本文關鍵詞：雷公藤多苷對糖尿病大鼠腎臟巨噬細胞浸潤及NF-κB、MCP-1表達影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 本研究以高糖高脂飼養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)誘導的糖尿病大鼠為實驗對象,以雷公藤多苷(Tripterygium Wilfordii Polyglucoside TWP)為治療藥物,探討不同劑量雷公藤多苷對糖尿病腎病的預防及早期治療對減少糖尿病腎病大鼠蛋白尿的療效,雷公藤多苷對腎臟巨噬細胞浸潤及相關細胞因子NF-κB、MCP-1表達的影響及可能的作用機制。 方法 清潔級雄性SD大鼠136只,隨機選取16只分為預防正常對照組(PNC組)、治療正常對照組(TNC組),每組8只,飼以常規(guī)飼料；其余120只大鼠以高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周聯(lián)合小劑量STZ (30mg/kg)尾靜脈注射建立T2DM模型,將成模大鼠隨機分為預防模型對照組(PDM組)、預防雷公藤多苷低劑量組(PTL組,6mg/kg)、預防雷公藤多苷中劑量組(PTM組,12mg/kg)、預防雷公藤多苷高劑量組(PTH組,24mg/kg)及治療模型對照組(TDM組)、治療雷公藤多苷低劑量組(TTL組,6mg/kg)、治療雷公藤多苷中劑量組(TTM組,12mg/kg)、治療雷公藤多苷高劑量組(TTH組,24mg/kg),每組15只。預防組于DM成模后即開始灌胃,灌胃4周后處死；治療組于DM成模后第5周開始灌胃,第8周末處死；PNC、TNC組和PDM、TDM組以等量蒸餾水灌胃。觀察大鼠一般情況、血糖、腎重/體重、肝腎功能、血脂、血常規(guī)、24h尿蛋白的變化；光鏡、電鏡觀察腎臟病理及超微結構的變化；通過RT-PCR和免疫組化法分別從基因水平和蛋白水平探討細胞因子NF-κB、MCP-1在腎臟的表達情況,并通過RT-PCR及免疫組化法觀察巨噬細胞表面標記蛋白CD68的表達情況,明確巨噬細胞及NF-κB、MCP-1在DN中的作用以及雷公藤多苷治療的影響和可能機制。 結果 1.預防及治療組實驗大鼠,與對照組相比,糖尿病模型大鼠均表現為血糖升高、體重下降、腎重/體重的比重增加(P0.05),雷公藤多苷干預治療后血糖及體重較糖尿病模型組無明顯變化,腎重/體重較模型組均有所降低,其中雷公藤多苷給藥中劑量組降低最明顯。 2.肝腎功能：預防組實驗大鼠中PTH組AST水平較PNC、PDM、PTL及PTM組明顯升高(P0.05),各組間ALT、SCr、BUN水平比較無統(tǒng)計學差異(P0.05),治療組實驗大鼠中AST、ALT、SCr、BUN水平比較均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。血常規(guī)：預防組實驗大鼠中各組間WBC、RBC、Hb、PLT、LYM、 MONO及NEUT水平比較無統(tǒng)計學差異(P0.05),治療組實驗大鼠中雷公藤多苷給藥后各組的LYM水平均較TNC組下降(P0.05)，，WBC、RBC、Hb、 PLT、MONO及NEUT水平比較無統(tǒng)計學差異(P0.05)。血脂：高糖高脂飼料喂養(yǎng)組大鼠造模前TG、TC水平明顯高于PNC、TNC組(P0.05),預防及治療組雷公藤多苷給藥各組TG、TC均較模型對照組有所降低(P0.05),三組間無統(tǒng)計學差異(P0.05)。 3.24小時尿蛋白結果 與PNC、TNC組相比,PDM、TDM組大鼠UMA明顯升高(P0.05)；與PDM組相比,雷公藤多苷預防組干預后UMA有不同程度降低,其中PTM組下降最明顯(P0.05), PTL組次之(P0.05),PTH組降低不明顯(P0.05)；與TDM組相比,雷公藤多苷治療組給藥后UMA均明顯降低(P0.05),以TTM組下降最明顯。 4.光鏡 4.1預防組：PNC組大鼠腎小球、腎小管及腎間質未見明顯異常。PDM組大鼠可見腎小球輕度萎縮,系膜細胞輕度增生,腎小球毛細血管基底膜增厚,腎小管上皮細胞空泡及顆粒變性等DN的腎臟病理改變,雷公藤多苷干預后各組上述病理性改變均有所改善,其中PTM組改善最明顯。 4.2治療組：TNC組大鼠腎小球、腎小管及腎間質未見明顯異常。TDM組大鼠可見腎小球萎縮,系膜區(qū)彌漫性增寬,腎小球毛細血管基底膜增厚,腎小管上皮細胞空泡及顆粒變性、間質可見多量纖維組織灶性增生等DN的腎臟病理改變。