系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus, SLE)是一種常見的典型自身免疫性疾病,以B細胞的過度活化、T細胞的異常激活為主要特征。B細胞異�；罨凸δ墚惓τ赟LE的發(fā)病極為關鍵,但關于SLE B細胞異常病變的分子機制仍不清楚。近年來研究表明,TLR7在SLE發(fā)病進程中具有重要作用。我們實驗室在尋找其發(fā)病機制過程中發(fā)現(xiàn)：外部因素如TLR7配體、IFN-α和BCR配體刺激參與SLE中的B細胞的異常病變。Cyclin D3 (CCND3)是細胞周期蛋白D家族的三個成員之一,最早發(fā)現(xiàn)它能夠調控細胞G1到S期的轉換,而最近研究表明,其在B細胞的增殖、發(fā)育以及分化過程中起到至關重要的作用。但是TLR7是否能夠影響CCND3的表達,進而影響B(tài)細胞的功能,還未見報道�；谝陨涎芯�,我們推測TLR7能夠影響B(tài)細胞CCND3的表達來調控B細胞的相關功能。本研究首先比較了活動期SLE與正常人B細胞中表達基因的差異；其次對基因芯片結果進行了生物信息學分析,發(fā)現(xiàn)CCND3在活動期SLE的B細胞中異常表達；研究還發(fā)現(xiàn)激活TLR7通路能夠上調B細胞的CCND3表達,且下調miR-...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
第一章 TLR7受體及其信號通路在SLE中的研究進展
    1.1 SLE的研究概況
    1.2 SLE與B細胞
    1.3 TLR7與SLE
    1.4 TLR7與B細胞
    1.5 TLR7的阻斷劑對小鼠SLE模型的治療
第二章 SLE活動期患者B細胞芯片差異表達基因的分析
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗對象
        2.2.2 主要實驗試劑
        2.2.3 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 人外周血B細胞的分離純化
        2.3.2 總RNA的提取和純化
        2.3.3 cDNA的合成和純化(用來進行芯片雜交)
        2.3.4 芯片雜交
        2.3.5 差異基因的生物信息學分析
        2.3.6 cDNA的合成
        2.3.7 小鼠脾臟B細胞的分離純化
        2.3.8 細胞培養(yǎng)
        2.3.9 實時熒光定量PCR
    2.4 實驗結果
        2.4.1 差異表達基因聚類分析
        2.4.2 基因芯片結果驗證
        2.4.3 GO term和GO tree分析
        2.4.5 差異基因GO pathway分析
        2.4.6 差異表達基因間相互作用關系網絡
        2.4.7 SLE患者和狼瘡小鼠B細胞中CCND3的表達均升高
    2.5 討論
第三章 TLR7通路調控B細胞CCND3的分子機制
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗對象
        3.2.2 實驗試劑
        3.2.3 主要儀器設備
    3.3 實驗方法
        3.3.1 小鼠脾臟B細胞的分離純化與培養(yǎng)
        3.3.2 RNA的提取
        3.3.3 cDNA的合成
        3.3.4 實時定量PCR
        3.3.5 lipo2000脂質體轉染實驗
        3.3.6 western blot
        3.3.7 luciferase實驗
        3.3.8 流式細胞術
        3.3.9 小鼠腎臟HE染色
    3.4 結果
        3.4.1 激活TLR7通路能夠上調CCND3在B細胞中的表達
        3.4.2 激活TLR7通路能夠下調miR-15b在B細胞中的表達
        3.4.3 MiR-15b在活動期SLE和狼瘡小鼠B細胞中的表達量均降低
        3.4.4 MiR-15b能夠直接靶向CCND3的3'-UTR
        3.4.5 咪喹莫特誘導的狼瘡模型的構建
        3.4.6 CCND3在咪喹莫特誘導的狼瘡模型B細胞中表達上調,而miR-15b在該模型B細胞中表達下調
    3.5 討論
結論
參考文獻
附錄
碩士期間發(fā)表及待發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3820057