋找更有效的預(yù)防糖尿病腎病的發(fā)生以及延緩其腎功能進(jìn)展的措施已成為醫(yī)學(xué)界亟待解決的問(wèn)題。國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究表明,缺氧誘導(dǎo)因子la(hypoxia inducible factor, HIF1α)可與腎損傷分子1 (kidney injury molecule 1, KIM1)啟動(dòng)子區(qū)缺氧反應(yīng)原件結(jié)合并激活KIM1的表達(dá)。HIF1α、KIM1均與糖尿病腎病等慢性腎臟疾病腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生密切相關(guān)。但DN中有關(guān)HIF1α-KIM1信號(hào)通路的相關(guān)研究甚少。本研究采用體外高糖培養(yǎng)人近端腎小管上皮細(xì)胞(human proximal tubular cell, HK2),觀察HIF1α、KIM1及細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)指標(biāo)基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP9)、金屬蛋白酶1組織抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)、纖連蛋白(fibronectin, FN)以及I型膠原蛋白(collgagen I,COL-I)的表達(dá)情況,并應(yīng)用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)分別下調(diào)HIF1α、KIMl的表達(dá)后,觀察細(xì)胞MMP9、TIMP1、FN及COL-I的變化,旨在探討HIF1α-KIM1信號(hào)通路在糖尿病腎病RIF中的作用。方法體外培養(yǎng)HK2并進(jìn)行如下分組：HK2于含10%FBS的低糖(D-葡萄糖5.6mmol/L)DMEM培養(yǎng)基,37℃、5%CO2貼壁培養(yǎng)。0.25%胰酶消化,1：3傳代,待其生長(zhǎng)至70%～80%融合時(shí),使用無(wú)血清培養(yǎng)基同步12h后隨機(jī)分為以下6組：(1)正常對(duì)照組；(2)甘露醇組；(3)高糖組；(4)轉(zhuǎn)染對(duì)照組；(5)HIF1α siRNA組;(6)KIM1 siRNA組。(其中正常對(duì)照組培養(yǎng)條件為D-葡萄糖5.6mmol/L,甘露醇組培養(yǎng)條件為D-葡萄糖5.6 mmol/L+D-甘露醇24.4 nunol/L,高糖組培養(yǎng)條件為D-葡萄糖30 mmol/L)。分別于12h、24h、36 h各時(shí)間點(diǎn)收獲細(xì)胞。分別于不同培養(yǎng)時(shí)間條件下進(jìn)行測(cè)定。應(yīng)用Western印跡法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(qRT-PCR)和細(xì)胞免疫熒光方法檢測(cè)細(xì)胞HIF1α、KIM1、MMP9、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表達(dá)。結(jié)果與正常對(duì)照組相比,高糖組細(xì)胞HIF1α、KIM1、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表達(dá)呈時(shí)間依賴性增加(P0.05)；MMP9蛋白及mRNA表達(dá)呈時(shí)間依賴性減少(P0.05)；與高糖組相比,HIF1α siRNA組細(xì)胞HIF1α、KIM1、 TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表達(dá)明顯減少(P0.05),MMP9蛋白及mRNA表達(dá)明顯增多(P0.05)；與高糖組相比,KIM1 siRNA組細(xì)胞KIM1、TIMP1、FN及COL-I蛋白及mRNA表達(dá)明顯減少(P0.05),MMP9蛋白及mRNA表達(dá)明顯增多(P0.05),而HIF1α表達(dá)水平無(wú)明顯變化(P0.05)。結(jié)論高糖環(huán)境下HIF1α可能通過(guò)調(diào)控腎小管上皮細(xì)胞KIM1的表達(dá)參與糖尿病腎病腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)程。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 腎小管上皮細(xì)胞 細(xì)胞外基質(zhì) 氧誘導(dǎo)因子1α 腎損傷分子1
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692.9;R587.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮略詞索引9-10
• 第一章 引言10-13
• 第二章 材料和方法13-29
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-37
• 第四章 討論37-40
• 第五章 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-47
• 綜述-糖尿病腎病相關(guān)分子和信號(hào)通路的研究進(jìn)展47-65
• 參考文獻(xiàn)56-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文65-66
• 致謝66

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