目的:研究IL-22對(duì)于糖尿病伴牙周炎的牙周膜細(xì)胞成骨能力影響,并初步探究其機(jī)制方法:提取原代牙周膜細(xì)胞(Periodontal Ligament Cells,PDLC),加入牛血清蛋白(Bull Serum Albumin,BSA100μg/mL)、晚期糖基化終產(chǎn)物(Advanced Glycation End Products,AGEs 100μg/mL)、牙齦卟啉單胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,PgLPS 1.25μg/mL)以及不同濃度IL-22(20ng/mL,40ng/mL)連續(xù)培養(yǎng)7天;MTT比色法檢測(cè)PDLC增殖情況;Hoechst 33342、Caspase3活力檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;ELISA法檢測(cè)PDLC細(xì)胞培養(yǎng)基中IL-6和TNF-α的分泌量;利用堿性磷酸酶進(jìn)行染色和定量分析,測(cè)定抗酒石酸酸性酶活力和茜素紅染色檢測(cè)PDLC成骨能力;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)相關(guān)基因表達(dá);免疫印跡法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.AGEs和PgLPS處理后P38、pP38、Bax、PI3K、pAkt、Akt、R...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 前言
    1.牙周炎
        1.1 牙周病
        1.2 牙周炎流行病學(xué)調(diào)查
        1.3 牙周病臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)
        1.4 牙周炎臨床表征
        1.5 牙周炎的主要致病因素——口腔微生物
        1.6 牙周炎對(duì)于牙支持組織的影響
        1.7 牙周炎與全身疾病
        1.8 牙周炎治療
    2.糖尿病對(duì)于牙周炎的影響
        2.1 糖尿病
        2.2 流行病學(xué)調(diào)查
        2.3 糖尿病加劇牙周炎程度的因素
            2.3.1 晚期糖基化終產(chǎn)物
            2.3.2 氧化應(yīng)激
            2.3.3 炎癥反應(yīng)
        2.4 糖尿病對(duì)于牙周炎中牙槽骨吸收的影響
    3.IL-22 概述
        3.1 IL-22 基因
        3.2 IL-22 受體
        3.3 IL-22BP
        3.4 IL-22 來源
        3.5 IL-22 功能
    4.研究?jī)?nèi)容
    5.研究目的及意義
第二章 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 抗體
        2.1.4 引物
        2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)用試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 牙周膜細(xì)胞原代培養(yǎng)
        2.2.2 牙周膜細(xì)胞的鑒定
        2.2.3 繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
        2.2.4 牙周膜細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.2.5 牙周膜細(xì)胞的換液
        2.2.6 牙周膜細(xì)胞的傳代
        2.2.7 牙周膜細(xì)胞的凍存
        2.2.8 細(xì)胞增殖與毒性實(shí)驗(yàn)(MTT法)
        2.2.9 IL-6 ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
        2.2.10 TNF-αELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
        2.2.11 細(xì)胞凋亡Hoechst33342 染色
        2.2.12 牙周膜細(xì)胞蛋白提取
        2.2.13 牙周膜細(xì)胞蛋白BCA定量
        2.2.14 抗酒石酸酸性磷酸酶檢測(cè)(StrACP)
        2.2.15 堿性磷酸酶定量檢測(cè)
        2.2.16 堿性磷酸酶染色
        2.2.17 Caspase3 活性檢測(cè)
        2.2.18 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)基因mRNA水平
        2.2.19 免疫印跡法檢測(cè)IL-22 對(duì)于AGEs和 Pg LPS處理的牙周膜細(xì)胞增殖、凋亡等相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        2.2.20 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析
    3.結(jié)果
        3.1 牙周膜細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)
        3.2 牙周膜細(xì)胞原代鑒定
        3.3 牙周膜細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
        3.4 Pg LPS對(duì)于牙周膜細(xì)胞增殖、凋亡和炎性因子釋放情況的影響
            3.4.1 Pg LPS對(duì)于牙周膜細(xì)胞增殖情況的影響
            3.4.2 Pg LPS對(duì)于牙周膜細(xì)胞凋亡情況的影響
            3.4.3 Pg LPS對(duì)于牙周膜細(xì)胞炎性因子釋放情況的影響
        3.5 AGEs對(duì)于牙周膜細(xì)胞增殖、凋亡和炎性因子釋放的影響
            3.5.1 AGEs對(duì)于牙周膜細(xì)胞增殖的影響
            3.5.2 AGEs對(duì)于牙周膜細(xì)胞凋亡情況的影響
            3.5.3 AGEs對(duì)于牙周膜細(xì)胞炎性因子釋放情況的影響
        3.6 IL-22 對(duì)于牙周膜細(xì)胞增殖和凋亡情況的影響
            3.6.1 IL-22 對(duì)于牙周膜細(xì)胞增殖的影響
            3.6.2 IL-22 對(duì)于牙周膜細(xì)胞凋亡狀況的影響
        3.7 不同濃度IL-22對(duì)PDLC成骨能力的檢測(cè)
            3.7.1 堿性磷酸酶顯色檢測(cè)
            3.7.2 堿性磷酸酶定量檢測(cè)
            3.7.3 抗酒石酸酸性酶活性檢測(cè)(StrACP)
            3.7.4 茜素紅染色
        3.8 不同濃度IL-22對(duì)PDLC Caspase3 活力的影響
        3.9 不同濃度IL-22對(duì)PDLC炎性因子釋放的影響
        3.10 不同濃度IL-22 刺激的PDLC的IL-22 受體和成骨等相關(guān)基因的表達(dá)
        3.11 不同濃度IL-22 通過激活牙周膜細(xì)胞內(nèi)調(diào)控成骨、增殖和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3851732