本文關鍵詞：UPR信號通路參與低氧調控脂聯(lián)素基因表達的初步研究

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【摘要】：脂聯(lián)素是脂肪細胞特異性分泌的脂肪因子,能夠調控脂質和葡萄糖代謝,具有促胰島素敏感性、抗炎癥和抗動脈粥樣硬化的作用,與肥胖、Ⅱ型糖尿病緊密相關。已有研究表明,肥胖者體內(nèi)脂肪細胞局部區(qū)域為低氧環(huán)境,且其脂肪細胞和血清中的脂聯(lián)素水平較正常人偏低,并且缺氧是許多疾病的病理發(fā)展過程中一個重要特點。同時,內(nèi)質網(wǎng)應激作為機體較常見的應激反應,也與多種疾病的發(fā)生密切相關。因此,本研究利用3T3-L1細胞系,針對內(nèi)質網(wǎng)應激即未折疊蛋白反應UPR的三條通路進行了研究,初步探索了低氧、UPR及脂聯(lián)素的表達三者間的關系。首先培養(yǎng)并誘導分化3T3-L1細胞,之后采用低氧對該分化的脂肪細胞進行不同時間的處理,利用q RT-PCR和western blot技術檢測脂聯(lián)素和UPR三條通路相關基因的表達量,研究了低氧對脂聯(lián)素表達的影響以及低氧對UPR三條具體通路的影響。之后采用抑制劑阻斷相關信號通路,分別從基因和蛋白水平進行相關分子的表達量分析,通過通路基因的表達顯著下調來確定目標通路被有效阻斷,在此基礎上,進一步通過檢測脂聯(lián)素表達的變化,推斷UPR三條信號通路分別在低氧調控脂聯(lián)素表達中的作用。結果表明,低氧能夠抑制脂聯(lián)素基因的表達,同時能夠激活PERK和IRE1信號通路,但未能激活AT F6通路。當PERK和IRE1這兩條通路被相應抑制劑有效阻斷后,低氧對于脂聯(lián)素表達的抑制作用明顯減弱,初步確定PERK和IRE1信號通路參與了低氧抑制脂聯(lián)素基因表達的過程。此研究結果為肥胖及糖尿病等疾病的研究及治療提供了新思路。
【關鍵詞】：低氧 脂聯(lián)素 PERK IRE1 ATF6
【學位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R58
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第1章 緒論8-18
• 1.1 脂聯(lián)素的國內(nèi)外研究進展8-11
• 1.1.1 脂聯(lián)素的結構與功能8-10
• 1.1.2 脂聯(lián)素與代謝性疾病10-11
• 1.2 低氧與ER stress的國內(nèi)外研究進展11-15
• 1.2.1 低氧與脂聯(lián)素11-13
• 1.2.2 ER stress與脂聯(lián)素13-15
• 1.3 研究意義和研究內(nèi)容15-18
• 1.3.1 研究意義15-16
• 1.3.2 研究內(nèi)容16
• 1.3.3 技術路線16-18
• 第2章 實驗材料與方法18-28
• 2.1 實驗材料18-19
• 2.1.1 實驗材料18
• 2.1.2 實驗試劑18
• 2.1.3 實驗儀器18-19
• 2.2 實驗方法19-28
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)19-20
• 2.2.2 細胞分化20-21
• 2.2.3 低氧處理21
• 2.2.4 RNA提取21-22
• 2.2.5 逆轉錄22-23
• 2.2.6 實時定量PCR23-25
• 2.2.7 蛋白印記分析25-27
• 2.2.8 統(tǒng)計分析27-28
• 第3章 低氧對脂聯(lián)素和UPR通路的影響28-41
• 3.1 引言28
• 3.2 3T3-L1細胞的分化28-30
• 3.3 低氧對脂聯(lián)素表達的影響30-31
• 3.4 低氧對UPR通路的影響31-39
• 3.4.1 低氧對PERK通路的影響32-34
• 3.4.2 低氧對IRE1通路的影響34-38
• 3.4.3 低氧對AT F6通路的影響38-39
• 3.5 討論39-40
• 3.6 本章小結40-41
• 第4章 PERK通路對低氧抑制脂聯(lián)素表達的影響41-48
• 4.1 引言41
• 4.2 PERK通路的抑制41-44
• 4.3 PERK通路抑制后低氧對脂聯(lián)素的影響44-46
• 4.4 討論46-47
• 4.5 本章小結47-48
• 第5章 IRE1通路對低氧抑制脂聯(lián)素表達的影響48-54
• 5.1 引言48
• 5.2 IRE1通路的抑制48-51
• 5.3 IRE1通路抑制后低氧對脂聯(lián)素的影響51-52
• 5.4 討論52-53
• 5.5 本章小結53-54
• 結論54-55
• 展望55-56
• 參考文獻56-63
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文及其它成果63-65
• 致謝65

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本文編號：553782