發(fā)布時間：2017-06-25 00:17

  本文關(guān)鍵詞：骨質(zhì)疏松患者與正常人差異血清游離miRNAs研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的：miRNA(microRNA)是一種內(nèi)源性的單鏈非編碼小RNA,通過與靶mRNA的3’UTR結(jié)合,降低其穩(wěn)定性,抑制基因翻譯水平。miRNA是重要的轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控因子,在細(xì)胞的分化、增殖、凋亡和代謝等生理過程中發(fā)揮廣泛的調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn),循環(huán)血液中存在穩(wěn)定的游離miRNA,且在正常人群中表達(dá)一致,當(dāng)機(jī)體處于疾病狀態(tài)時,血清中miRNA會發(fā)生特異性改變。miRNA在骨代謝中亦發(fā)揮重要調(diào)控作用,且日益成為研究的熱點。骨質(zhì)疏松癥是以骨生成減少、骨吸收增加,骨骼脆性增加及易發(fā)生脆性骨折為特征的全身性疾病,且隨年齡的增大,其發(fā)病率逐漸增加。本課題研究目的為,比較骨質(zhì)疏松癥患者和正常對照組血清中差異表達(dá)的niRNAs,利用生物信息學(xué)分析其作用靶基因,篩選骨代謝相關(guān)目標(biāo)miRNAs,以探求骨質(zhì)疏松癥發(fā)病機(jī)制相關(guān)miRNA及相關(guān)靶基因和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)通路,研究結(jié)果為探明骨質(zhì)疏松癥相關(guān)miRNAs及基因調(diào)控調(diào)節(jié)機(jī)制,及今后骨質(zhì)疏松癥的基因治療提供理論指導(dǎo)和實驗依據(jù)。方法：1、收集3例骨質(zhì)疏松癥組患者及3例年齡、性別匹配的正常對照組的血液標(biāo)本,經(jīng)離心提取患者血清。然后提取血清中總RNA,經(jīng)質(zhì)控合格后,利用miRNA微陣列芯片技術(shù),篩選骨質(zhì)疏松組和正常對照組的差異表達(dá)miRNA,篩選差異表達(dá)的miRNA的標(biāo)準(zhǔn)為：上調(diào)及下調(diào)均miRNA Foldchange值=2,P值=0.05。 2.查詢miRbase數(shù)據(jù)庫進(jìn)行差異的miRNA序列分析；查詢niRbase以及Targetscan數(shù)據(jù)庫進(jìn)行靶基因預(yù)測；通過http://Diana.cslab.ece.ntua.gr/pathways/預(yù)測差異miRNA與細(xì)胞間信號傳導(dǎo)通路的關(guān)系；在Pumbmed以及NCBI數(shù)據(jù)庫查詢靶基因位點注釋信息。依據(jù)差異niRNA靶基因及信號通路結(jié)果,結(jié)合目前已有研究成果,選取可能的骨代謝相關(guān)目標(biāo)miRNA. 結(jié)果：1.標(biāo)本經(jīng)質(zhì)控確認(rèn)合格后,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)篩選差異表達(dá)的miRNA。結(jié)果顯示：骨質(zhì)疏松組與正常對照組相比,差異表達(dá)的miRNA上調(diào)有5個,下調(diào)的有2個。2.通過對每個niRNA靶基因的預(yù)測以及相關(guān)細(xì)胞間信號傳導(dǎo)通路的查詢,結(jié)合已有研究資料,篩選出骨質(zhì)疏松可能的目標(biāo)miRNA2個,均為上調(diào),分別為：hsa-miR-1321以及hsa-miR-103a-3p。3.涉及的與骨質(zhì)疏松相關(guān)的靶基因有：NOTCH3、DTX1、WNT16、BTRC、AXIN2、以及WNT3A,其相關(guān)細(xì)胞間信號傳導(dǎo)通路為Notch通路以及Wnt通路。結(jié)論：1.本課題通過對骨質(zhì)疏松患者和正常對照組進(jìn)行血清差異表達(dá)miRNA的對比研究,初步發(fā)現(xiàn)了骨質(zhì)疏松患者較正常人的血清niRNA的表達(dá)存在差異,且部分差異表達(dá)的miRNA與骨代謝相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制相關(guān)。 2.利用生物信息學(xué)技術(shù)對差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行分析,結(jié)合現(xiàn)有研究成果,篩選出了骨質(zhì)疏松癥可能相關(guān)miRNA及其靶基因,為骨質(zhì)疏松的病理機(jī)制、早期診斷及miRNA治療提供了參考依據(jù)。miRNA在骨質(zhì)疏松癥中的具體調(diào)控機(jī)制,尚需后續(xù)研究中進(jìn)一步探討。
【關(guān)鍵詞】：骨質(zhì)疏松癥 miRNA 芯片檢測 疾病標(biāo)志物 病理機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R580
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 1 對象和方法15-22
• 1.1 研究對象15
• 1.2 主要試劑儀器及軟件15-16
• 1.3 實驗步驟16-21
• 1.4 靶基因預(yù)測及目標(biāo)miRNA篩選21-22
• 2 結(jié)果22-29
• 2.1 RNA質(zhì)量控制22
• 2.2 樣本間及組間一致性檢驗22-25
• 2.3 miRNA芯片實驗結(jié)果25-27
• 2.4 靶基因預(yù)測及目標(biāo)miRNA篩選27-29
• 3 討論29-42
• 3.1 成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞生理29-30
• 3.2 骨質(zhì)疏松癥30-33
• 3.3 miRNA33-35
• 3.4 骨代謝相關(guān)miRNA調(diào)控35-37
• 3.5 骨代謝相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路37-39
• 3.6 骨質(zhì)疏松相關(guān)miRNA39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-51
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明51-52
• 附錄52-54
• 綜述54-76
• 綜述參考文獻(xiàn)68-76
• 致謝76

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張楠楠;郝艷華;;大慶地區(qū)1096例漢族人群骨密度調(diào)查及骨質(zhì)疏松發(fā)生率分析[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2013年10期

2 曾德昕;何成奇;;微小RNAs在骨與軟骨組織中的調(diào)節(jié)作用[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2011年06期

3 ;Bioinformatic analysis of microRNA biogenesis and function related proteins in eleven animal genomes[J];遺傳學(xué)報;2009年10期

  本文關(guān)鍵詞：骨質(zhì)疏松患者與正常人差異血清游離miRNAs研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：480102