目的初步探究強骨飲調(diào)節(jié)破骨細胞來源外泌體影響成骨細胞分化的內(nèi)在機制。方法制備強骨飲含藥血清,構(gòu)建破骨分化和成骨分化模型。設(shè)置對照血清組和含藥血清組,共同干預(yù)破骨細胞分化,找到最佳含藥血清濃度。采用免疫印跡法檢測兩組細胞外泌體釋放情況。將兩組外泌體加入成骨分化模型中,采用化學(xué)發(fā)光法檢測堿性磷酸酶（ALP）含量,采用實時熒光定量測量成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子（Runx2）、骨橋蛋白（OPN）、骨鈣素（OCN）表達情況。最后運用免疫印跡法檢測強骨飲干預(yù)下破骨分化的β環(huán)狀蛋白表達以及外泌體作用成骨分化的β環(huán)狀蛋白表達。結(jié)果細胞染色顯示含藥血清可明顯抑制TRAP活性。在兩組破骨分化模型外泌體中均表達CD9、CD63、CD81蛋白。在兩組外泌體干預(yù)下,ALP、Runx2、OPN和OCN的表達較對照組均降低,但含藥血清組中成骨因子表達較對照血清組增加。兩組成骨分化模型在外泌體干預(yù)下β環(huán)狀蛋白檢測較對照組均減少,但含藥血清組β環(huán)狀蛋白較對照血清組增加。含藥血清組破骨細胞檢測β環(huán)狀蛋白較對照血清組增加。結(jié)論強骨飲可抑制破骨分化,改善破骨來源外泌體對成骨分化的抑制作用。破骨來源外泌體可能傳遞miRNA作用wnt/... 

【文章來源】：中國骨質(zhì)疏松雜志. 2020,26(11)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

RAW264.7細胞的TRAP染色A:對照組，無任何處理;B:加入M-CSF和RANKL誘導(dǎo)破骨與不同濃度對照血清;C:加入M-CSF和RANKL誘導(dǎo)破骨與不同濃度含藥血清(**P<0.01)。

圖1 RAW264.7細胞的TRAP染色A:對照組，無任何處理;B:加入M-CSF和RANKL誘導(dǎo)破骨與不同濃度對照血清;C:加入M-CSF和RANKL誘導(dǎo)破骨與不同濃度含藥血清(**P<0.01)。2.3 外泌體對OB模型ALP活性的影響

OB模型均能促進OCN、OPN、RUNX2基因轉(zhuǎn)錄，加入外泌體Exo-Con和Exo-Drug均抑制OCN、OPN、RUNX2基因轉(zhuǎn)錄，但Exo-Drug對OCN、OPN、RUNX2基因轉(zhuǎn)錄抑制作用弱于Exo-Con。表明外泌體抑制OB分化，破骨分化誘導(dǎo)RAW264.7細胞外泌體抑制BM-MSC的成骨分化，加入含藥血清降低對OB分化的抑制作用(圖4)。2.5 強骨飲含藥血清對wnt/β-catenin通路的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]強骨飲對去卵巢大鼠骨折愈合骨小梁Micro-CT改變研究[J]. 姚建亮,王博,吳鵬,劉康,史曉林.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2016(11)
[2]強骨飲對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨顯微結(jié)構(gòu)的影響[J]. 王博,吳鵬,史曉林.  中醫(yī)正骨. 2016(07)



本文編號：3433435