發(fā)布時間：2017-04-30 15:06

  本文關鍵詞：2型糖尿病患者外周血單個核細胞NLRP3炎性體mRNA表達和炎性因子水平與動脈粥樣硬化相關性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景動脈粥樣硬化(AS)是一種發(fā)達國家的主要致死疾病。隨著人們生活水平提高和飲食習慣改變,該病也成為國內主要致死疾病之一。AS是血管壁慢性炎性病變,其發(fā)病機制尚未完全闡明,炎性細胞因子學說是AS致病的主要學說之一,炎性細胞因子廣泛參與炎癥的發(fā)生、發(fā)展,在AS中具有重要的作用和意義。發(fā)現新的炎性細胞因子,明確炎性細胞因子與AS的關系,對疾病的早期診斷、血管病變風險評估、細胞因子靶向性治療等具有重要意義。2型糖尿病(T2DM)患者易并發(fā)AS等大動脈病變。本研究通過檢測T2DM合并AS患者的外周血液中單個核細胞(PBMCs)中NOD樣受體熱蛋白結構域相關蛋白(NLRP)3炎性體mRNA表達和白介素(IL)-18、IL-1β等炎性因子水平,并分析各組患者數據間的關系,探討NLRP3炎性體與T2DM患者并發(fā)AS的相關性。NLRP3作為NLRPs蛋白家族中的典型代表,除通過富含亮氨酸的重復序列(LRR)識別其配體胞壁酰二肽(MDP)之外,還可以通過LRR結合識別尿酸、三磷酸腺苷(ATP)、內毒素和細胞裂解產物等活化NLRP3炎性體的信號通路,產生炎癥反應。國內關于NLRP3與AS相關性的研究仍然較少,在國外有報道認為NLRP3炎性體是一種新型的膽固醇代謝和炎癥之間的介質,在由膽固醇晶體引起的AS進展中發(fā)揮重要作用。也有研究發(fā)現炎癥因子與ApoE基因敲除的小鼠模型的AS的發(fā)展沒有相關性。因此,炎癥因子在AS中的作用還存在分歧。炎癥因子與糖尿病的發(fā)展也密切相關,炎癥因子與糖尿病及血管性疾病相關性的研究已成為熱點,對炎癥因子與糖尿病并發(fā)AS發(fā)生、發(fā)展相關性的研究有著非常重要的意義。目的探討NLRP3炎性體mRNA表達和IL-18、IL-1B水平與T2DM合并CAS的相關性。方法招募107例T2DM患者、35例非T2DM的頸動脈粥樣硬化(CAS)患者和35例健康體檢者用于本研究。根據華盛頓大學CAS斑塊超聲分級標準將107例T2DM患者分為單純T2DM組(n=26)、T2DM輕度斑塊組(n=32)、T2DM中度斑塊組(n=38)和T2DM嚴重斑塊組(n=11)。另選非T2DM的CAS患者作為單純CAS組(n=35),以及體檢健康者作為正常對照組(n=35)。建立實時熒光聚合酶鏈反應法(RT-FQ-PCR)檢測NLRP3炎性體mRNA的方法學,并通過探針穩(wěn)定性、檢測靈敏度、檢測特異性和檢測重復性四個方面對其進行評價,用于檢測各組PBMCs中NLRP3炎性體1nRNA表達水平,葡萄糖氧化酶-過氧化物酶偶聯法用于測定空腹血糖,酶法用于檢測血清總膽固醇和血清甘油三脂,雙試劑直接測定勻相法用于檢測高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇,酶聯免疫吸附試驗法用于檢測IL濃度。SPSS 18.0軟件用于統計學分析各組差異及患者PBMCs中NLRP3炎性體mRNA的表達及IL-18、IL-1β濃度與CAS斑塊嚴重程度的相關性。結果1.方法學評價1.1探針穩(wěn)定性不包含引物的PCR反應體系擴增30個循環(huán)后,未出現熒光信號,說明探針穩(wěn)定無異常斷裂。1.2檢測靈敏度NLRP3炎性體mRNA 和 β-actin mRNA擴增結果顯示,CT值均在15-25的范圍內,反應情況良好。1.3檢測特異性PCR擴增產物經2.0%瓊脂糖凝膠電泳,可見DNA marker 50-100 bp之間出現4個平行的單一條帶,與目的片段84 bp、85 bp、76 bp和80 bp的長度相符。1.4檢測重復性取正常對照組和T2DM合并CAS三小組樣本各一份,重復測定10次,批內CV%值分別為3.21%、3.68%、3.24%和3.55%；連續(xù)測定10天,批間CV%值分別為3.26%、3.75%、3.53%和3.90%。2.T2DM患者PBMCs中NLRP3炎性體mRNA表達水平與CAS的相關性2.1各病理組患者外周血中NLRP3炎性體mRNA表達水平均高于正常對照組(P0.05), T2DM合并CAS組NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表達水平顯著高于單純T2DM和單純CAS組(P0.01)；T2DM合并CAS組ASC mRNA表達水平顯著高于單純CAS組(P0.01)。