目的:2型糖尿病的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)逐漸增加,目前尚沒有發(fā)現(xiàn)2型糖尿病的特異性預(yù)測標(biāo)志物,為糖尿病的早期診斷帶來了難度。我們通過構(gòu)建基因芯片旨在發(fā)現(xiàn)正常人、糖耐量受損、糖尿病之間的差異表達(dá)lncRNA,尋找能夠早期預(yù)測2型糖尿病的特異性標(biāo)志物,同時在糖尿病相關(guān)靶器官、靶組織中驗(yàn)證特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平差異,為2型糖尿病的早期預(yù)測和診斷提供參考。方法:1、芯片分析:選取健康人、糖調(diào)節(jié)受損患者、2型糖尿病患者各2名,抽取空腹靜脈全血制作基因芯片,篩選各組之間表達(dá)有差異的非編碼RNA,標(biāo)記出倍數(shù)差異。應(yīng)用芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行GO、KEGG等生物信息分析預(yù)測可能相關(guān)的蛋白及通路,預(yù)測糖尿病的相關(guān)發(fā)病機(jī)制。2、人群驗(yàn)證:選取正常人25名,糖調(diào)節(jié)受損患者27名,T2DM患者35名,抽取早上7點(diǎn)空腹外周靜脈血,應(yīng)用PCR技術(shù)檢測入組對象lncRNA MEG3的表達(dá)量。3、細(xì)胞實(shí)驗(yàn):檢測不同糖濃度下(5.5mmol/L,25mmol/L)胰島β細(xì)胞ins-1、正常人肝臟細(xì)胞7702中l(wèi)ncRNA MEG3的表達(dá)差異。結(jié)果:1、基因芯片結(jié)果:糖調(diào)節(jié)受損患者與正常人之間有376個差異lncRNA(倍數(shù)差異>...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、不同糖代謝狀態(tài)下基因芯片篩查lncRNA的血清差異表達(dá)及相關(guān)分析
    1.1 對象和方法
        1.1.1 芯片介紹
        1.1.2 研究對象
        1.1.3 相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)
        1.1.4 納入排除標(biāo)準(zhǔn)
        1.1.5 樣本的提取
        1.1.6 樣本質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)與結(jié)果
        1.1.7 芯片實(shí)驗(yàn)操作步驟
        1.1.8 芯片實(shí)驗(yàn)質(zhì)控方法
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 箱線圖
        1.2.2 散點(diǎn)圖
        1.2.3 差異基因功能分析
    1.3 小結(jié)
二、糖尿病、糖調(diào)節(jié)受損患者與正常人全血中差異表達(dá)的lncRNA相關(guān)驗(yàn)證
    2.1 對象和方法
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)分組
        2.1.4 納入排除標(biāo)準(zhǔn)
        2.1.5 儀器設(shè)備
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.7 引物設(shè)計
        2.1.8 實(shí)驗(yàn)試劑配置
        2.1.9 RNA的提取
        2.1.10 RNA沉淀清洗
        2.1.11 RNA沉淀溶解
        2.1.12 RNA純度濃度分析
        2.1.13 cDNA合成
        2.1.14 SYBR Green qPCR方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 臨床資料結(jié)果
        2.2.2 LncRNA MEG3在三組不同糖代謝人群中存在差異表達(dá)
        2.2.3 LncRNA MEG3在正常人、糖調(diào)節(jié)受損患者、糖尿病患者間具有極高診斷價值
    2.3 小結(jié)
三、細(xì)胞中表達(dá)差異的lncRNA的驗(yàn)證
    3.1 對象和方法
        3.1.1 研究對象
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 引物設(shè)計
        3.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.1.6 RNA提取、cDNA合成、PCR方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 高糖條件下LncRNA MEG3表達(dá)下降
四、討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷



本文編號：3805149