目的:研究二甲雙胍與葡萄糖激酶激活劑(glucokinase activators,GKAs)HMS5552聯(lián)用對(duì)2型糖尿病(type 2 Diabetes Mellitus,TD2M)大鼠糖代謝的作用機(jī)制。方法:從100只健康雄性SD大鼠中隨機(jī)挑出8只作為正常對(duì)照組(normal control group,NC),喂以普通飼料,其余用高脂高糖飼料喂養(yǎng)2個(gè)月后采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)40mg/kg的方法誘導(dǎo)建立2型糖尿病大鼠模型,連續(xù)兩次空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)≥8.0mmol/L的即為2型糖尿病大鼠模型。建模成功后,禁食12小時(shí),麻醉大鼠,心臟取血,離心取上清,測(cè)FPG、甘油三酯(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、胰島素(insulin,INS)和胰高血糖素(glucagon,GC)含量。將建模成功的大鼠隨機(jī)分為七組,每組8只1.糖尿病組(diabetes group,DM)2.HMS5552低劑量治療組(HMS-L,10 mg/kg HMS5552)3.HMS5552高劑量治療組(HMS-H,30 mg/kg HMS5552)4.二甲雙胍低劑量治療組(MET-L,80 mg/kg二甲雙胍)5.二甲雙胍高劑量治療組(MET-H,240 mg/kg二甲雙胍)6.HMS5552低劑量+二甲雙胍低劑量治療組(HMS-L+MET-L,10 mg/kg HMS5552+80 mg/kg二甲雙胍)7.HMS5552低劑量+二甲雙胍高劑量治療組(HMS-L+MET-H,10 mg/kg HMS5552+240 mg/kg二甲雙胍)。分組后,尾靜脈采血做口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(oral glucose tolerance test,OGTT)和口服藥物耐量試驗(yàn)(oral drug tolerance test,ODTT)。每天對(duì)各組進(jìn)行相應(yīng)藥物灌胃,NC組和DM組用等體積生理鹽水灌胃。藥物治療期間,觀察大鼠的一般情況,每周測(cè)體重。藥物治療4周,禁食12小時(shí)后,尾靜脈采血做OGTT、ODTT實(shí)驗(yàn),處死大鼠,心臟取血,離心取上清,測(cè)FPG、TG、TC、INS和GC含量。采用6-磷酸葡萄糖脫氫酶偶聯(lián)比色法檢測(cè)肝臟組織中葡萄糖激酶(glucokinase,GK)的酶活性;采用RT-PCR法檢測(cè)GK的表達(dá)變化;取肝臟、胰腺組織HE染色觀察病理學(xué)變化,免疫組織化學(xué)染色觀察肝臟中GK、胰腺中INS和GC的表達(dá);采用western-blot法檢測(cè)肝臟組織GK、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、乙酰輔酶A羧化酶(ACC)、磷酸化乙酰輔酶A羧化酶(P-ACC)在蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)成功建立2型糖尿病大鼠模型,FPG8.0mmol/L。(2)體重方面,未注射STZ前,高脂高糖飼料喂養(yǎng)的大鼠體重增長(zhǎng)速度高于正常組。第14周,與DM組比較,HMS-H組,MET-H組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),HMS-L+MET-L組,HMS-L+MET-H組差異顯著(P0.01)。(3)OGTT結(jié)果顯示,治療后,與DM組相比,所有治療組的△AUC0-240均有所下降(P0.01)。且HMS-H組,MET-H組,HMS-L+MET-L組和HMS-L+MET-H組的葡萄糖達(dá)峰時(shí)間較用藥前提前30min。(4)ODTT結(jié)果顯示,治療后,各治療組的初始血糖較治療前有了不同程度的下降,餐后60min最大血糖值較治療前下降明顯;與DM組相比,HMS-H組、HMS-L+MET-H組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)血清學(xué)指標(biāo)顯示,治療后,高脂高糖喂養(yǎng)的大鼠膽固醇(TC)水平較治療前有所升高,但各治療組的TC水平低于同時(shí)期的DM組。治療后,各組大鼠的甘油三酯(TG)水平較治療前有所升高,但各治療組的TG水平低于同時(shí)期的DM組。治療前,高脂高糖喂養(yǎng)的大鼠空腹血糖(FPG)明顯高于NC組,顯示造模成功。治療后,與DM組相比,HMS-L組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余治療組的下降幅度較大(P0.01)。治療后,與DM組相比,MET-H組血清胰島素(INS)水平升高明顯(P0.01)。治療后,各組大鼠的血清胰高血糖素(GC)水平較治療前有所下降。與DM組相比,各治療組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(6)GK酶活性結(jié)果顯示,治療后,與DM組相比,MET-L組、MET-H組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余各治療組差異明顯(P0.01)。(7)GKm RNA結(jié)果顯示,治療后,與DM組比,各治療組的表達(dá)量顯著增加(P0.01)。(8)肝臟HE染色結(jié)果顯示,NC組大鼠肝臟中肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列,肝小葉及細(xì)胞核結(jié)構(gòu)正常。DM組大鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)了脂肪樣變,肝細(xì)胞核發(fā)生了核溶解,肝索排列紊亂。各治療組都有了不同程度的改善。胰腺HE染色結(jié)果顯示,NC組大鼠胰腺組織結(jié)構(gòu)形態(tài)完整,胰島細(xì)胞清晰可見,胰島內(nèi)部的細(xì)胞呈團(tuán)索狀整齊排列。DM組大鼠胰島內(nèi)細(xì)胞有所減少并出現(xiàn)萎縮。各治療組胰島內(nèi)細(xì)胞較DM組有所增加,萎縮程度也有所減輕。(9)免疫組化染色結(jié)果顯示,與DM組相比,HMS-L組的GK表達(dá)量有所升高(P0.05),HMS-H組、HMS-L+MET-L組和HMS-L+MET-H組明顯升高(P0.01)。胰島素(INS)染色結(jié)果顯示,與DM組相比,HMS-H組、MET-L組的INS表達(dá)量有所升高(P0.05),MET-H組、HMS-L+MET-L組和HMS-L+MET-H組升高明顯(P0.01)。