骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis,OP)是一種以骨量減少和骨微結(jié)構(gòu)退變?yōu)樘卣?導(dǎo)致骨折危險性增加的常見性骨骼疾病。隨著我國人口老齡化的到來,目前已成為嚴重影響中老年人生活質(zhì)量的一種慢性疾病。大量研究表明,低頻電磁場可以提高實驗動物的骨密度和骨生物力學(xué)性能,同時延緩骨量丟失,增加骨礦鹽沉積,且具有無創(chuàng)面、毒副作用小和使用便捷等諸多優(yōu)點。低頻電磁場治療骨質(zhì)疏松癥的療效雖已得到證實,并已運用于臨床治療,但其作用機制尚不十分明確。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),50Hz 0.6mT低頻脈沖電磁場(Pulsed electromagnetic fields,PEMFs)能夠顯著促進骨形成,本論文從以下幾方面對其作用的分子機理進行了研究,以期為PEMFs運用于骨質(zhì)疏松癥的臨床治療提供理論依據(jù)。首先,通過檢測經(jīng)PEMFs處理后不同時間大鼠顱骨成骨細胞(Rat calvarial osteoblasts,ROBs)成骨性因子的變化,發(fā)現(xiàn)RUNX-2、OSX的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達在電磁場處理后立即出現(xiàn)變化,且蛋白表達略滯后于基因轉(zhuǎn)錄,說明電磁場促進骨形成存在基因組效應(yīng);而ALP活性在電磁場處理后3h達到最高,其...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮寫詞表
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 骨質(zhì)疏松癥的概念及治療現(xiàn)狀
        1.1.1 骨重建及其調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)
        1.1.2 骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機理
        1.1.3 骨質(zhì)疏松癥的分型
        1.1.4 骨質(zhì)疏松癥的流行病學(xué)概況及治療現(xiàn)狀
    1.2 低頻電磁場的生物學(xué)效應(yīng)
        1.2.1 低頻地磁場發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的特點
        1.2.2 低頻電磁場對生物體的影響
    1.3 電磁場治療骨質(zhì)疏松的研究
    1.4 電磁場通過cAMP/PKA信號通路促進骨形成
        1.4.1 G蛋白偶聯(lián)受體與G蛋白
        1.4.2 蛋白激酶A
        1.4.3 cAMP/PKA信號通路與骨重建
    1.5 電磁場通過p38 MAPKs信號通路促進骨形成
        1.5.1 ERK1/2
        1.5.2 p38
        1.5.3 JNK1/2/3
        1.5.4 MAPKs信號通路與骨重建
第二章 脈沖電磁場促進骨形成的基因組效應(yīng)與非基因組效應(yīng)的研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 主要試劑配制
        2.2.2 成骨細胞分離培養(yǎng)
        2.2.3 堿性磷酸酶活性測定
        2.2.4 基因轉(zhuǎn)錄分析
        2.2.5 蛋白表達分析
    2.3 統(tǒng)計學(xué)處理
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 PEMFs處理后不同時間Runx-2、Osx基因轉(zhuǎn)錄變化
        2.4.2 PEMFs處理后不同時間RUNX-2、OSX蛋白表達變化
        2.4.3 PEMFs處理后不同時間ALP活性變化
        2.4.4 PEMFs處理后不同時間ALP基因轉(zhuǎn)錄變化
    2.5 討論
第三章 脈沖電磁場通過cAMP/PKA信號通路促進骨形成
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 主要試劑配制
        3.2.2 成骨細胞分離培養(yǎng)
        3.2.3 cAMP濃度測定
        3.2.4 免疫熒光染色
        3.2.5 堿性磷酸酶活性測定
        3.2.6 基因轉(zhuǎn)錄分析
        3.2.7 蛋白表達分析
        3.2.8 堿性磷酸酶染色
        3.2.9 茜素紅染色
    3.3 統(tǒng)計學(xué)處理
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 PEMFs處理不同時間cAMP濃度的變化
        3.4.2 PEMFs處理不同時間PKA磷酸化及核轉(zhuǎn)位情況的觀察
        3.4.3 DDA對PEMFs提高ALP活性的影響
        3.4.4 DDA對PEMFs提高ALP陽性克隆的影響
        3.4.5 DDA對PEMFs提高鈣化結(jié)節(jié)數(shù)量及面積的影響
        3.4.6 KT5720對PEMFs提高成骨性基因轉(zhuǎn)錄的影響
        3.4.7 KT5720對PEMFs提高成骨性蛋白表達的影響
    3.5 討論
第四章 脈沖電磁場通過p38 MAPKs信號通路促進骨形成
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 主要試劑配制
        4.2.2 成骨細胞分離培養(yǎng)
        4.2.3 蛋白表達分析
        4.2.4 堿性磷酸酶活性測定
        4.2.5 堿性磷酸酶染色
        4.2.6 茜素紅染色
    4.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 PEMFs對成骨細胞MAPKs磷酸化的影響
        4.4.2 SB202190對PEMFs提高ALP活性的影響
        4.4.3 SB202190對PEMFs提高ALP陽性克隆的影響
        4.4.4 SB202190對PEMFs提高鈣化結(jié)節(jié)數(shù)量及面積的影響
    4.5 討論
第五章 脈沖電磁場促進骨形成過程中cAMP/PKA與p38 MAPKs信號通路之間的相互影響
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗動物
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器設(shè)備
    5.2 實驗方法
        5.2.1 主要試劑配制
        5.2.2 成骨細胞分離培養(yǎng)
        5.2.3 蛋白表達分析
    5.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    5.4 結(jié)果
        5.4.1 DDA和KT5720對PEMFs提高p38磷酸化水平的影響
        5.4.2 SB202190對PEMFs提高PKA磷酸化水平的影響
    5.5 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄A 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄B



本文編號：3805187