目的:研究多聚左旋精氨酸(Poly-L-arginine,PLA)誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞NCI-H292細(xì)胞凋亡的通路機(jī)制以及對(duì)細(xì)胞內(nèi)Bcl-2/Bax、Caspase-3表達(dá)的影響,從而揭示PLA參與哮喘氣道上皮損傷的部分機(jī)制。方法:1、細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)培養(yǎng)基(RPMI1640+10%胎牛血清)培養(yǎng)NCI-H292細(xì)胞,于37℃、5%二氧化碳環(huán)境的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育。每2³天換液一次,細(xì)胞分裂鋪展至培養(yǎng)瓶70%⁸0%時(shí)用0.25%胰酶消化傳代,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2、透射電鏡制片觀察NCI-H292細(xì)胞凋亡NCI-H292細(xì)胞分為對(duì)照組、PLA(60 mg/L)組兩組,PLA作用24 h后,收集細(xì)胞,固定后脫水,包埋干燥,切片浸染后用透射電鏡攝片觀察兩組細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。3、Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率按加入PLA濃度不同將細(xì)胞分為空白對(duì)照組、10 mg/L PLA組、20 mg/L組PLA、40 mg/L PLA組、60 mg/L PLA組,按是否加入ERK1/2信號(hào)通路抑制劑PD98059分為空白對(duì)照組、PD組、PLA組、PLA+P...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
1 前言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)器材
    2.4 實(shí)驗(yàn)試劑配制
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.2 細(xì)胞分組
    3.3 透射電鏡制片觀察NCI-H292細(xì)胞凋亡
    3.4 Annexin V-FITC/PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率
    3.5 Western Blot 法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白 Bax、Bcl-2、Caspase-3 及信號(hào)通路 ERK1/2的表達(dá)
    3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
5 討論
6 結(jié)論
7 參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3976662