發(fā)布時(shí)間：2024-03-09 05:16

　　理想上來(lái)說(shuō),自身免疫性疾病的治療應(yīng)該消除致病性的自身免疫細(xì)胞而不影響機(jī)體正常的保護(hù)性免疫功能。但是,可行性的策略一直很難被發(fā)現(xiàn)。這里,我們提出在自身抗體介導(dǎo)的自身免疫性疾病中,BCR識(shí)別自身抗原,其可變區(qū)發(fā)生重排產(chǎn)生只針對(duì)自身抗原的特異性序列,此序列只在致病性B細(xì)胞上表達(dá),而在其它正常的B細(xì)胞表面不表達(dá)。因此,根據(jù)此B細(xì)胞受體(BCR)的特異性,構(gòu)建自身抗原為基礎(chǔ)的嵌合體免疫受體的NK92MI細(xì)胞,殺傷過(guò)度反應(yīng)的表達(dá)特異性BCR的B細(xì)胞。我們重新編輯了NK92MI細(xì)胞,使其表達(dá)一個(gè)嵌合體自體抗體受體修飾的結(jié)構(gòu)(CAAR),此結(jié)構(gòu)包括自身免疫性疾病自身抗原La/SSB及CD28-CD137-CD3ζ信號(hào)結(jié)構(gòu)域。我們發(fā)現(xiàn)La/SSB嵌合體自體抗體修飾的NK92MI(La/SSB-CAAR NK92MI)細(xì)胞能夠特異性有效的殺傷特異性表達(dá)抗La/SSB B細(xì)胞受體(La/SSB-BCR)的B細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞(LaA-BCR Romas,LaA-BCRMaver-1)及T細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞(LaA-BCR-Jurkat)。此外,La/SSB嵌合體自體抗體受體修飾的NK92MI細(xì)胞(La/SSB-CA...

【文章頁(yè)數(shù)】：124 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1A：cDNA中PCR獲得LaA片段，經(jīng)過(guò)SDS-PAGE瓊脂糖電泳，在凝膠成像儀下觀察條帶大小，由圖可示，在250-500bp可見目的條帶，大小正確

46NA中PCR獲得LaA片段，經(jīng)過(guò)SDS-PAGE瓊脂糖電泳，在帶大小，由圖可示，在250-500bp可見目的條帶，大小正確體雙酶切后，條帶大小正確。C：LaA片段連接的pET28a（

圖2：菌液PCR鑒定結(jié)果

SB嵌合體自體抗體受體修飾的NK92MI細(xì)胞靶向性治療自身免疫性疾病三、結(jié)果達(dá)載體示意圖。D：pET28a（+）載體示意圖的具體序列，本實(shí)驗(yàn)選取的酶切為NheI和XhoI，由圖可示，我們保留了一個(gè)His標(biāo)簽，便于進(jìn)一步LaA原達(dá)蛋白的誘導(dǎo)及純化。將帶有Nh....

圖3：A：LaA-pET28a（+）原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入BL-21菌株后，經(jīng)過(guò)IPTG誘導(dǎo)4.5h后，SDS-PAGE跑膠，考馬斯亮藍(lán)染色觀察LaA蛋白條帶的大小，LaA蛋白分子量大約為16KD，16KD左右沒(méi)有目的條帶

LaA-pET28a（+）原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入BL-21菌株后，DS-PAGE跑膠，考馬斯亮藍(lán)染色觀察LaA蛋白條帶的為16KD，16KD左右沒(méi)有目的條帶。Lane1：對(duì)照組對(duì)照組BL-21菌液上清液；Lane3：LaA-LaA-pET28ae4：LaA-LaA-....

圖4：LaA與Non-LaA蛋白經(jīng)過(guò)鎳柱親和純化后，經(jīng)過(guò)SDS-PAGE跑膠，考馬斯亮藍(lán)染色后，觀察純化效果及目的條帶的大小

獲取上清進(jìn)行鎳柱親和純化，獲得高純度的LaA與Non-LaA蛋白，見圖4。圖4：LaA與Non-LaA蛋白經(jīng)過(guò)鎳柱親和純化后，經(jīng)過(guò)SDS-PAGE跑膠，考馬斯亮藍(lán)染色后，觀察純化效果及目的條帶的大小。Lane1為純化前的LaA蛋白；Lane2為純化前的....

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