本文關鍵詞：甲減性心力衰竭大鼠心肌纖維化及其分子機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：甲狀腺功能減退(簡稱甲減)是一種常見的甲狀腺疾病,我國學者報道的臨床甲減患病率為1.0%。心血管系統(tǒng)是甲狀腺激素最重要的作用靶點之一,近年來,甲狀腺激素與心力衰竭(簡稱心衰)的關系已經引起人們關注。心衰是發(fā)病率最高的心血管疾病,治療心衰是當前心血管疾病研究的熱點。心衰的病理基礎之一是早期的心肌纖維化,纖維化是心臟長期負荷過重時發(fā)生的一種心室重構,是多種心血管系統(tǒng)疾病的常見并發(fā)癥和病理基礎,常導致嚴重的心律失常、心力衰竭,因此預防與逆轉這種改變就成為了治療心衰研究的重要方向。研究表明,甲減與心衰關系密切,但甲減導致心衰的相關機制尚未完全闡明。此外,動物模型是研究甲減與心衰關系的主要途徑,但目前國內外尚未建立方便穩(wěn)定的甲減致心衰的動物模型。在心肌纖維化的相關研究中人們發(fā)現(xiàn),磷酸腺苷(AMP)基因突變可導致心肌肥大及心律失常,AMPK的激活可通過負性調節(jié)m TOR/p70S6K通路減輕由壓力負荷過度誘發(fā)的的心肌纖維化。因此AMPK有望成為心肌纖維化疾病中的治療新靶點。本課題擬建立腹腔注射131I致甲減性心力衰竭大鼠模型,研究甲減導致心力衰竭大鼠心肌纖維化作用的靶點及相關分子機制。本研究結果將有助于闡明甲減導致心衰的可能機制,為甲減患者心衰的防治提供新思路和研究途徑。本實驗內容主要包括以下兩部分:第一部分甲減性心力衰竭大鼠動物模型的建立目的:建立通過腹腔注射131I致甲減性心力衰竭大鼠模型。方法:清潔級雄性健康Wistar大鼠(體重在200-220g)56只,適應性喂養(yǎng)1周后隨機分為7組:正常對照組、100μCi組、300μCi組、500μCi組、700μCi組、900μCi組、1100μCi組,每組8只。將131I用生理鹽水稀釋制成混合液,各個實驗組分別腹腔注射含100μCi、300μCi、500μCi、700μCi、900μCi、1100μCi131I的等體積混合液,正常對照組給予等體積的生理鹽水。喂養(yǎng)4周及8周后,心臟超聲評價大鼠心臟功能,核素掃描了解大鼠甲狀腺聚碘功能,ELISA試劑盒測定血清TT3、TT4、TSH、BNP水平,綜合判斷造模是否成功。結果:1實驗8周末,甲狀腺核素掃描處理組各組大鼠攝碘功能與正常對照組相比較顯著下降。2大鼠甲狀腺功能實驗4周末及實驗8周末,處理組各組大鼠TT3、TT4水平與正常對照組相比降低(P0.05),處理組各組TSH水平與正常對照組相比明顯升高(P0.05),隨著131I劑量增加差異更加顯著,但700μCi以上組與300μCi組、500μCi組相比未見明顯差異。3大鼠心臟功能實驗4周末,處理組各組大鼠室間隔厚度與正常對照組相比顯著升高(P0.05),700μCi以上組舒張期左室內徑與正常對照組、100μCi組、300μCi組、500μCi組相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),300μCi以上組左室后壁厚度、射血分數(shù)與正常對照組及100μCi組相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),500μCi以上組收縮期左室內徑與100μCi組、300μCi組及正常對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),處理組各組左室內徑縮短率與正常對照組相比明顯降低(P0.05)。實驗8周末,處理組各組大鼠室間隔厚度、左室后壁厚度與正常對照組相比顯著升高(P0.05),300μCi以上組舒張期左室內徑、收縮期左室內徑、射血分數(shù)、左室內徑縮短率與正常對照組、100μCi組相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),隨著131I劑量增加差異更加顯著,但700μCi以上組與300μCi組、500μCi組相比未見明顯差異。4大鼠BNP表達水平實驗4周末,處理組各組大鼠BNP水平與正常對照組相比差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。實驗8周末,處理組各組大鼠BNP水平與正常對照組相比差異有統(tǒng)計學差異(P0.05),并且隨著131I劑量增加差異更加顯著。結論:131I腹腔注射可致大鼠甲狀腺功能減低,同時伴有心功能下降。300μCi、500μCi131I劑量為最佳模型劑量。