第一部分MPST基因過表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定目的:構(gòu)建MPST基因慢病毒表達(dá)載體,獲得穩(wěn)定表達(dá)外源MPST基因的SH-SY5Y細(xì)胞株。方法:采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增出MPST目的基因并將其克隆到慢病毒表達(dá)載體p EB-GFP(T2A)PURO上。將重組慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝質(zhì)粒系統(tǒng)(p LP/VSVG、p LP1、p LP2)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,用獲得重組慢病毒液感染SH-SY5Y細(xì)胞,嘌呤霉素篩選穩(wěn)定表達(dá)MPST基因的過表達(dá)細(xì)胞株(SH-MPST)。用Real-time PCR和Western blot以及ELISA等方法對篩出來的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞中MPST蛋白表達(dá)及功能進(jìn)行鑒定。結(jié)果:與空轉(zhuǎn)組相(SH-PEB)比,穩(wěn)轉(zhuǎn)組細(xì)胞MPST m RNA及蛋白的表達(dá)水平顯著增加(p<0.01),且細(xì)胞MPST酶活性、含量及硫化氫的相對水平顯著增加(p<0.01)。結(jié)論:成功構(gòu)建MPST基因慢病毒表達(dá)載體并獲得穩(wěn)定表達(dá)外源MPST基因的SH-SY5Y細(xì)胞株,為內(nèi)源性H2S功能的深入研究奠定基礎(chǔ)。第二部分MPST對砷損傷SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)目的:探討MPST基因過表達(dá)對SH-S...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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略縮詞表
引言
第一部分 MPST基因過表達(dá)SH-SY5Y細(xì)胞株的構(gòu)建及鑒定
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第二部分 MPST對砷損傷SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第三部分 ERS參與MPST對GRP78/CHOP通路的影響
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡歷
致謝
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號：3869278