系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus, SLE)是一種常見的典型自身免疫性疾病,以B細(xì)胞的過(guò)度活化、T細(xì)胞的異常激活為主要特征。B細(xì)胞異�；罨凸δ墚惓�(duì)于SLE的發(fā)病極為關(guān)鍵,但關(guān)于SLE B細(xì)胞異常病變的分子機(jī)制仍不清楚。近年來(lái)研究表明,TLR7在SLE發(fā)病進(jìn)程中具有重要作用。我們實(shí)驗(yàn)室在尋找其發(fā)病機(jī)制過(guò)程中發(fā)現(xiàn)：外部因素如TLR7配體、IFN-α和BCR配體刺激參與SLE中的B細(xì)胞的異常病變。Cyclin D3 (CCND3)是細(xì)胞周期蛋白D家族的三個(gè)成員之一,最早發(fā)現(xiàn)它能夠調(diào)控細(xì)胞G1到S期的轉(zhuǎn)換,而最近研究表明,其在B細(xì)胞的增殖、發(fā)育以及分化過(guò)程中起到至關(guān)重要的作用。但是TLR7是否能夠影響CCND3的表達(dá),進(jìn)而影響B(tài)細(xì)胞的功能,還未見報(bào)道�；谝陨涎芯�,我們推測(cè)TLR7能夠影響B(tài)細(xì)胞CCND3的表達(dá)來(lái)調(diào)控B細(xì)胞的相關(guān)功能。本研究首先比較了活動(dòng)期SLE與正常人B細(xì)胞中表達(dá)基因的差異；其次對(duì)基因芯片結(jié)果進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)CCND3在活動(dòng)期SLE的B細(xì)胞中異常表達(dá)；研究還發(fā)現(xiàn)激活TLR7通路能夠上調(diào)B細(xì)胞的CCND3表達(dá),且下調(diào)miR-...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
第一章 TLR7受體及其信號(hào)通路在SLE中的研究進(jìn)展
    1.1 SLE的研究概況
    1.2 SLE與B細(xì)胞
    1.3 TLR7與SLE
    1.4 TLR7與B細(xì)胞
    1.5 TLR7的阻斷劑對(duì)小鼠SLE模型的治療
第二章 SLE活動(dòng)期患者B細(xì)胞芯片差異表達(dá)基因的分析
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        2.2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 人外周血B細(xì)胞的分離純化
        2.3.2 總RNA的提取和純化
        2.3.3 cDNA的合成和純化(用來(lái)進(jìn)行芯片雜交)
        2.3.4 芯片雜交
        2.3.5 差異基因的生物信息學(xué)分析
        2.3.6 cDNA的合成
        2.3.7 小鼠脾臟B細(xì)胞的分離純化
        2.3.8 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 差異表達(dá)基因聚類分析
        2.4.2 基因芯片結(jié)果驗(yàn)證
        2.4.3 GO term和GO tree分析
        2.4.5 差異基因GO pathway分析
        2.4.6 差異表達(dá)基因間相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)
        2.4.7 SLE患者和狼瘡小鼠B細(xì)胞中CCND3的表達(dá)均升高
    2.5 討論
第三章 TLR7通路調(diào)控B細(xì)胞CCND3的分子機(jī)制
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.3 主要儀器設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 小鼠脾臟B細(xì)胞的分離純化與培養(yǎng)
        3.3.2 RNA的提取
        3.3.3 cDNA的合成
        3.3.4 實(shí)時(shí)定量PCR
        3.3.5 lipo2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)
        3.3.6 western blot
        3.3.7 luciferase實(shí)驗(yàn)
        3.3.8 流式細(xì)胞術(shù)
        3.3.9 小鼠腎臟HE染色
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 激活TLR7通路能夠上調(diào)CCND3在B細(xì)胞中的表達(dá)
        3.4.2 激活TLR7通路能夠下調(diào)miR-15b在B細(xì)胞中的表達(dá)
        3.4.3 MiR-15b在活動(dòng)期SLE和狼瘡小鼠B細(xì)胞中的表達(dá)量均降低
        3.4.4 MiR-15b能夠直接靶向CCND3的3'-UTR
        3.4.5 咪喹莫特誘導(dǎo)的狼瘡模型的構(gòu)建
        3.4.6 CCND3在咪喹莫特誘導(dǎo)的狼瘡模型B細(xì)胞中表達(dá)上調(diào),而miR-15b在該模型B細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)
    3.5 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
碩士期間發(fā)表及待發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3820057