第二部分甲減性心力衰竭大鼠心肌纖維化相關分子機制研究目的:觀察甲減大鼠心肌形態(tài)學變化并對纖維化進行評估,通過對AMPK及m TOR/p70S6K通路進行研究,評價甲減對甲減性心力衰竭大鼠心肌纖維化作用的相關分子機制。方法:選取第一部分100μCi組、300μCi組、500μCi組及正常對照組四組大鼠的部分心尖組織切片行HE染色及天狼星紅染色,HE染色觀察心臟大體組織及細胞橫切面積,天狼星紅染色觀察心肌組織膠原含量。RT-PCR方法測定心臟組織NF-κB、CollagenⅠ、TGF-β、TNF-α、m TOR、EEF2、AMPK、p70S6K基因表達水平。Western-Blot方法測定心臟AMPK、P-AMPKα2Ser491、EEF2、P-EEF2、p70S6K、P-p70S6K Ser424、m TOR、P-m TOR蛋白表達水平。結果:1病理學結果(1)HE染色結果處理組各組與正常對照組相比,心肌細胞排列順序紊亂,細胞和細胞核大體形態(tài)不規(guī)則,心肌細胞所占面積顯著增大。(2)天狼星紅染色結果處理組各組與正常對照組相比,心肌細胞膠原含量顯著增多,細胞內膠原纖維增粗增大,排列順序紊亂,血管周圍的膠原增生明顯。2 8周末大鼠心肌組織基因表達水平8周末處理組各組大鼠心肌組織m TOR、EEF2、AMPKα2、p70S6K基因表達與正常對照組相比差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05);處理組各組NFκB、TNF-α基因表達與正常對照組相比明顯上調,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);300μCi組、500μCi組Collagen I、TGF-β基因表達與正常對照組相比明顯上調,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3 8周末大鼠心肌組織通路蛋白表達8周末處理組各組大鼠心肌組織m TOR、EEF2、AMPKα2、p70S6K蛋白表達與正常對照組相比差異沒有統(tǒng)計學意義(P0.05);處理組各組P-m TOR、P-AMPKα2Ser491、P-p70S6K Ser424蛋白表達水平與正常對照組相比均明顯上調,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);處理組各組P-EEF2蛋白表達水平與正常對照組相比明顯下調,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1在甲減性心力衰竭大鼠模型中,NFκB、Collagen I、TGF-β、TNF-α基因表達水平顯著上調,HE染色及天狼星紅染色結果均表明在甲減性心力衰竭大鼠中心肌纖維化形成。2在甲減性心力衰竭大鼠模型中,m TOR、EEF2、AMPKα2、p70S6K總蛋白水平差異沒有統(tǒng)計學意義,P-m TOR、P-AMPKα2Ser491、P-p70S6K Ser424總蛋白水平顯著上調,P-EEF2總蛋白表達水平顯著下調,說明甲減可能通過AMPK及m TOR/p70 S6K信號通路導致心肌纖維化。
【關鍵詞】：甲狀腺功能減退 心肌纖維化 心力衰竭 131I AMPK
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R581.2;R541.6
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 引言14-16
• 第一部分 甲減性心力衰竭大鼠動物模型的建立16-33
• 前言16
• 材料與方法16-20
• 結果20-23
• 附圖23-29
• 討論29-31
• 小結31
• 參考文獻31-33
• 第二部分 甲減性心力衰竭大鼠心肌纖維化相關分子機制研究33-55
• 前言33
• 材料與方法33-45
• 結果45-46
• 附圖46-50
• 附表50-51
• 討論51-53
• 小結53-54
• 參考文獻54-55
• 結論55-56
• 綜述 甲狀腺功能減退與心力衰竭的研究進展56-64
• 參考文獻60-64
• 致謝64-66
• 個人簡歷66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前1條

1 房輝,閻玉芹,陳祖培;缺碘與高碘大鼠甲狀腺抗氧化能力的實驗研究[J];中國地方病學雜志;2001年01期

  本文關鍵詞：甲減性心力衰竭大鼠心肌纖維化及其分子機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：335737