胰高血糖素(GC)染色結(jié)果顯示,與DM組相比,MET-L組的GC表達(dá)量有所下降(P0.05),其余各治療組明顯下降(P0.01)。(10)免疫印跡結(jié)果顯示,GK的蛋白表達(dá),除MET-L和MET-H組外其余各治療組與DM組相比,GK的表達(dá)量都升高明顯(P0.01)。AMPK免疫印跡結(jié)果顯示,與DM組相比,各治療組AMPK的表達(dá)量顯著升高(P0.01)。P-ACC/ACC免疫印跡結(jié)果顯示,與DM組相比,HMS-L組表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),HMS-H組表達(dá)量有差異性(P0.05),其余四組差異顯著(P0.01)。結(jié)論:(1)降低血糖方面,聯(lián)合用藥優(yōu)于單獨(dú)用藥。(2)提升胰島素及降低胰高血糖素方面,聯(lián)合用藥優(yōu)于單獨(dú)用藥。(3)HMS5552可以升高GK的濃度及活性,二甲雙胍可以升高GK的濃度,聯(lián)合用藥優(yōu)于單獨(dú)用藥。(4)HMS5552可能通過AMPK-ACC信號(hào)通路降低血糖。
【學(xué)位單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R587.1
【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 糖尿病概述
    1.2 糖尿病的流行病學(xué)及發(fā)病機(jī)制
        1.2.1 糖尿病的流行病學(xué)及危害
        1.2.2 2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制
    1.3 2型糖尿病的治療
        1.3.1 運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)
        1.3.2 西藥治療
        1.3.3 中藥治療
        1.3.4 減重手術(shù)治療
    1.4 葡萄糖激酶
    1.5 葡萄糖激酶激活劑
        1.5.1 葡萄糖激酶激活劑治療2型糖尿病
    1.6 二甲雙胍
        1.6.1 二甲雙胍的降糖機(jī)制
        1.6.2 二甲雙胍聯(lián)合西藥的降糖療效
        1.6.3 二甲雙胍聯(lián)合中藥的降糖療效
第2章 前言
第3章 材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 試劑配方
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 2型糖尿病大鼠模型的建立、分組及藥物治療
        3.2.2 口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)
        3.2.3 口服藥物耐量實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 標(biāo)本采集及血液生化指標(biāo)的測(cè)定
        3.2.5 肝臟組織中GK的酶活性測(cè)定
        3.2.6 RT-PCR法檢測(cè)大鼠肝臟組織中GKm RNA的表達(dá)
        3.2.7 大鼠肝臟、胰腺組織的石蠟塊制備
        3.2.8 HE染色及免疫組織化學(xué)染色
        3.2.9 免疫印跡法檢測(cè)肝組織GK、AMPK、ACC、P-ACC蛋白的表達(dá)情況
    3.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 結(jié)果
    4.1 實(shí)驗(yàn)大鼠的一般情況
    4.2 實(shí)驗(yàn)大鼠的體重變化
    4.3 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠OGTT結(jié)果的影響
    4.4 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠ODTT結(jié)果的影響
    4.5 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠血清學(xué)指標(biāo)的影響
    4.6 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠肝臟GK酶活性的影響
    4.7 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠肝臟GK m RNA表達(dá)的影響
    4.8 HE染色觀察聯(lián)合用藥對(duì)大鼠肝臟、胰腺組織結(jié)構(gòu)影響
        4.8.1 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)影響
        4.8.2 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠胰腺組織結(jié)構(gòu)影響
    4.9 免疫組織化學(xué)染色觀察聯(lián)合用藥對(duì)大鼠肝臟、胰腺中相關(guān)因子表達(dá)的影響
        4.9.1 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠肝臟組織中GK的表達(dá)情況影響
        4.9.2 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠胰腺組織中INS、GC的表達(dá)情況影響
    4.10 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠肝臟組織中GK、AMPK、ACC、P-ACC蛋白表達(dá)水平的影響
第5章 討論
    5.1 2型糖尿病大鼠模型
    5.2 聯(lián)合用藥對(duì)大鼠糖代謝的影響
    5.3 聯(lián)合用藥對(duì)GK及其活性的影響
    5.4 聯(lián)合用藥對(duì)胰島素的影響
    5.5 聯(lián)合用藥對(duì)胰高血糖素的影響
    5.6 聯(lián)合用藥對(duì)AMPK/ACC信號(hào)通路的影響
    5.7 問題與展望
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
縮略詞匯表
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果

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本文編號(hào)：2891629