本文關(guān)鍵詞：利拉魯肽降低2型糖尿病非酒精性脂肪肝大鼠肝臟磷酸化JNK的蛋白表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:非酒精性脂肪性肝病(non-alcohol fatty liver disease,NAFLD)是糖尿病患者最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一,其主要的病理特征為肝臟脂肪變性,后者可進(jìn)一步發(fā)展為肝炎、肝硬化甚至肝癌。NAFLD的發(fā)病機(jī)制尚未明確,目前認(rèn)為與肝臟胰島素抵抗(Insulin Resistance,IR)及“二次打擊”有關(guān)。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal protein kinase,JNK)信號(hào)通路相關(guān)的炎癥因子參與了NAFLD發(fā)生的中心環(huán)節(jié)——肝臟IR及“二次打擊”的氧化應(yīng)激肝損傷,與NAFLD的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)作為致炎因子,可誘導(dǎo)JNK信號(hào)通路的活化,進(jìn)而激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)的表達(dá),造成肝臟損傷。利拉魯肽是胰高糖素樣肽(glucagon-likepeptide1,GLP-1)類似物,近年研究證實(shí),利拉魯肽不僅具有促進(jìn)胰島素分泌、改善胰島素敏感性、保護(hù)胰島β細(xì)胞、降糖等重要作用,還可以改善肝重、減少肝內(nèi)脂肪累積。本研究采用高糖高脂飲食聯(lián)合腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ)誘導(dǎo)具有胰島素抵抗特點(diǎn)的2型糖尿病大鼠模型,觀察TNF-α、JNK磷酸化、NF-κB與2型糖尿病非酒精性脂肪性肝病的關(guān)系,探討利拉魯肽對(duì)2型糖尿病大鼠NAFLD的保護(hù)機(jī)制。方法:選用健康雄性Wistar大鼠24只,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,采用數(shù)字表法隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC,n=6)和實(shí)驗(yàn)組(EX,n=18),NC組采用標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng),實(shí)驗(yàn)組采用高脂高糖飼料喂養(yǎng)(含20.0%的蔗糖、10.0%的熟豬油、2.5%的膽固醇、1.0%的膽酸、66.5%標(biāo)準(zhǔn)飼料)。喂養(yǎng)4周后,實(shí)驗(yàn)組大鼠隔夜空腹腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ,用前以p H4.4的0.1mol/L檸檬酸緩沖液配成1%的溶液)30mg/kg,NC組僅注射等容積的檸檬酸緩沖液。于實(shí)驗(yàn)的第6周,即注射STZ 2周后,空腹8h測(cè)尾靜脈血糖,選擇血糖≥7.8mmol/L者為糖尿病成模標(biāo)準(zhǔn)(18只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中14只造模成功)。將成模糖尿病大鼠按照數(shù)字表法隨機(jī)分為2組:2型糖尿病空白對(duì)照組(DM,n=7)、2型糖尿病+利拉魯肽干預(yù)組(LIR,n=7)。LIR組給予利拉魯肽100μg·kg-1皮下注射,每日二次,NC組和DM組給予等量的蒸餾水皮下注射,每周測(cè)體重,共干預(yù)治療8周。于實(shí)驗(yàn)第14周末,空腹分別測(cè)量體重、血糖,麻醉后心尖取血、分離血清,檢測(cè)血清中膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、TNF-α、NF-κB水平。蘇木素伊紅(HE)染色觀察肝組織病理變化。油紅O染色觀察肝組織脂肪變性程度。免疫組化法測(cè)定大鼠肝組織JNK、磷酸化JNK(p-JNK)的蛋白表達(dá)水平。JNK主要陽(yáng)性表達(dá)于肝細(xì)胞漿,少量表達(dá)于肝細(xì)胞核,p-JNK陽(yáng)性表達(dá)于肝細(xì)胞核。以人工計(jì)數(shù)法半定量肝組織內(nèi)JNK、p-JNK的蛋白表達(dá)水平。應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,所有資料均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn),正態(tài)分布數(shù)據(jù)以x±s表示,非正態(tài)分布數(shù)據(jù)以中位數(shù)(最小值,最大值)表示,正態(tài)分布且方差齊的資料,用單因素方差分析(ANOVA)法,組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn),不符合正態(tài)檢驗(yàn)的資料,采用非參數(shù)檢驗(yàn),相關(guān)分析用直線相關(guān)分析法,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1各組大鼠一般情況:對(duì)照組大鼠狀態(tài)良好,進(jìn)食量及尿量無(wú)明顯變化,體重呈逐漸增加趨勢(shì)。DM組及LIR組大鼠進(jìn)食量、尿量較NC組有所增加。