本文關(guān)鍵詞：STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠尿酸代謝特點(diǎn)及其機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景 糖尿病(Diabetes mellitus, DM)是最常見的內(nèi)分泌代謝疾病，而糖尿病腎病(DN)是DM最常見的微血管并發(fā)癥之一，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生存率。研究發(fā)現(xiàn)，不管是1型糖尿�。═1DM）還是2型糖尿�。═2DM），高尿酸血癥(HUA)均與DN的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。降低血尿酸(SUA)水平可有效延緩DN以及慢性腎臟病(CKD)的進(jìn)展。 前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)利用非布索坦(Febuxostat, FX)降低SUA水平，研究鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病(Diabetes mellitus, DM)大鼠尿酸與腎病的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該DM動(dòng)物模型有明顯的HUA，而降低SUA明顯改善了DM大鼠的腎損害；HUA主要與尿酸生成增多有關(guān)。我們之前的臨床研究亦有類似發(fā)現(xiàn)。因此，研究DM中尿酸代謝的特點(diǎn)及其可能的機(jī)制對(duì)探討DN新的治療靶點(diǎn)非常必要。 尿酸是人體嘌呤代謝的終產(chǎn)物，磷酸核糖焦磷酸合成酶1（PRPPS1）、磷酸核糖焦磷酸酰胺轉(zhuǎn)移酶（PRPPAT）、黃嘌呤氧化酶（XO）是嘌呤核苷酸從頭合成代謝和分解代謝的關(guān)鍵酶，因而也是尿酸合成代謝的關(guān)鍵酶。檢測(cè)肝臟上述酶系mRNA表達(dá)及酶含量、活性水平對(duì)研究尿酸合成代謝非常重要。 尿酸在腎臟的重吸收和排泄需多個(gè)尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體協(xié)助完成，其中尿酸陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1（URAT1）和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體9（GLUT9）對(duì)重吸收作用最大。URAT1特異地在腎臟近曲小管上皮細(xì)胞的管腔膜側(cè)表達(dá)，介導(dǎo)尿酸鹽從腎小管腔轉(zhuǎn)運(yùn)到上皮細(xì)胞內(nèi)。GLUT9有兩個(gè)亞型，分別表達(dá)在腎近端小管上皮細(xì)胞的基底膜側(cè)和管腔膜側(cè)，主要負(fù)責(zé)將尿酸從腎小管上皮細(xì)胞通過基底膜運(yùn)輸至細(xì)胞間質(zhì)，與URAT1作用協(xié)同，一起完成腎臟尿酸鹽的重吸收。對(duì)于STZ誘導(dǎo)的DM大鼠，探討主要尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體URAT1、GLUT9的改變也是了解其HUA狀態(tài)的重要環(huán)節(jié)。 基于上述認(rèn)識(shí)，本研究利用STZ誘導(dǎo)的DM大鼠，對(duì)其肝臟尿酸合成關(guān)鍵酶系及腎臟主要尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體進(jìn)行研究，以期明確該大鼠模型HUA的確切機(jī)制。 第一部分前期研究概述——非布索坦降低血尿酸對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎損害進(jìn)展的影響 目的觀察STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠尿酸代謝特點(diǎn)，降低SUA水平對(duì)DM腎損害的防治意義。 方法利用STZ誘導(dǎo)雄性SD大鼠成DM模型，共24只；對(duì)照組(Normal Control, NC)大鼠20只。DM大鼠和NC大鼠分別隨機(jī)分組進(jìn)入非布索坦干預(yù)組和非干預(yù)組(DM+Fx組和DM組；NC+Fx組和NC組)。干預(yù)前、干預(yù)4周后、干預(yù)8周后分別檢測(cè)空腹血糖(FBG)、血尿酸(SUA)、血尿素氮（BUN）、血肌酐(sCr)水平，并留取24h尿，檢測(cè)24h尿白蛋白(24h UAE)、24h尿尿素氮（24h UUN）、24h尿肌酐（24h UCR）、24h尿尿酸(24h UUA)水平。干預(yù)8周后處死動(dòng)物，取肝組織及一側(cè)腎臟保存于-80度冰箱，取另一側(cè)腎臟行石蠟固定常溫保存。 結(jié)果與NC組大鼠比較，DM組大鼠FBG、BUN、sCr、SUA明顯升高(P0.05)；伴隨24h UUA、24h UAE、24h UUN、24h UCR明顯升高(P0.05)。Febuxostat干預(yù)治療8周后，DM+Fx組大鼠SUA、sCr、BUN及24hUAE較干預(yù)前下降，且顯著低于DM組大鼠(P0.05)。 