本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-126對INS-1細(xì)胞功能的調(diào)控作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一種常見的內(nèi)分泌代謝性疾病。其基本病理特點(diǎn)為胰島素分泌絕對或相對不足,或外周組織對胰島素不敏感,以糖代謝紊亂為主,包括脂肪、蛋白質(zhì)代謝紊亂的一種全身性疾病。糖尿病的患病率在全球逐年增長。據(jù)世界衛(wèi)生組織WHO估計(jì),至2030年,全球糖尿病患病人數(shù)將達(dá)3億。據(jù)估計(jì),中國現(xiàn)有成人糖尿病患者9240萬,已成為世界糖尿病人數(shù)最多的國家。在糖尿病患者中90%以上是Ⅱ型糖尿病,嚴(yán)重影響人們的健康。糖尿病發(fā)病機(jī)理較為復(fù)雜,而胰島素抵抗在Ⅱ型糖尿病的發(fā)生過程中扮演重要角色,但胰島素抵抗的機(jī)制尚不明確。胰島素是一種蛋白質(zhì)類激素,由體內(nèi)胰島β細(xì)胞分泌,體內(nèi)唯一降血糖激素。胰島素信號通路涉及多個(gè)環(huán)節(jié),其中鈣離子濃度的變化對胰島素的分泌有重要影響。有文獻(xiàn)報(bào)道,在胰島素信號通路中存在著micro RNA(mi RNA,mi R)-126的作用靶點(diǎn),且本實(shí)驗(yàn)室前期工作證實(shí)胰島素受體底物1(IRS-1)也是其作用靶點(diǎn)。但是mi R-126是否影響胰島β細(xì)胞合成和釋放胰島素尚不明確。本課題利用胰島瘤B細(xì)胞(INS-1)模型,研究mi R-126對INS-1細(xì)胞電壓敏感鈣通道電流、鈣離子濃度及胰島素分泌量的影響。實(shí)驗(yàn)方法1.鋪種INS-1細(xì)胞,24h后轉(zhuǎn)染40n M的不同mi RNA,轉(zhuǎn)染時(shí)間為48h,人工合成胰島素100n M刺激細(xì)胞12h。熒光定量PCR檢測INS-1細(xì)胞中mi R-126基因的表達(dá)水平。2.激光共聚焦技術(shù)檢測INS-1細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化,分組:①陰性對照組(NC)組,轉(zhuǎn)染nonsense strand;②mi R-126過表達(dá)(mi R-126m)組,轉(zhuǎn)染mi R-126 mimic;③mi R-126低表達(dá)(mi R-126i)組,轉(zhuǎn)染mi R-126 inhibitor;④陽性對照(mi R-375m)組,轉(zhuǎn)染mi R-375 mimic。3.穿孔膜片鉗技術(shù)檢測INS-1細(xì)胞膜上電壓敏感鈣通道電流,分組:陰性對照(NC)組和mi R-126m組。4.Elisa實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀,分別檢測INS-1細(xì)胞胰島素分泌量及線粒體膜電位變化,分組:陰性對照(NC)組,mi R-126m組,mi R-126i組,陽性對照(mi R-375m)組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.熒光定量PCR結(jié)果顯示:與NC組基因mi R-126(107.26±37.88,n=4)的表達(dá)量相比,mi R-126m組(398.77±53.72,n=4)的基因表達(dá)量顯著升高(P0.01);而mi R-126i組(20.26±7.827,n=4)的基因表達(dá)量較NC組的明顯下降(P0.05)。2.激光共聚焦技術(shù)檢測INS-1細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,結(jié)果顯示:基礎(chǔ)葡萄糖(5.6m M葡萄糖)刺激細(xì)胞,mi R-126m組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度較NC組明顯升高(P0.05),mi R-126i組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度較NC組顯著降低(P0.05);高濃度葡萄糖(16.8m M葡萄糖)刺激細(xì)胞,mi R-126m組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度和NC組無顯著差異(P0.05);mi R-126i組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度較NC組顯著降低(P0.05)。穿孔膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞膜電壓敏感鈣通道電流,結(jié)果顯示:與NC組相比,mi R-126m組細(xì)胞鈣離子內(nèi)流增加(P0.05)。3.Elisa實(shí)驗(yàn)檢測胰島素分泌量,結(jié)果顯示:基礎(chǔ)胰島素分泌量mi R-126m組較NC組分泌量增加(P0.05);mi R-126i組胰島素分泌量較NC組顯著降低(P0.05);高濃度葡萄糖刺激細(xì)胞,其胰島素分泌量:mi R-126m組胰島素分泌量和NC組無顯著差異(P0.05);mi R-126i組胰島素分泌量較NC組顯著降低(P0.05)。流式細(xì)胞儀檢測線粒體膜電位,結(jié)果顯示:與NC組相比,mi R-126m組和mi R-375m組細(xì)胞凋亡增加(P0.05),mi R-126i組細(xì)胞凋亡降低(P0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)論1.過表達(dá)mi R-126可以增加INS-1細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,并且使鈣離子內(nèi)流增加;2.過表達(dá)mi R-126增加INS-1細(xì)胞基礎(chǔ)胰島素分泌量,但能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：Ⅱ型糖尿病 microRNA-126 鈣離子 胰島素 INS-1細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文縮寫說明9-11
• 前言11-15
• 第一部分15-25
• 前言15
• 材料方法15-22
• 結(jié)果22-24
• 討論24-25
• 第二部分25-37
• 前言25-26
• 材料方法26-30
• 結(jié)果30-35
• 討論35-37
• 第三部分37-45
• 前言37-38
• 材料方法38-41
• 結(jié)果41-43
• 討論43-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 綜述48-55
• 綜述參考文獻(xiàn)51-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文56-57
• 個(gè)人簡歷57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黃令一,李秀鈞,田浩明;糖尿病并發(fā)腦梗塞死因探討及防治對策[J];中國糖尿病雜志;1997年02期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 姬海玉;高表達(dá)MicroRNA-126誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞凋亡的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-126對INS-1細(xì)胞功能的調(diào)控作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：441226