各組大鼠體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(NC 320.7±12.0g;DM326.3±69.6g;LIR組316.3±34.2g;χ2=0.309,P=0.857)。2實(shí)驗(yàn)6周末血糖數(shù)據(jù)對(duì)照組大鼠空腹血糖為6.50±0.52mmol/L,實(shí)驗(yàn)組為15.90±4.85mmol/L,實(shí)驗(yàn)組血糖較對(duì)照組明顯升高(P0.01)3實(shí)驗(yàn)14周末,三組大鼠各項(xiàng)生化指標(biāo)正常對(duì)照組:FBG 6.33±0.69 mmol/L,TC 2.18±0.39 mmol/L,TG 0.80±0.26 mmol/L,LDL-C 1.24±0.47 mmol/L,HDL-C 1.55±0.33 mmol/L,ALT 19.67±2.16 U/L,AST 104.50±11.48 U/L,TNF-α0.83±0.14 ug/ml,NF-κB 78.68±12.15μmol/L。糖尿病組:FBG 12.99±2.07 mmol/L,TC 4.15±0.41 mmol/L,TG 1.83±0.40 mmol/L,LDL-C 2.53±0.44 mmol/L,HDL-C 0.68±0.23 mmol/L,ALT 139.0±20.74 U/L,AST 150.00±24.75 U/L,TNF-α1.19±0.16 ug/ml,NF-κB 170.22±21.53μmol/L。利拉魯肽組:FBG 8.87±1.82 mmol/L,TC 3.42±0.82 mmol/L,TG 1.20±0.30 mmol/L,LDL-C 1.86±0.28 mmol/L,HDL-C 0.92±0.11 mmol/L,ALT 67.14±8.11 U/L,AST 164.70±25.49 U/L,TNF-α0.95±0.06 ug/ml,NF-κB 116.14±32.63μmol/L。與NC組相比,DM組大鼠血清FBG、TC、TG、LDL-C、ALT、AST、TNF-α、NF-κB水平明顯升高(均P0.05),HDL-C水平顯著降低(P0.05)。經(jīng)利拉魯肽干預(yù)8周后,LIR組大鼠血清中FBG、TC、TG、LDL-C、ALT、TNF-α、NF-κB均較DM組明顯降低(均P0.05),HDL-C及AST較DM組分別有上升和降低的趨勢(shì),但組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PHDL-C=0.070;PAST=0.228)。4各組肝組織病理染色結(jié)果HE染色可見(jiàn)NC組大鼠肝組織中有大小一致的肝細(xì)胞圍繞在肝小葉中央靜脈周圍,呈放射狀整齊排列,肝索結(jié)構(gòu)完整;DM組肝細(xì)胞肝索結(jié)構(gòu)紊亂,肝細(xì)胞濁腫、氣球樣變,小葉內(nèi)散在肝細(xì)胞點(diǎn)、灶狀壞死;LIR組肝細(xì)胞氣球樣變、炎癥活動(dòng)程度較DM組明顯改善。油紅O染色可見(jiàn)NC組大鼠肝細(xì)胞胞漿呈藍(lán)色,無(wú)脂滴;DM組大鼠肝組織內(nèi)可見(jiàn)中央靜脈、匯管區(qū)肝細(xì)胞內(nèi)充滿紅色脂滴,肝組織彌漫脂肪變性;LIR組可見(jiàn)肝細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴明顯減少。5各組免疫組化結(jié)果3組大鼠間p-JNK/JNK蛋白表達(dá)水平有顯著差別(χ2=12.606,P=0.002)。和NC組相比,DM組大鼠肝臟組織p-JNK/JNK蛋白表達(dá)水平顯著升高(Z=-2.935,P=0.003),經(jīng)利拉魯肽干預(yù)8周后,LIR組肝臟組織p-JNK/JNK蛋白表達(dá)水平較DM組明顯降低(Z=-2.859,P=0.004)。Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示,肝臟組織p-JNK/JNK和血清TNF-α、NF-κB的表達(dá)均呈正相關(guān)(r=0.518,P=0.019;r=0.529,P=0.012)。結(jié)論:1JNK的過(guò)度激活參與了糖尿病非酒精性脂肪肝病的發(fā)生發(fā)展;2利拉魯肽通過(guò)降低JNK的磷酸化,減輕炎癥反應(yīng),改善糖尿病非酒精性脂肪肝病。
【關(guān)鍵詞】：2型糖尿病 利拉魯肽 非酒精性脂肪肝病 大鼠 胰島素抵抗 c-Jun氨基末端激酶
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.1;R575.5
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-20
• 結(jié)果20-23
• 附圖23-32
• 附表32-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述 胰高糖素樣肽1對(duì)非酒精性脂肪肝病的作用42-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 范歆;陳少科;唐晴;羅靜思;馮瑩;;南寧市超重、肥胖兒童非酒精性脂肪肝患病情況分析[J];中國(guó)兒童保健雜志;2012年02期

2 劉亞軍;;單純肥胖兒童血脂、脂聯(lián)素水平與胰島素抵抗和脂肪肝發(fā)病率的相關(guān)性分析[J];海南醫(yī)學(xué);2014年14期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 潘曉莉;從肝細(xì)胞的成脂性改變探討非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：利拉魯肽降低2型糖尿病非酒精性脂肪肝大鼠肝臟磷酸化JNK的蛋白表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：373453