目的肥胖狀態(tài)下血液游離脂肪酸（Free Fatty Acids,FFA）水平升高,可促進白細胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）等炎癥因子的表達及釋放,具體分子機制尚不十分明確。本研究在體外培養(yǎng)脂肪細胞的基礎上,探討Krüppel樣因子7（Krüppel-Like Factor 7,KLF7）在FFA促進炎癥因子IL-6高表達過程中的作用,并嘗試闡明可能的分子機制,為治療肥胖、炎癥和相關代謝疾病提供新的靶點。方法（1）不同濃度飽和脂肪酸棕櫚酸（Palmitic Acid,PA）刺激體外培養(yǎng)的脂肪細胞,qRT-PCR及Western blot法檢測KLF7及TLR4/NF-κB/IL-6炎癥信號通路關鍵因子及人單核細胞趨化蛋白-1（Monocyte Chemoattractant Protein-1,MCP-1）、白細胞介素-1β（Interleukin 1β,IL-1β）等炎癥因子的mRNA及蛋白表達水平;（2）運用細胞轉染和RNA干擾技術,分別上、下調TLR4和KLF7在脂肪細胞內的表達,檢測上述關鍵因子的mRNA及蛋白表達水平;（3）PA刺激脂肪細胞的同時,下調KLF... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞對照表
前言
實驗材料
    1.1 細胞
    1.2 實驗試劑及儀器
    1.3 引物序列
實驗方法
    2.1 細胞培養(yǎng)及誘導方法
    2.2 棕櫚酸溶液的配制
    2.3 質粒構建及轉染
    2.4 細胞RNA提取
    2.5 CHIP實驗DNA提取方法
    2.6 DNA和 RNA瓊脂糖凝膠質檢
    2.7 反轉錄
    2.8 實時定量PCR(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)
    2.9 PCR擴增體系與擴增程序
    2.10 細胞的蛋白提取
    2.11 Western Blot
    2.12 ELISA
    2.13 活化菌株
    2.14 質粒提取
    2.15 熒光素酶報告基因實驗
    2.16 染色質免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,CHIP)
    2.17 數(shù)據(jù)分析
結果
    3.1 小鼠成纖維細胞(3T3-L1)誘導分化為脂肪細胞
    3.2 高濃度PA刺激脂肪細胞,促進了TLR4、KLF7和IL-6 等下游炎癥因子的表達
    3.3 TLR4 正向調控脂肪細胞KLF7和IL-6 的表達
    3.4 KLF7 正向調控脂肪細胞p65 磷酸化及IL-6 的表達
    3.5 高濃度PA通過上調脂肪細胞KLF7 表達,促進IL-6 的表達
    3.6 KLF7 可轉錄激活IL-6
    3.7 KLF7 不轉錄激活p65
    3.8 KLF7 轉錄激活IL-6 過程不依賴pp65
    3.9 KLF7 可靶向結合IL-6 DNA啟動子區(qū)5'-1696~13863'bp以及5'-354~1043'bp
討論
結論
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
致謝
作者簡介
附件


【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同類型脂肪酸對HepG2細胞胰島素抵抗的作用及Toll樣受體4表達的影響[J]. 宋志秀,喻曉,周蓓,吳云鳳.  衛(wèi)生研究. 2017(06)
[2]游離脂肪酸對3T3-L1細胞IL-6 mRNA及蛋白表達的影響[J]. 袁繼紅,朱意,付家忠.  江蘇農業(yè)科學. 2013(02)



本文編號：3721258