本文關鍵詞：缺氧誘導因子1α-腎損傷分子1通路對高糖誘導腎小管上皮細胞細胞外基質的影響

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【摘要】：背景與目的糖尿病腎病(diabetic nephrophy, DN)是糖尿病(diabetic mellitus, DM)發(fā)病率較高的微血管并發(fā)癥之一,同時也是導致終末期腎臟病(end stage renal disease, ESRD)的主要原因,而進行性腎間質纖維化(renal interstitial fibrosis,RIF)則是DN進展的重要病理基礎。但其RIF的發(fā)生機制至今尚未完全闡明。因此,尋找更有效的預防糖尿病腎病的發(fā)生以及延緩其腎功能進展的措施已成為醫(yī)學界亟待解決的問題。國內(nèi)外相關研究表明,缺氧誘導因子la(hypoxia inducible factor, HIF1α)可與腎損傷分子1 (kidney injury molecule 1, KIM1)啟動子區(qū)缺氧反應原件結合并激活KIM1的表達。HIF1α、KIM1均與糖尿病腎病等慢性腎臟疾病腎間質纖維化的發(fā)生密切相關。但DN中有關HIF1α-KIM1信號通路的相關研究甚少。本研究采用體外高糖培養(yǎng)人近端腎小管上皮細胞(human proximal tubular cell, HK2),觀察HIF1α、KIM1及細胞外基質相關指標基質金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP9)、金屬蛋白酶1組織抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)、纖連蛋白(fibronectin, FN)以及I型膠原蛋白(collgagen I,COL-I)的表達情況,并應用siRNA轉染技術分別下調HIF1α、KIMl的表達后,觀察細胞MMP9、TIMP1、FN及COL-I的變化,旨在探討HIF1α-KIM1信號通路在糖尿病腎病RIF中的作用。方法體外培養(yǎng)HK2并進行如下分組：HK2于含10%FBS的低糖(D-葡萄糖5.6mmol/L)DMEM培養(yǎng)基,37℃、5%CO2貼壁培養(yǎng)。0.25%胰酶消化,1：3傳代,待其生長至70%～80%融合時,使用無血清培養(yǎng)基同步12h后隨機分為以下6組：(1)正常對照組；(2)甘露醇組；(3)高糖組；(4)轉染對照組；(5)HIF1α siRNA組;(6)KIM1 siRNA組。(其中正常對照組培養(yǎng)條件為D-葡萄糖5.6mmol/L,甘露醇組培養(yǎng)條件為D-葡萄糖5.6 mmol/L+D-甘露醇24.4 nunol/L,高糖組培養(yǎng)條件為D-葡萄糖30 mmol/L)。分別于12h、24h、36 h各時間點收獲細胞。分別于不同培養(yǎng)時間條件下進行測定。應用Western印跡法、實時熒光定量PCR法(qRT-PCR)和細胞免疫熒光方法檢測細胞HIF1α、KIM1、MMP9、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表達。結果與正常對照組相比,高糖組細胞HIF1α、KIM1、TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表達呈時間依賴性增加(P0.05)；MMP9蛋白及mRNA表達呈時間依賴性減少(P0.05)；與高糖組相比,HIF1α siRNA組細胞HIF1α、KIM1、 TIMP1、FN及COL-I的蛋白及mRNA表達明顯減少(P0.05),MMP9蛋白及mRNA表達明顯增多(P0.05)；與高糖組相比,KIM1 siRNA組細胞KIM1、TIMP1、FN及COL-I蛋白及mRNA表達明顯減少(P0.05),MMP9蛋白及mRNA表達明顯增多(P0.05),而HIF1α表達水平無明顯變化(P0.05)。結論高糖環(huán)境下HIF1α可能通過調控腎小管上皮細胞KIM1的表達參與糖尿病腎病腎間質纖維化的進程。
【關鍵詞】：糖尿病腎病 腎小管上皮細胞 細胞外基質 氧誘導因子1α 腎損傷分子1
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R692.9;R587.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮略詞索引9-10
• 第一章 引言10-13
• 第二章 材料和方法13-29
• 第三章 實驗結果29-37
• 第四章 討論37-40
• 第五章 結論40-41
• 參考文獻41-47
• 綜述-糖尿病腎病相關分子和信號通路的研究進展47-65
• 參考文獻56-65
• 個人簡歷及在校期間發(fā)表的學術論文65-66
• 致謝66

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