目的篩選及鑒定肥胖大鼠海馬區(qū)的差異蛋白表達。方法將24只SD大鼠隨機分為單純肥胖組(Ob,n=14)及正常對照組(NC,n=10)。予高脂高糖飲食制備單純肥胖大鼠模型,采用相對和絕對定量同位素標記技術(iTRAQ)聯合二維液相色譜-串聯質譜(2D-LC-MS/MS)法鑒定肥胖大鼠海馬區(qū)差異蛋白表達,對所獲蛋白行生物信息學分析,Western blot法對篩選的部分差異蛋白進行驗證。結果成功建立單純肥胖大鼠模型,共鑒定出310種差異蛋白表達。于KEGG數據庫檢索篩選出26個差異蛋白顯著富集的代謝通路。選取位于蛋白功能相互作用網絡交叉點的4種差異蛋白行Western blot驗證,發(fā)現蛋白表達水平與質譜結果一致。結論采用iTRAQ結合2D-LC-MS/MS技術,能有效篩選肥胖大鼠海馬區(qū)差異蛋白表達,為研究肥胖對中樞神經系統(tǒng)損傷機制提供依據。

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【文章目錄】：
材料與方法
    一、實驗材料
    二、實驗方法
        1. 分組及模型建立：
        2. 樣品制備：
        3. 蛋白提取及定量：
        4. iTRAQ試劑標記及檢測：
        5. SCX分離：
        6. 基于Triple TOF 5600的LC-MS/MS分析：
        7. 生物信息學分析：
        8. Western blot驗證篩選的蛋白表達水平：
    三、統(tǒng)計學處理
結果
    一、蛋白鑒定及篩選的差異蛋白
    二、pathway代謝通路注釋
    三、蛋白相互作用網絡分析
    四、各組差異蛋白的Western blot驗證
討論



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