本文關(guān)鍵詞：2型糖尿病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞NLRP3炎性體mRNA表達(dá)和炎性因子水平與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是一種發(fā)達(dá)國(guó)家的主要致死疾病。隨著人們生活水平提高和飲食習(xí)慣改變,該病也成為國(guó)內(nèi)主要致死疾病之一。AS是血管壁慢性炎性病變,其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,炎性細(xì)胞因子學(xué)說是AS致病的主要學(xué)說之一,炎性細(xì)胞因子廣泛參與炎癥的發(fā)生、發(fā)展,在AS中具有重要的作用和意義。發(fā)現(xiàn)新的炎性細(xì)胞因子,明確炎性細(xì)胞因子與AS的關(guān)系,對(duì)疾病的早期診斷、血管病變風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、細(xì)胞因子靶向性治療等具有重要意義。2型糖尿病(T2DM)患者易并發(fā)AS等大動(dòng)脈病變。本研究通過檢測(cè)T2DM合并AS患者的外周血液中單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中NOD樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白(NLRP)3炎性體mRNA表達(dá)和白介素(IL)-18、IL-1β等炎性因子水平,并分析各組患者數(shù)據(jù)間的關(guān)系,探討NLRP3炎性體與T2DM患者并發(fā)AS的相關(guān)性。NLRP3作為NLRPs蛋白家族中的典型代表,除通過富含亮氨酸的重復(fù)序列(LRR)識(shí)別其配體胞壁酰二肽(MDP)之外,還可以通過LRR結(jié)合識(shí)別尿酸、三磷酸腺苷(ATP)、內(nèi)毒素和細(xì)胞裂解產(chǎn)物等活化NLRP3炎性體的信號(hào)通路,產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。國(guó)內(nèi)關(guān)于NLRP3與AS相關(guān)性的研究仍然較少,在國(guó)外有報(bào)道認(rèn)為NLRP3炎性體是一種新型的膽固醇代謝和炎癥之間的介質(zhì),在由膽固醇晶體引起的AS進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。也有研究發(fā)現(xiàn)炎癥因子與ApoE基因敲除的小鼠模型的AS的發(fā)展沒有相關(guān)性。因此,炎癥因子在AS中的作用還存在分歧。炎癥因子與糖尿病的發(fā)展也密切相關(guān),炎癥因子與糖尿病及血管性疾病相關(guān)性的研究已成為熱點(diǎn),對(duì)炎癥因子與糖尿病并發(fā)AS發(fā)生、發(fā)展相關(guān)性的研究有著非常重要的意義。目的探討NLRP3炎性體mRNA表達(dá)和IL-18、IL-1B水平與T2DM合并CAS的相關(guān)性。方法招募107例T2DM患者、35例非T2DM的頸動(dòng)脈粥樣硬化(CAS)患者和35例健康體檢者用于本研究。根據(jù)華盛頓大學(xué)CAS斑塊超聲分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)將107例T2DM患者分為單純T2DM組(n=26)、T2DM輕度斑塊組(n=32)、T2DM中度斑塊組(n=38)和T2DM嚴(yán)重斑塊組(n=11)。另選非T2DM的CAS患者作為單純CAS組(n=35),以及體檢健康者作為正常對(duì)照組(n=35)。建立實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-FQ-PCR)檢測(cè)NLRP3炎性體mRNA的方法學(xué),并通過探針穩(wěn)定性、檢測(cè)靈敏度、檢測(cè)特異性和檢測(cè)重復(fù)性四個(gè)方面對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià),用于檢測(cè)各組PBMCs中NLRP3炎性體1nRNA表達(dá)水平,葡萄糖氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法用于測(cè)定空腹血糖,酶法用于檢測(cè)血清總膽固醇和血清甘油三脂,雙試劑直接測(cè)定勻相法用于檢測(cè)高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法用于檢測(cè)IL濃度。SPSS 18.0軟件用于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各組差異及患者PBMCs中NLRP3炎性體mRNA的表達(dá)及IL-18、IL-1β濃度與CAS斑塊嚴(yán)重程度的相關(guān)性。結(jié)果1.方法學(xué)評(píng)價(jià)1.1探針穩(wěn)定性不包含引物的PCR反應(yīng)體系擴(kuò)增30個(gè)循環(huán)后,未出現(xiàn)熒光信號(hào),說明探針穩(wěn)定無異常斷裂。1.2檢測(cè)靈敏度NLRP3炎性體mRNA 和 β-actin mRNA擴(kuò)增結(jié)果顯示,CT值均在15-25的范圍內(nèi),反應(yīng)情況良好。1.3檢測(cè)特異性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2.0%瓊脂糖凝膠電泳,可見DNA marker 50-100 bp之間出現(xiàn)4個(gè)平行的單一條帶,與目的片段84 bp、85 bp、76 bp和80 bp的長(zhǎng)度相符。1.4檢測(cè)重復(fù)性取正常對(duì)照組和T2DM合并CAS三小組樣本各一份,重復(fù)測(cè)定10次,批內(nèi)CV%值分別為3.21%、3.68%、3.24%和3.55%；連續(xù)測(cè)定10天,批間CV%值分別為3.26%、3.75%、3.53%和3.90%。2.T2DM患者PBMCs中NLRP3炎性體mRNA表達(dá)水平與CAS的相關(guān)性2.1各病理組患者外周血中NLRP3炎性體mRNA表達(dá)水平均高于正常對(duì)照組(P0.05), T2DM合并CAS組NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表達(dá)水平顯著高于單純T2DM和單純CAS組(P0.01)；T2DM合并CAS組ASC mRNA表達(dá)水平顯著高于單純CAS組(P0.01)。