雷公藤多苷給藥后各組上述病理性改變均有所改善,其中TTM組改善最明顯。 5.電鏡 5.1預防組：PNC組腎小球及腎小管均未見異常。PDM組腎小球基底膜增厚,足突融合,足細胞膜破裂；腎小管基底膜增厚斷裂,線粒體擴張、嵴斷裂。雷公藤多苷干預后,上述病理改變均較PDM組減輕,其中PTM組病理改變減輕最明顯。 5.2治療組：TNC組腎小球及腎小管均未見異常。TDM組大鼠腎小球基底膜明顯增厚,足突融合,足細胞細胞膜破裂；腎小管基底膜不規(guī)則增厚,線粒體嵴斷裂,結構模糊,細胞質內見大量吞飲泡(Pt),細胞膜邊界不清。雷公藤多苷給藥后,上述病理改變均較TDM組減輕,其中TTM組病理改變減輕最明顯。 6.免疫組化及RT-PCR:CD68、NF-κB、MCP-1在腎小球及腎小管中均有表達,CD68主要表達于腎小球區(qū)域,NF-κB及MCP-1主要表達于腎小管區(qū)域。 6.1預防組：與PNC組相比,PDM組CD68、NF-κB、MCP-1蛋白及基因表達水平明顯升高(P0.05)。與PDM組相比,雷公藤多苷干預各組CD68、NF-κB. MCP-1表達水平下降(P0.05),其中PTM組下降最明顯。 6.2治療組：與TNC組相比,TDM組CD68、NF-κB、MCP-1蛋白及基因表達水平明顯升高(P0.05)。與TDM組相比,雷公藤多苷給藥各組CD68、 NF-κB、MCP-1表達水平下降(P0.05),其中TTM組下降最明顯。 結論 1.成功制備DN模型,血糖、血脂水平、24h尿蛋白特點及腎臟病理變化符合人類T2DM及DN的特點及病理變化。 2.預防性給予雷公藤多苷藥物干預可有效延緩DN的發(fā)生發(fā)展,DN早期及時給予雷公藤多苷治療,可減少24h尿蛋白,有效延緩DN的進展。 3.應用低、中劑量雷公藤多苷能夠預防和治療早期DN,具有較高安全性,雷公藤多苷高劑量(24mg/kg/d)可能會引起肝腎毒性,臨床應用雷公藤多苷要注意控制藥量,密切觀察副作用。 4.糖尿病大鼠腎臟組織巨噬細胞浸潤及相關因子NF-κB、MCP-1的表達水平明顯上調,雷公藤多苷可改善巨噬細胞在腎臟的浸潤及相關細胞因子的表達。 5.預防組及治療組均提示雷公藤多苷中劑量組(12mg/kg/d)對于減小24h尿蛋白,改善腎臟病理改變及巨噬細胞在腎臟的浸潤及相關細胞因子的表達效果最顯著。
【關鍵詞】：2型糖尿病 糖尿病腎病 巨噬細胞 核因子-κB 單核細胞趨化蛋白-1 雷公藤多苷
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R587.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略語/符號說明11-13
• 前言13-16
• 研究現狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 材料和方法16-29
• 1. 材料16-18
• 2. 實驗方法18-29
• 結果29-67
• 1. 動物的成模情況及體征觀察29
• 2. 體重變化29-31
• 3. 腎重/體重的比較31-32
• 4. 常規(guī)生化檢查32-43
• 5. 病理學檢查43-47
• 6. NF-KB、MCP-1、CD68表達的比較47-67
• 討論67-75
• 1. 高脂高糖喂養(yǎng)聯(lián)合低劑量鏈脲佐菌素誘導的T_2DM鼠模型及其腎病特點67-68
• 2. NF-κB與DN68-70
• 3. MCP-1與DN70-71
• 4. 巨噬細胞浸潤與DN71-72
• 5. 雷公藤多苷對巨噬細胞及NF-κB、MCP-1的作用72-73
• 6. 雷公藤多苷毒副作用73-75
• 結論75-76
• 參考文獻76-81
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明81-82
• 綜述82-92
• 綜述參考文獻88-92
• 致謝92

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前9條

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  本文關鍵詞：雷公藤多苷對糖尿病大鼠腎臟巨噬細胞浸潤及NF-κB、MCP-1表達影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：322008