結(jié)論STZ誘導(dǎo)的DM大鼠SUA顯著升高，伴腎功能損害； Febuxostat顯著降低SUA水平及改善其腎臟濾過功能；HUA的形成可能以尿酸合成增加為主 第二部分STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠肝臟尿酸合成關(guān)鍵酶系研究 目的檢測(cè)STZ誘導(dǎo)的DM大鼠肝臟PRPPS1、PRPPAT、XO mRNA表達(dá)、酶含量及酶活性水平。 方法準(zhǔn)確稱取0.20～0.25g大鼠肝組織，加入9倍生理鹽水，用高速分散器進(jìn)行勻漿，2500r/min離心10min，，吸取上清用于檢測(cè)；使用ELISA法、考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定大鼠肝組織PRPPS-1、XO含量及XO活力。將儲(chǔ)存于-80℃內(nèi)的大鼠肝組織取出，使用Trizol溶液提取肝組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR），檢測(cè)肝組織PRPPS1、PRPPAT、XO mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果同NC大鼠比較，DM大鼠肝臟PRPPS1酶含量(pg/ml)明顯升高(23103.33±556.53vs10458.40±448.90, P=0.000)；XO含量(ng/ml)明顯升高(125.59±3.04vs59.94±3.23, P=0.000)；XO活力(U/gpro)明顯升高(24.42±2.95vs18.60±2.16, P0.05)；XOmRNA表達(dá)亦明顯升高(P0.05)。Febuxostat干預(yù)治療后，DM+Fx組肝臟PRPPS1、XO含量及XO活性較DM組無明顯變化（P0.05)。而PRPPS1、PRPPAT mRNA表達(dá)在各組的表達(dá)均無明顯差異(P0.05)；Febuxostat干預(yù)治療對(duì)PRPPS1、PRPPAT、XO mRNA表達(dá)無明顯影響(P0.05)。 結(jié)論STZ誘導(dǎo)的DM大鼠肝臟尿酸合成代謝關(guān)鍵酶系含量及表達(dá)增加，XO活性增高。 第三部分STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠URAT1、GLUT9表達(dá)的研究 目的檢測(cè)STZ誘導(dǎo)的DM大鼠腎URAT1、GLUT9mRNA表達(dá)和組織表達(dá)水平。 方法取腎組織石蠟包塊切片，利用免疫組化技術(shù)使URAT1、GLUT9在腎組織顯色，采用高清晰彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)，測(cè)定DM大鼠和NC大鼠URAT1、GLUT9平均光密度值進(jìn)行對(duì)比。將儲(chǔ)存于-80℃內(nèi)的大鼠腎組織取出，使用Trizol溶液提取腎組織總RNA，使用RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)腎組織URAT1、GLUT9mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果DM大鼠和NC大鼠腎組織URAT1、GLUT9平均光密度值比較無差異(URAT1:0.3140±0.0532vs0.3171±0.0643, P=0.744; GLUT9:0.2645±0.0498vs0.2612±0.0550,P=0.856)。DM大鼠和NC大鼠腎URAT1和GLUT9mRNA表達(dá)無差異(URAT1:0.3171±0.0643vs-0.76±0.93, P0.05; GLUT9:2.78±0.84VS1.98±1.62, P0.05)。Fx治療對(duì)于兩種大鼠URAT1、GLUT9腎臟組織表達(dá)和基因表達(dá)均無明顯影響(P0.05)。 結(jié)論STZ誘導(dǎo)的DM大鼠腎組織URAT1、GLUT9組織表達(dá)和基因表達(dá)較NC大鼠無差異；Fx對(duì)于組織含量和基因表達(dá)均無影響。 總結(jié)STZ誘導(dǎo)的DM大鼠HUA的形成傾向于由尿酸生成增多而非排出減少引起。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 尿酸 PRPPS1 PRPPAT XO URAT1 GLUT9
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R587.2
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-10
• 目錄10-11
• 第一部分 前期研究概述11-18
• 前言11-13
• 材料與方法13-15
• 結(jié)果15-16
• 討論16-17
• 結(jié)論17-18
• 第二部分 STZ 誘導(dǎo)的糖尿病大鼠肝臟尿酸合成關(guān)鍵酶系研究18-31
• 前言18-21
• 材料與方法21-28
• 結(jié)果28-29
• 討論29-30
• 結(jié)論30-31
• 第三部分 STZ 誘導(dǎo)的糖尿病大鼠 URAT1、GLUT9 表達(dá)的研究31-38
• 前言31-33
• 材料與方法33-36
• 結(jié)果36-37
• 討論37
• 結(jié)論37-38
• 研究不足38
• 展望38-39
• 附圖39-44
• 參考文獻(xiàn)44-52
• 中英文縮略詞對(duì)照表52-54
• 已發(fā)表文章54-55
• 致謝55

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：463138