2.2T2DM各斑塊組[LRP3 mRNA. ASC mRNA 和 Caspase-1 mRNA均高表達(dá),并且兩兩正相關(guān),即NLRP3 mRNA與ASC mRNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.61,P0.01),與Caspase-1 mRNA的表達(dá)水平亦呈正相關(guān)(r=0.52,P0.05),ASCmRNA與Caspase-1 mRNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.70,P0.01)。2.3 T2DM合并CAS輕度、中度和嚴(yán)重斑塊組NLRP3 mRNA表達(dá)呈逐漸遞減趨勢(shì),即NLRP3 mRNA表達(dá)與斑塊厚度呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.70,P0.01)；ASCmRNA表達(dá)輕度斑塊組中度斑塊組嚴(yán)重斑塊組,即ASC mRNA表達(dá)與T2DM患者CAS斑塊厚度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.43,P0.05); Caspase-1 mRNA表達(dá)同樣呈下調(diào)趨勢(shì),并與CAS斑塊厚度呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.47,P0.01)3.IL-18和IL-1B相關(guān)性研究各斑塊組中IL-18和IL-1β的濃度均高于正常對(duì)照組,并與NLRP3炎性體mRNA表達(dá)量呈正相關(guān),即IL-18和IL-113的濃度與NLRP3 mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.70,P0.01和r=0.76,P0.01),與ASC mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.69,P0.01和r=0.77,P0.01),與Caspase-1 mRNA表達(dá)也呈正相關(guān)(r=0.70,P0.01和r=0.74,P0.01)；但I(xiàn)L-1β和IL-18濃度與CAS斑塊厚度無相關(guān)性(r=0.07,P0.05和r=0.26,P0.05)。結(jié)論1. RT-FQ-PCR具有快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。其對(duì)NLRP3炎性體mRNA的檢測(cè)穩(wěn)定、特異性和重復(fù)性好,提供的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠。2. T2DM合并CAS患者NLRP3炎性體mRNA高表達(dá),并且在CAS斑塊形成初期相對(duì)表達(dá)量最高,隨著CAS斑塊的逐漸成熟,表達(dá)漸趨沉寂。NLRP3炎性體mRNA高表達(dá)與T2DM患者合并CAS的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。3. T2DM合并CAS患者血液中炎性因子IL-18和IL-1β濃度升高,并與NLRP3炎性體mRNA表達(dá)正相關(guān)。炎性因子IL-18和IL-1β濃度增加與T2DM患者合并CAS的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：2型糖尿病 頸動(dòng)脈粥樣硬化 外周血單個(gè)核細(xì)胞 NLRP3炎性體mRNA IL-18 IL-1β
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 第1章 緒論12-16
• 第2章 材料和方法16-27
• 2.1 對(duì)象與分組16
• 2.2 本研究相關(guān)的常規(guī)檢查及IL-18和IL-1 β濃度的檢測(cè)方法16-20
• 2.3 NLRP3炎性體mRNA的檢測(cè)20-26
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理26-27
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-33
• 3.1 常規(guī)檢測(cè)結(jié)果27
• 3.2 RT-FQ-PCR檢測(cè)結(jié)果27-30
• 3.3 IL-18和IL-1β的濃度檢測(cè)結(jié)果30-33
• 第4章 討論33-36
• 4.1 T2DM并發(fā)CAS患者NLRP3炎性體mRNA的表達(dá)33-34
• 4.2 IL-18和IL-1β濃度變化與T2DM合并CAS的相關(guān)性34-36
• 第5章 結(jié)論36-37
• 致謝37-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 綜述43-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 個(gè)人簡(jiǎn)介50-51

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 呂敏;中老年自然人群頸動(dòng)脈粥樣硬化現(xiàn)況調(diào)查暨傳統(tǒng)心血管病危險(xiǎn)因素與頸動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

2 程紅;補(bǔ)腎活血化痰方對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損性影響的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

3 趙珊珊;通脈地仙丸對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)血管新生及其穩(wěn)定性影響的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

4 張衛(wèi)斌;補(bǔ)腎活血化痰法對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊炎性因子的干預(yù)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

5 邢潔;羅陸一學(xué)術(shù)思想和通脈地仙丸對(duì)冠心病心絞痛的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：2型糖尿病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞NLRP3炎性體mRNA表達(dá)和炎性因子水平與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：337068