目的肥胖狀態(tài)下血液游離脂肪酸（Free Fatty Acids,FFA）水平升高,可促進(jìn)白細(xì)胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）等炎癥因子的表達(dá)及釋放,具體分子機(jī)制尚不十分明確。本研究在體外培養(yǎng)脂肪細(xì)胞的基礎(chǔ)上,探討Krüppel樣因子7（Krüppel-Like Factor 7,KLF7）在FFA促進(jìn)炎癥因子IL-6高表達(dá)過程中的作用,并嘗試闡明可能的分子機(jī)制,為治療肥胖、炎癥和相關(guān)代謝疾病提供新的靶點(diǎn)。方法（1）不同濃度飽和脂肪酸棕櫚酸（Palmitic Acid,PA）刺激體外培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞,qRT-PCR及Western blot法檢測KLF7及TLR4/NF-κB/IL-6炎癥信號(hào)通路關(guān)鍵因子及人單核細(xì)胞趨化蛋白-1（Monocyte Chemoattractant Protein-1,MCP-1）、白細(xì)胞介素-1β（Interleukin 1β,IL-1β）等炎癥因子的mRNA及蛋白表達(dá)水平;（2）運(yùn)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染和RNA干擾技術(shù),分別上、下調(diào)TLR4和KLF7在脂肪細(xì)胞內(nèi)的表達(dá),檢測上述關(guān)鍵因子的mRNA及蛋白表達(dá)水平;（3）PA刺激脂肪細(xì)胞的同時(shí),下調(diào)KLF... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞對照表
前言
實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 細(xì)胞
    1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
    1.3 引物序列
實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及誘導(dǎo)方法
    2.2 棕櫚酸溶液的配制
    2.3 質(zhì)粒構(gòu)建及轉(zhuǎn)染
    2.4 細(xì)胞RNA提取
    2.5 CHIP實(shí)驗(yàn)DNA提取方法
    2.6 DNA和 RNA瓊脂糖凝膠質(zhì)檢
    2.7 反轉(zhuǎn)錄
    2.8 實(shí)時(shí)定量PCR(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)
    2.9 PCR擴(kuò)增體系與擴(kuò)增程序
    2.10 細(xì)胞的蛋白提取
    2.11 Western Blot
    2.12 ELISA
    2.13 活化菌株
    2.14 質(zhì)粒提取
    2.15 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
    2.16 染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,CHIP)
    2.17 數(shù)據(jù)分析
結(jié)果
    3.1 小鼠成纖維細(xì)胞(3T3-L1)誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞
    3.2 高濃度PA刺激脂肪細(xì)胞,促進(jìn)了TLR4、KLF7和IL-6 等下游炎癥因子的表達(dá)
    3.3 TLR4 正向調(diào)控脂肪細(xì)胞KLF7和IL-6 的表達(dá)
    3.4 KLF7 正向調(diào)控脂肪細(xì)胞p65 磷酸化及IL-6 的表達(dá)
    3.5 高濃度PA通過上調(diào)脂肪細(xì)胞KLF7 表達(dá),促進(jìn)IL-6 的表達(dá)
    3.6 KLF7 可轉(zhuǎn)錄激活I(lǐng)L-6
    3.7 KLF7 不轉(zhuǎn)錄激活p65
    3.8 KLF7 轉(zhuǎn)錄激活I(lǐng)L-6 過程不依賴pp65
    3.9 KLF7 可靶向結(jié)合IL-6 DNA啟動(dòng)子區(qū)5'-1696~13863'bp以及5'-354~1043'bp
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同類型脂肪酸對HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的作用及Toll樣受體4表達(dá)的影響[J]. 宋志秀,喻曉,周蓓,吳云鳳.  衛(wèi)生研究. 2017(06)
[2]游離脂肪酸對3T3-L1細(xì)胞IL-6 mRNA及蛋白表達(dá)的影響[J]. 袁繼紅,朱意,付家忠.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(02)



本文編號(hào)：3721258