發(fā)布時(shí)間：2017-05-11 05:15

  本文關(guān)鍵詞：κ-阿片受體在改善高脂誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：高脂血癥引起的以肥胖、胰島素抵抗、高血壓等為表現(xiàn)的代謝綜合征的發(fā)病率逐年升高,并呈年輕化趨勢(shì),其可導(dǎo)致大血管病變發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的增加。在高血脂作用下,內(nèi)皮功能發(fā)生紊亂,其主要機(jī)制是血管內(nèi)皮合成釋放的各種血管活性物質(zhì)和細(xì)胞因子二者之間的平衡被打破。內(nèi)皮功能紊亂被認(rèn)為是促進(jìn)大血管病變?cè)缙诎l(fā)生發(fā)展的主要因素。因此,改善內(nèi)皮功能紊亂并阻止其進(jìn)展將會(huì)有效降低代謝綜合征的發(fā)病率。k-阿片受體(k-opioid receptor,k-OR)在心血管系統(tǒng)中廣泛表達(dá)。心臟可產(chǎn)生并釋放內(nèi)源性k-阿片肽,其可作用于k-OR從而調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)的活動(dòng)。我們課題組既往的研究發(fā)現(xiàn):①激活k-OR能夠以時(shí)間、劑量以及內(nèi)皮依賴性的方式舒張大鼠的腹主動(dòng)脈,在整體可以顯著降低正常和高血壓大鼠的動(dòng)脈血壓;②激活k-OR可上調(diào)低氧條件下NO的水平,同時(shí)抑制內(nèi)皮素(ET-1)和血管緊張素II(Ang II)的表達(dá),并可改善低氧誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈內(nèi)皮功能紊亂;③激活k-OR還可以抑制心肌缺血導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)和心肌細(xì)胞凋亡。這些作用均與NO的生成密切相關(guān),提示k-OR的激活可能具有內(nèi)皮依賴性的舒張血管、調(diào)節(jié)血管舒張/收縮因子的平衡狀態(tài)、改善內(nèi)皮功能以及抗炎等作用。然而,關(guān)于k-OR在高脂引起的內(nèi)皮損傷中的調(diào)節(jié)作用及分子機(jī)制尚不明確,因此,本課題在前期工作的基礎(chǔ)上,成功構(gòu)建了高脂誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡模型,觀察k-OR在改善高脂誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用及其可能的分子機(jī)制。研究結(jié)果可為治療高脂血癥引起的內(nèi)皮損傷提供新的策略�！灸康摹�1.在高脂誘導(dǎo)的內(nèi)皮凋亡模型中,闡明k-OR的激活對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為的影響;2.揭示k-OR的激活對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為產(chǎn)生影響的具體分子機(jī)制�！静牧吓c方法】1.人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)經(jīng)培養(yǎng)和鑒定后,用軟脂酸鈉(sodium palmitate)高脂誘導(dǎo)細(xì)胞損傷48小時(shí)后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.分組情況如下:正常對(duì)照組;高脂處理組;高脂處理+U50,488H(選擇性k-OR激動(dòng)劑)組;高脂處理+U50,488H+nor-BNI(選擇性k-OR拮抗劑)組。3.采用光學(xué)顯微鏡觀察各組細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。4.采用油紅染色分析各組細(xì)胞脂滴合成情況。5.采用細(xì)胞活力測(cè)定試劑盒(CCK-8)評(píng)價(jià)各組細(xì)胞生長(zhǎng)活力。6.采用雙染色法,通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)分析各組細(xì)胞凋亡比率。7.采用特異性抑制劑和小干擾RNA分別處理細(xì)胞,通過(guò)Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞中k-OR、p-Akt、total-Akt、p-e NOS、total-e NOS、Caspase 3等分子的蛋白表達(dá)情況。8.利用一氧化氮檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中NO的含量�！窘Y(jié)果】1.k-OR的激活對(duì)高脂誘導(dǎo)的HUVEC生物學(xué)行為的影響Sodium palmitate處理48小時(shí)后,高脂處理組細(xì)胞數(shù)目減少,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,呈典型的凋亡形態(tài),細(xì)胞中脂滴含量增加;同時(shí),細(xì)胞生存率明顯下降,凋亡顯著上調(diào)。U50,488H可以顯著改善高脂誘導(dǎo)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),降低細(xì)胞中脂滴的含量,提高細(xì)胞生存率,抑制細(xì)胞凋亡。上述作用可被κ-OR拮抗劑nor-BNI所阻斷,表明U50,488H是通過(guò)激活κ-OR,并可能介導(dǎo)了下游信號(hào)通路的活化,繼而引發(fā)了一系列細(xì)胞生物學(xué)行為的改善。2.κ-OR的激活在改善高脂誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的可能機(jī)制實(shí)驗(yàn)表明U50,488H可通過(guò)激活k-OR并活化PI3K-Akt-e NOS信號(hào)通路,進(jìn)而促進(jìn)NO的生成,同時(shí)抑制Caspase 3的表達(dá),從而抑制高脂誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。為進(jìn)一步驗(yàn)證抗高脂誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的作用是由κ-OR介導(dǎo)的,并且是通過(guò)PI3K-Akt-e NOS信號(hào)通路的活化實(shí)現(xiàn)的,本實(shí)驗(yàn)利用針對(duì)κ-OR和Akt的si RNA處理細(xì)胞,結(jié)果表明轉(zhuǎn)染針對(duì)κ-OR的si RNA后高脂誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡顯著增加,轉(zhuǎn)染針對(duì)Akt的si RNA后可以阻斷U50,488H的抗凋亡作用。上述結(jié)果表明,κ-OR介導(dǎo)的抗高脂誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的作用與PI3K-Akt-e NOS信號(hào)通路的活化有關(guān)。【結(jié)論】本研究首次提出κ-OR激動(dòng)后能夠通過(guò)介導(dǎo)PI3K-Akt-e NOS信號(hào)通路的活化,提高e NOS的生物活性,促進(jìn)NO的生成,從而抑制高脂誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。研究結(jié)果為臨床應(yīng)用阿片類物質(zhì)防治高脂誘導(dǎo)的內(nèi)皮損傷提供了理論依據(jù),同時(shí)為防治高脂血癥與代謝綜合征向心血管疾病的發(fā)展提供了新的思路及策略。
【關(guān)鍵詞】：高脂血癥 血管內(nèi)皮功能 κ-阿片受體 U50 488H 凋亡
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R589.2
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-14
• 前言14-15
• 文獻(xiàn)回顧15-28
• 第一部分：k-阿片受體選擇性激動(dòng)劑U50,488H對(duì)高脂誘導(dǎo)的HUVEC生物學(xué)行為的影響28-37
• 前言28
• 1 材料28-29
• 2 方法29-32
• 3 結(jié)果32-36
• 4 討論36-37
• 第二部分：k-阿片受體在內(nèi)皮細(xì)胞中介導(dǎo)的信號(hào)通路的初步探索37-48
• 前言37
• 1 材料37-39
• 2 方法39-42
• 3 結(jié)果42-47
• 4 討論47-48
• 第三部分：k-阿片受體在改善高脂誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用及分子機(jī)制48-66
• 前言48
• 1 材料48-51
• 2 方法51-55
• 3 結(jié)果55-64
• 4 討論64-66
• 小結(jié)66-67
• 參考文獻(xiàn)67-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果74-75
• 致謝75

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