發(fā)布時間：2023-12-02 08:22

　　第一部分MPST基因過表達載體的構(gòu)建及鑒定目的:構(gòu)建MPST基因慢病毒表達載體,獲得穩(wěn)定表達外源MPST基因的SH-SY5Y細胞株。方法:采用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)擴增出MPST目的基因并將其克隆到慢病毒表達載體p EB-GFP(T2A)PURO上。將重組慢病毒表達載體和慢病毒包裝質(zhì)粒系統(tǒng)(p LP/VSVG、p LP1、p LP2)共轉(zhuǎn)染293T細胞,用獲得重組慢病毒液感染SH-SY5Y細胞,嘌呤霉素篩選穩(wěn)定表達MPST基因的過表達細胞株(SH-MPST)。用Real-time PCR和Western blot以及ELISA等方法對篩出來的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞中MPST蛋白表達及功能進行鑒定。結(jié)果:與空轉(zhuǎn)組相(SH-PEB)比,穩(wěn)轉(zhuǎn)組細胞MPST m RNA及蛋白的表達水平顯著增加(p<0.01),且細胞MPST酶活性、含量及硫化氫的相對水平顯著增加(p<0.01)。結(jié)論:成功構(gòu)建MPST基因慢病毒表達載體并獲得穩(wěn)定表達外源MPST基因的SH-SY5Y細胞株,為內(nèi)源性H2S功能的深入研究奠定基礎(chǔ)。第二部分MPST對砷損傷SH-SY5Y細胞的保護目的:探討MPST基因過表達對SH-S...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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略縮詞表
引言
第一部分 MPST基因過表達SH-SY5Y細胞株的構(gòu)建及鑒定
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第二部分 MPST對砷損傷SH-SY5Y細胞的保護
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第三部分 ERS參與MPST對GRP78/CHOP通路的影響
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡歷
致謝
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號：3869278