發(fā)布時間：2022-12-22 00:13

　　miR-103是miRNA家族的重要分子,通過靶向下游mRNA發(fā)揮生物功能。miR-103最初是由Mourelatos等人在2002年從人宮頸癌細(xì)胞株Hela中克隆測序并鑒定出來的。近年來,miR-103越來越受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn)miR-103調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂、代謝和應(yīng)激反應(yīng)等。在脂肪組織中,miR-103含量豐富,促進脂肪細(xì)胞分化,誘導(dǎo)肥胖個體中的胰島素抵抗等。除此之外,miR-103對脂肪其他生理功能影響還知之甚少。circRNA是一種通過3’-5’共價鍵首尾連接的環(huán)狀非編碼RNA,富含miRNA結(jié)合位點,通過吸附miRNA解除對miRNA靶基因的抑制作用,從而調(diào)控機體生理功能。本研究以miR-103為研究中心,尋找miR-103下游靶向的mRNA和上游結(jié)合的circRNA,檢測其對脂肪細(xì)胞凋亡、脂肪炎癥和白脂棕色化的影響并深入探究其調(diào)控機制。本研究將為肥胖和肥胖相關(guān)的代謝性疾病提供治療靶點。研究結(jié)果主要有:1.miR-103通過靶向Wnt3a/β-catenin/ATF6促進前體脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡。（1）在脂肪前體細(xì)胞中構(gòu)建細(xì)胞凋亡模型,發(fā)現(xiàn)miR-103在凋亡過程中上... 

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
文獻綜述
    第一章 CIRCULARRNA的生物合成和功能
        1.1 circRNA的廣泛表達
        1.2 circRNA的生物發(fā)生
            1.2.1 剪接體依賴的生物發(fā)生
            1.2.2 順式元件促進circRNA生物合成
            1.2.3 RNA結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)circRNA的生物合成
        1.3 circRNA調(diào)控基因表達
            1.3.1 circRNA可以作為miRNA海綿體
            1.3.2 circRNA調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄
            1.3.3 circRNA加工會影響剪接
    第二章 脂肪組織中的MIRNA調(diào)控
        2.1 miRNA調(diào)節(jié)肥胖
        2.2 WAT中miRNA分布
        2.3 miRNA調(diào)節(jié)胰島素敏感性和2型糖尿病
        2.4 miRNA調(diào)節(jié)炎癥
        2.5 miRNA調(diào)節(jié)分化
        2.6 miRNA調(diào)節(jié)白色脂肪棕色化
        2.7 miRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
    第三章 miR-103研究進展
        3.1 miR-103的生物學(xué)活性
        3.2 miR-103的生物功能
            3.2.1 miR-103調(diào)節(jié)糖脂代謝
            3.2.2 miR-103調(diào)控腫瘤發(fā)生
            3.2.3 miR-103調(diào)節(jié)神經(jīng)性疾病
試驗研究
    第四章 miR-103通過靶向Wnt3a/β-catenin/ATF6促進前體脂肪細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡
        4.1 前言
        4.2 材料與方法
            4.2.1 主要實驗儀器設(shè)備
            4.2.2 脂肪前體細(xì)胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
            4.2.3 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
            4.2.4 Western Blot
            4.2.5 Caspase3活性檢測
            4.2.6 流式細(xì)胞術(shù)
            4.2.7 TUNEL染色
            4.2.8 細(xì)胞免疫熒光
            4.2.9 數(shù)據(jù)分析
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 Wnt3a是miR-103的靶基因
            4.3.2 miR-103在脂肪細(xì)胞凋亡模型中表達上調(diào)
            4.3.3 miR-103促進脂肪前體細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
            4.3.4 miR-103通過靶向Wnt3a促進脂肪前體細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
            4.3.5 miR-103通過抑制Wnt/β-catenin信號通路促進脂肪前體細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
            4.3.6 ATF6是Wnt/β-catenin信號通路的下游靶基因
            4.3.7 miR-103促進的凋亡是由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 circARF3通過靶向miR-103/TRAF3抑制小鼠脂肪組織中線粒體自噬介導(dǎo)的炎癥
        5.1 前言
        5.2 材料與方法
            5.2.1 主要實驗儀器設(shè)備
            5.2.2 動物實驗
            5.2.3 脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
            5.2.4 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
            5.2.5 WesternBlot
            5.2.6 線粒體膜電位檢測
            5.2.7 細(xì)胞免疫熒光
            5.2.8 細(xì)胞線粒體分析
            5.2.9 數(shù)據(jù)分析
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 miR-103促進脂肪炎癥并抑制自噬
            5.3.2 miR-103通過抑制線粒體自噬激活NLRP3炎性小體
            5.3.3 TRAF3是miR-103的靶基因
            5.3.4 miR-103通過靶向TRAF3調(diào)節(jié)線粒體自噬介導(dǎo)的NLRP3炎性小體活化
            5.3.5 脂肪細(xì)胞中circARF3作為miR-103海綿體發(fā)揮作用
            5.3.6 circARF3通過吸附miR-103抑制線粒體自噬介導(dǎo)的脂肪炎癥
            5.3.7 circARF3通過抑制NF-κB信號通路抑制線粒體自噬介導(dǎo)的脂肪炎癥
            5.3.8 circARF3抑制體內(nèi)線粒體介導(dǎo)的脂肪炎癥
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
    第六章 circNRXN2-miR103-FGF10通過提高M2型ATM極化促進白脂棕色化
        6.1 前言
        6.2 材料和方法
            6.2.1 主要實驗儀器設(shè)備
            6.2.2 脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
            6.2.3 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
            6.2.4 Western Blot
            6.2.5 免疫熒光染色
            6.2.6 數(shù)據(jù)分析
        6.3 結(jié)果
            6.3.1 脂肪組織中circNrxn2-miR103-FGF10形成一個調(diào)控環(huán)路
            6.3.2 circNrxn2促進小鼠白脂棕色化
            6.3.3 circNrxn2促進M2型巨噬細(xì)胞極化
            6.3.4 circNrxn2通過提高M2型巨噬細(xì)胞極化促進白脂棕色化
        6.4 討論
        6.5 小結(jié)
本研究主要結(jié)論、創(chuàng)新點與進一步研究內(nèi)容
    1.本研究主要結(jié)論
    2.創(chuàng)新點
    3.下一步研究內(nèi)容
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]miRNA-103: Molecular link between insulin resistance and nonalcoholic fatty liver disease[J]. Qian Xu,Ying Li,Yong-Fang Shang,Hui-Ling Wang,Min-Xiu Yao.  World Journal of Gastroenterology. 2015(02)



本文編號：3723042