本文關(guān)鍵詞：UPR信號(hào)通路參與低氧調(diào)控脂聯(lián)素基因表達(dá)的初步研究

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【摘要】：脂聯(lián)素是脂肪細(xì)胞特異性分泌的脂肪因子,能夠調(diào)控脂質(zhì)和葡萄糖代謝,具有促胰島素敏感性、抗炎癥和抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用,與肥胖、Ⅱ型糖尿病緊密相關(guān)。已有研究表明,肥胖者體內(nèi)脂肪細(xì)胞局部區(qū)域?yàn)榈脱醐h(huán)境,且其脂肪細(xì)胞和血清中的脂聯(lián)素水平較正常人偏低,并且缺氧是許多疾病的病理發(fā)展過(guò)程中一個(gè)重要特點(diǎn)。同時(shí),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作為機(jī)體較常見(jiàn)的應(yīng)激反應(yīng),也與多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)。因此,本研究利用3T3-L1細(xì)胞系,針對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激即未折疊蛋白反應(yīng)UPR的三條通路進(jìn)行了研究,初步探索了低氧、UPR及脂聯(lián)素的表達(dá)三者間的關(guān)系。首先培養(yǎng)并誘導(dǎo)分化3T3-L1細(xì)胞,之后采用低氧對(duì)該分化的脂肪細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)間的處理,利用q RT-PCR和western blot技術(shù)檢測(cè)脂聯(lián)素和UPR三條通路相關(guān)基因的表達(dá)量,研究了低氧對(duì)脂聯(lián)素表達(dá)的影響以及低氧對(duì)UPR三條具體通路的影響。之后采用抑制劑阻斷相關(guān)信號(hào)通路,分別從基因和蛋白水平進(jìn)行相關(guān)分子的表達(dá)量分析,通過(guò)通路基因的表達(dá)顯著下調(diào)來(lái)確定目標(biāo)通路被有效阻斷,在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步通過(guò)檢測(cè)脂聯(lián)素表達(dá)的變化,推斷UPR三條信號(hào)通路分別在低氧調(diào)控脂聯(lián)素表達(dá)中的作用。結(jié)果表明,低氧能夠抑制脂聯(lián)素基因的表達(dá),同時(shí)能夠激活PERK和IRE1信號(hào)通路,但未能激活A(yù)T F6通路。當(dāng)PERK和IRE1這兩條通路被相應(yīng)抑制劑有效阻斷后,低氧對(duì)于脂聯(lián)素表達(dá)的抑制作用明顯減弱,初步確定PERK和IRE1信號(hào)通路參與了低氧抑制脂聯(lián)素基因表達(dá)的過(guò)程。此研究結(jié)果為肥胖及糖尿病等疾病的研究及治療提供了新思路。
【關(guān)鍵詞】：低氧 脂聯(lián)素 PERK IRE1 ATF6
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R58
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第1章 緒論8-18
• 1.1 脂聯(lián)素的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展8-11
• 1.1.1 脂聯(lián)素的結(jié)構(gòu)與功能8-10
• 1.1.2 脂聯(lián)素與代謝性疾病10-11
• 1.2 低氧與ER stress的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展11-15
• 1.2.1 低氧與脂聯(lián)素11-13
• 1.2.2 ER stress與脂聯(lián)素13-15
• 1.3 研究意義和研究?jī)?nèi)容15-18
• 1.3.1 研究意義15-16
• 1.3.2 研究?jī)?nèi)容16
• 1.3.3 技術(shù)路線16-18
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法18-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料18
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑18
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-28
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)19-20
• 2.2.2 細(xì)胞分化20-21
• 2.2.3 低氧處理21
• 2.2.4 RNA提取21-22
• 2.2.5 逆轉(zhuǎn)錄22-23
• 2.2.6 實(shí)時(shí)定量PCR23-25
• 2.2.7 蛋白印記分析25-27
• 2.2.8 統(tǒng)計(jì)分析27-28
• 第3章 低氧對(duì)脂聯(lián)素和UPR通路的影響28-41
• 3.1 引言28
• 3.2 3T3-L1細(xì)胞的分化28-30
• 3.3 低氧對(duì)脂聯(lián)素表達(dá)的影響30-31
• 3.4 低氧對(duì)UPR通路的影響31-39
• 3.4.1 低氧對(duì)PERK通路的影響32-34
• 3.4.2 低氧對(duì)IRE1通路的影響34-38
• 3.4.3 低氧對(duì)AT F6通路的影響38-39
• 3.5 討論39-40
• 3.6 本章小結(jié)40-41
• 第4章 PERK通路對(duì)低氧抑制脂聯(lián)素表達(dá)的影響41-48
• 4.1 引言41
• 4.2 PERK通路的抑制41-44
• 4.3 PERK通路抑制后低氧對(duì)脂聯(lián)素的影響44-46
• 4.4 討論46-47
• 4.5 本章小結(jié)47-48
• 第5章 IRE1通路對(duì)低氧抑制脂聯(lián)素表達(dá)的影響48-54
• 5.1 引言48
• 5.2 IRE1通路的抑制48-51
• 5.3 IRE1通路抑制后低氧對(duì)脂聯(lián)素的影響51-52
• 5.4 討論52-53
• 5.5 本章小結(jié)53-54
• 結(jié)論54-55
• 展望55-56
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及其它成果63-65
• 致謝65

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本文編號(hào)：553782