發(fā)布時間：2022-10-29 11:15

　　目的:探究促泌素（secretagogin,SCGN）在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及細(xì)胞凋亡發(fā)生中的調(diào)控作用及分子機(jī)制。方法:1.通過油紅O染色、BODIPY染色、CCK8實驗、流式細(xì)胞術(shù)分別檢測經(jīng)不同濃度ox-LDL處理小鼠胰島MIN6細(xì)胞后脂質(zhì)蓄積、細(xì)胞活力及細(xì)胞凋亡情況。2.運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡實驗（western blot,WB）檢測SCGN、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白（PERK,p-PERK,p-eIF2α,eIF2α,ATF4,CHOP）及凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase3的蛋白表達(dá)水平。3.采用siRNA技術(shù)降低MIN6細(xì)胞SCGN表達(dá)水平,進(jìn)而觀察SCGN-siRNA與ox-LDL（40μg/ml）處理組細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白（PERK,p-PERK,p-eIF2α,eIF2α,ATF4,CHOP）及凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase3的表達(dá)變化。4.構(gòu)建SCGN重組質(zhì)粒（recombinant SCGN,rSCGN）轉(zhuǎn)染MIN6細(xì)胞,構(gòu)建穩(wěn)定高表達(dá)SCGN細(xì)胞株。通過流式細(xì)胞術(shù)及WB實驗檢測空白對照組（control）、ox-LD... 

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 實驗材料
    2.1 細(xì)胞株
    2.2 siRNA及質(zhì)粒
    2.3 主要藥品和試劑、試劑盒
    2.4 主要試劑的配制
    2.5 主要儀器和設(shè)備
第3章 實驗方法
    3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.2 油紅O染色
    3.3 BODIPY染色
    3.4 CCK-8實驗
    3.5 SCGN真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染
    3.6 siRNA轉(zhuǎn)染
    3.7 流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)
    3.8 蛋白結(jié)合位點預(yù)測
    3.9 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)
    3.10 免疫共沉淀實驗(CO-IP)
    3.11 數(shù)據(jù)分析
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 不同濃度的ox-LDL對 MIN6 細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的影響
    4.2 ox-LDL誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞凋亡及降低細(xì)胞活力
    4.3 ox-LDL激活MIN6 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及下調(diào)SCGN的表達(dá)
    4.4 低表達(dá)SCGN可通過ATF4 通路激活MIN6 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        4.4.1 瞬時轉(zhuǎn)染SCGN-siRNA對 SCGN沉默效率的鑒定
        4.4.2 低表達(dá)SCGN通過ATF4 通路激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
    4.5 rSCGN可部分拮抗ox-LDL誘導(dǎo)的MIN6 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及凋亡
        4.5.1 rSCGN可部分拮抗ox-LDL誘導(dǎo)的MIN6 細(xì)胞凋亡
        4.5.2 rSCGN通過拮抗ox-LDL誘導(dǎo)的MIN6 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡
    4.6 SCGN與 ATF4 之間存在相互作用關(guān)系
第5章 討論
第6章 實驗結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間科研成果
致謝



本文編號：3697587