2.2T2DM各斑塊組[LRP3 mRNA. ASC mRNA 和 Caspase-1 mRNA均高表達,并且兩兩正相關,即NLRP3 mRNA與ASC mRNA的表達水平呈正相關(r=0.61,P0.01),與Caspase-1 mRNA的表達水平亦呈正相關(r=0.52,P0.05),ASCmRNA與Caspase-1 mRNA的表達水平呈正相關(r=0.70,P0.01)。2.3 T2DM合并CAS輕度、中度和嚴重斑塊組NLRP3 mRNA表達呈逐漸遞減趨勢,即NLRP3 mRNA表達與斑塊厚度呈顯著負相關(r=-0.70,P0.01)；ASCmRNA表達輕度斑塊組中度斑塊組嚴重斑塊組,即ASC mRNA表達與T2DM患者CAS斑塊厚度呈負相關(r=-0.43,P0.05); Caspase-1 mRNA表達同樣呈下調趨勢,并與CAS斑塊厚度呈顯著負相關(r=-0.47,P0.01)3.IL-18和IL-1B相關性研究各斑塊組中IL-18和IL-1β的濃度均高于正常對照組,并與NLRP3炎性體mRNA表達量呈正相關,即IL-18和IL-113的濃度與NLRP3 mRNA表達呈正相關(r=0.70,P0.01和r=0.76,P0.01),與ASC mRNA表達呈正相關(r=0.69,P0.01和r=0.77,P0.01),與Caspase-1 mRNA表達也呈正相關(r=0.70,P0.01和r=0.74,P0.01)；但IL-1β和IL-18濃度與CAS斑塊厚度無相關性(r=0.07,P0.05和r=0.26,P0.05)。結論1. RT-FQ-PCR具有快速、準確的特點。其對NLRP3炎性體mRNA的檢測穩(wěn)定、特異性和重復性好,提供的實驗數據可靠。2. T2DM合并CAS患者NLRP3炎性體mRNA高表達,并且在CAS斑塊形成初期相對表達量最高,隨著CAS斑塊的逐漸成熟,表達漸趨沉寂。NLRP3炎性體mRNA高表達與T2DM患者合并CAS的發(fā)生、發(fā)展相關。3. T2DM合并CAS患者血液中炎性因子IL-18和IL-1β濃度升高,并與NLRP3炎性體mRNA表達正相關。炎性因子IL-18和IL-1β濃度增加與T2DM患者合并CAS的發(fā)生、發(fā)展相關。
【關鍵詞】：2型糖尿病 頸動脈粥樣硬化 外周血單個核細胞 NLRP3炎性體mRNA IL-18 IL-1β
【學位授予單位】：長江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 第1章 緒論12-16
• 第2章 材料和方法16-27
• 2.1 對象與分組16
• 2.2 本研究相關的常規(guī)檢查及IL-18和IL-1 β濃度的檢測方法16-20
• 2.3 NLRP3炎性體mRNA的檢測20-26
• 2.4 統計學處理26-27
• 第3章 實驗結果27-33
• 3.1 常規(guī)檢測結果27
• 3.2 RT-FQ-PCR檢測結果27-30
• 3.3 IL-18和IL-1β的濃度檢測結果30-33
• 第4章 討論33-36
• 4.1 T2DM并發(fā)CAS患者NLRP3炎性體mRNA的表達33-34
• 4.2 IL-18和IL-1β濃度變化與T2DM合并CAS的相關性34-36
• 第5章 結論36-37
• 致謝37-38
• 參考文獻38-43
• 綜述43-50
• 參考文獻47-50
• 個人簡介50-51

【共引文獻】

中國博士學位論文全文數據庫 前5條

1 呂敏;中老年自然人群頸動脈粥樣硬化現況調查暨傳統心血管病危險因素與頸動脈粥樣硬化的關系[D];中國協和醫(yī)科大學;2004年

2 程紅;補腎活血化痰方對動脈粥樣硬化斑塊易損性影響的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2009年

3 趙珊珊;通脈地仙丸對動脈粥樣硬化斑塊內血管新生及其穩(wěn)定性影響的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2010年

4 張衛(wèi)斌;補腎活血化痰法對動脈粥樣硬化斑塊炎性因子的干預研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2010年

5 邢潔;羅陸一學術思想和通脈地仙丸對冠心病心絞痛的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2011年

  本文關鍵詞：2型糖尿病患者外周血單個核細胞NLRP3炎性體mRNA表達和炎性因子水平與動脈粥樣硬化相關性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：337068