發(fā)布時(shí)間：2017-05-24 14:03

  本文關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細(xì)胞來源微囊泡對卵巢顆粒細(xì)胞的作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分間充質(zhì)干細(xì)胞來源微囊泡的分離純化目的建立一個(gè)高效的間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell, MSC)來源微囊泡(microvesicles, MVs)分離純化方法。方法取P8以前的人臍血干細(xì)胞進(jìn)行無血清培養(yǎng),分別于24h、48h、72h收集上清液,制備條件培養(yǎng)基,采用超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度離心的方法分離純化MVs,透射電鏡觀察MVS的形態(tài),Bradford法蛋白定量。結(jié)果電鏡下MVs呈圓形或橢圓形,直徑介于30-1000nm之間,中間為低電子密度區(qū)；隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長MVs的釋放量顯著增加,8×105個(gè)細(xì)胞大約釋放10μg左右的微囊泡。結(jié)論超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度離心的方法能夠獲得較高純度的MVs；適當(dāng)延長無血清培養(yǎng)的時(shí)間能夠顯著增加MVs的獲取量。第二部分MVs的內(nèi)化作用及對卵巢顆粒細(xì)胞增殖、分泌功能的影響目的建立一個(gè)卵巢顆粒細(xì)胞(granulosa cells, GCs)分離純化方法,探討顆粒細(xì)胞對MSCs來源MVs的內(nèi)化作用及MVs對卵巢顆粒細(xì)胞功能的影響。方法采用機(jī)械分離法分離3周齡雌性SD大鼠卵巢顆粒細(xì)胞,FSHR免疫組化法鑒定顆粒細(xì)胞純度；PKH26標(biāo)記的MVs與顆粒細(xì)胞共培養(yǎng),3h后熒光顯微鏡觀察顆粒細(xì)胞對MVs的內(nèi)化作用；將濃度為0、10、15、20、25μg/ml的MVs與與顆粒細(xì)胞共培養(yǎng),48h后化學(xué)發(fā)光法檢測上清液中E2的水平,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期各時(shí)相的變化。結(jié)果 免疫組織化學(xué)染色證實(shí)分離的顆粒細(xì)胞純度達(dá)到95%以上；顆粒細(xì)胞與MVs共培養(yǎng)3h后,免疫熒光觀察可見顆粒細(xì)胞中MVs；不同濃度的MVs均可增加顆粒細(xì)胞的增殖指數(shù)(PI)、S期細(xì)胞比例(SPF)及E2水平,且呈先上升后下降趨勢；MVs濃度為15μg/ml時(shí),PI、SPF及E2濃度最高,顯著高于0、10、20和25μg/ml組(P0.05)。結(jié)論機(jī)械分離的方法能夠分離出純度較高的顆粒細(xì)胞;MVs能夠被顆粒細(xì)胞所攝�。婚g充質(zhì)干細(xì)胞來源的MVs能夠促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖及分泌E2功能,且MVS濃度為15μg/ml時(shí)為最佳作用濃度。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 微囊泡 顆粒細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R711.75
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 引言10-12
• 第一部分 人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞來源微囊泡的分離純化12-21
• 1 引言12
• 2 材料與方法12-17
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法17
• 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-19
• 5 討論19-20
• 6 結(jié)論20-21
• 第二部分 MVs的內(nèi)化作用及對卵巢顆粒細(xì)胞增殖、分泌功能的影響21-36
• 1 引言21-22
• 2 實(shí)驗(yàn)材料22-25
• 3 實(shí)驗(yàn)方法25-27
• 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法27-28
• 5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-33
• 6 討論33-36
• 7 結(jié)論36
• 參考文獻(xiàn)36-41
• 附錄41-42
• 致謝42-43
• 綜述43-52
• 參考文獻(xiàn)49-52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉慧萍;尤昭玲;雷磊;伍娟娟;張國民;朱偉;劉春燕;;補(bǔ)腎活血方對免疫性卵巢早衰小鼠卵泡凋亡調(diào)控基因(Bcl-2/Bax)蛋白的影響[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2010年05期

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本文編號：390989