有機陰離子轉運蛋白(organic anion transporters,OATs)是由超過10種跨膜轉運蛋白所組成,是溶質載體超家族中的重要一員,其代表轉運蛋白有OAT1、OAT2和OAT3等。有機陰離子轉運蛋白1(OAT1)在內源性與外源性的有機離子重吸收及排泄的過程中扮演十分重要的角色,介導許多藥物(例如抗生素,非甾體抗炎藥,利尿藥和抗病毒藥等)的代謝產物和跨膜轉運。研究發(fā)現(xiàn)糖尿病大鼠模型、非酒精性脂肪肝模型、高尿酸血癥模型中,OAT1在腎臟組織中表達顯著降低,其中在腎小管上皮細胞胞膜表達下降,胞質表達明顯增加。此外,在臨床糖尿病腎病患者、急性腎損傷患者組織中也發(fā)現(xiàn)OAT1的表達水平較低,而病人尿液中OAT1的含量水平顯著高于正常組。炎性介質前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)可明顯降低大鼠腎臟細胞中OAT1的表達,抑制其轉運活性。而已知PGE2與PKA和PKC所介導的信號通路有關,并且其能否影響OAT1的表達,引起OAT1的內吞,以及如何影響尚不清楚。類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性、以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病,其病...

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【學位級別】：碩士

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1 前言
2 實驗材料
    2.1 藥物和試劑
    2.2 儀器和設備
    2.3 實驗動物
    2.4 臨床樣本
3 實驗方法
    3.1 大鼠膠原誘導性關節(jié)炎(CIA)模型的建立
    3.2 動物分組及給藥方法
    3.3 大鼠整體指標評價標準
    3.4 大鼠關節(jié)和脾臟組織病理評分標準
    3.5 免疫組化法檢測CIA大鼠滑膜組織中OAT1的表達
        3.5.1 樣本收集
        3.5.2 免疫組化法
    3.6 檢測大鼠血清中PGE2的水平
    3.7 Western blot法檢測OA與RA患者滑膜組織中OAT1的表達
        3.7.1 組織蛋白樣品的提取與制備
        3.7.2 Western blot 法
    3.8 PGE2對正常大鼠FLS中OAT1胞膜表達的時間效應
        3.8.1 正常大鼠FLS的分離培養(yǎng)及PGE2的刺激
        3.8.2 滑膜細胞胞膜蛋白的提取
        3.8.3 Western blot法檢測FLS中OAT1的胞膜表達
    3.9 CP-25對PGE2刺激的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜和胞質表達的影響
        3.9.1 激光共聚焦法檢測CP-25對PGE2刺激的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜表達
        3.9.2 Western blot法檢測CP-25對PGE2刺激的正常大鼠FLS中OAT1的胞質表達
    3.10 EP4拮抗劑對CP-25調控的PGE2誘導的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜表達的影響
    3.11 siRNA EP4對正常大鼠FLS中OAT1表達影響
    3.12 PKA抑制劑對CP-25調控的PGE2誘導的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜和胞質表達的影響
    3.13 細胞膜紅色熒光探針定位OAT1的表達和分布及CP-25的作用
    3.14 數(shù)據(jù)分析
4 結果
    4.1 CP-25對CIA大鼠整體指標的影響
        4.1.1 CP-25對CIA大鼠體重、關節(jié)炎指數(shù)、足爪腫脹數(shù)和足爪腫脹度的影響
        4.1.2 CP-25對CIA大鼠關節(jié)組織病理學的影響
        4.1.3 CP-25對CIA大鼠脾臟組織病理學的影
    4.2 各組大鼠血清中PGE2的水平
    4.3 各組大鼠滑膜組織中OAT1的表達水平
    4.4 OA與RA患者滑膜組織中OAT1的表達水平
    4.5 PGE2對正常大鼠FLS中OAT1胞膜表達的影響
    4.6 CP-25對PGE2刺激的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜和胞質表達的影響
    4.7 EP4拮抗劑對CP-25調控的PGE2誘導的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜表達的影響
    4.8 siRNA EP4對正常大鼠FLS中OAT1表達影響
    4.9 PKA抑制劑對CP-25調控的PGE2誘導的正常大鼠FLS中OAT1的胞膜和胞質表達的影響
    4.10 CP-25對正常大鼠FLS中OAT1的表達和分布的影響
5 討論
    5.1 CP-25對CIA大鼠滑膜組織中異常表達的OAT1的作用
    5.2 CP-25通過活化PGE2介導的信號通路影響OAT1在大鼠FLS中胞膜和胞質的表達
6 結論
7 參考文獻
附錄
致謝
綜述: 炎癥狀態(tài)下的細胞中藥物轉運體研究進展
    參考文獻



本文編號：3792055