目的:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是以侵蝕性、對(duì)稱性多關(guān)節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的慢性、全身性自身免疫性疾病。其還可伴隨并發(fā)復(fù)雜的關(guān)節(jié)外表現(xiàn),目前研究還發(fā)現(xiàn)RA會(huì)使許多疾病的發(fā)生率增加。RA的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,目前主要認(rèn)為受免疫、遺傳、環(huán)境等多方面因素共同影響。近年來發(fā)現(xiàn),六種高親和力胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(IGFBPs)家族是IGF作用的主要調(diào)節(jié)劑。并已被證實(shí)是眾多生物學(xué)過程如細(xì)胞周期、增殖、代謝中的調(diào)節(jié)因子之一。IGFBPs的異常表達(dá)涉及許多疾病的病理過程,如腫瘤、心血管系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病等。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-6(IGFBP6)屬于IGFBPs,具有依賴或非依賴IGF而發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖和血管的生成,以及誘導(dǎo)腫瘤中的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞遷移的作用。其可分別在胞內(nèi)和核內(nèi)發(fā)揮作用,且其差異性表達(dá)被發(fā)現(xiàn)在多種疾病中。由于IGFBP6在大鼠和人之間高度同源。且已經(jīng)證實(shí),膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠模型是鑒定RA易感性和相關(guān)慢性炎癥性自身免疫疾病的有用模型。CIA大鼠模型的使用可以減少研究對(duì)象之間的差異,并使人們更清楚地了解RA的復(fù)雜病理機(jī)制。因此,選擇CIA大鼠模型來研究IGFBP6在RA中的表達(dá)差異及其相關(guān)性。目前,雖然甲氨蝶呤(MTX)廣泛用于RA的治療,但MTX治療受到副作用的嚴(yán)重影響,限制了其應(yīng)用。因此,本研究還考慮了在MTX作用下IGFBP6的變化,尋找MTX對(duì)RA作用的潛在反應(yīng)生物標(biāo)志物,為RA的治療尋找新的靶點(diǎn)。研究方法:24只Wistar大鼠分為正常組,CIA組和CIA+MTX組。正常組進(jìn)行對(duì)照,CIA組用Ⅱ型膠原二次免疫的方法造CIA大鼠模型,CIA+MTX組在造模的基礎(chǔ)上用甲氨蝶呤(1.5mg/kg)治療。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)以及蛋白質(zhì)印跡和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)的方法在蛋白質(zhì)和mRNA水平上檢測(cè)三組大鼠血清、滑膜、脾臟中IGFBP6的表達(dá)差異,并分析IGFBP6表達(dá)與關(guān)節(jié)炎指數(shù)之間的相關(guān)性。結(jié)果:1、血清中IGFBP6水平,與正常組相比,CIA組大鼠血清中IGFBP6水平顯著增加。給藥后,血清IGFBP6水平顯著降低,但與正常組相比仍存在一些差異。在CIA組,IGFBP6血清濃度與CIA大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分正相關(guān),但在正常組和CIA+MTX組中并沒有相關(guān)。2、滑膜和脾臟樣品中IGFBP6水平,與對(duì)照組相比,來自CIA組大鼠的滑膜和脾樣品中IGFBP6表達(dá)顯著增加。相比之下,MTX給藥可以降低CIA大鼠模型滑膜和脾臟中IGFBP6的增加,但與對(duì)照組相比仍有一些顯著差異。3、滑膜和脾臟樣品中的IGFBP6 mRNA水平,CIA組中滑膜樣品的IGFBP6 mRNA水平顯著高于正常組,并且在MTX給藥后顯著降低。脾臟有類似的變化。且在CIA組中滑膜和脾中的IGFBP6 mRNA水平和大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)正相關(guān),但是在正常組和CIA+MTX組沒有觀察到這一結(jié)果。結(jié)論:我們的數(shù)據(jù)突出顯示與對(duì)照組相比,在CIA大鼠中IGFBP6在血清、滑膜、脾中IGFBP6的高表達(dá),并證明其與疾病活性正相關(guān)。因此,IGFBP6可能可以作為RA嚴(yán)重程度的標(biāo)志物。同時(shí),IGFBP6的表達(dá)可以通過MTX的作用下調(diào),且其與MTX有相同的作用通路。表明IGFBP6可能是MTX治療RA的新的潛在治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R593.22
【部分圖文】：

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié) 果3.1 CIA 大鼠模型的構(gòu)建3.1.1 CIA 大鼠模型示意圖概述 CIA 大鼠造模和治療的示意圖。適應(yīng)性喂養(yǎng) 14 天后，在第 0 天和第 7天對(duì)雌性 Wistar 大鼠進(jìn)行免疫。第 14 天評(píng)估關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分（評(píng)分≥2），將CIA 大鼠隨機(jī)分組并用 MTX（1.5mg / kg）或 PBS 進(jìn)行胃內(nèi)給藥。每周一次，共3 周。在實(shí)驗(yàn)的終點(diǎn)，處死大鼠并收集組織用于進(jìn)一步分析。如圖 1 所示。

21圖 2. CIA 大鼠造模的評(píng)估來自不同實(shí)驗(yàn)組的大鼠的代表性圖像（A）。 不同處理下大鼠體重變化（B）。 不同處理下大鼠的關(guān)節(jié)炎評(píng)分（C）。 在不同處理下大鼠的關(guān)節(jié)腫脹度（D）和足爪厚度（E）。 處死大鼠后，收獲脾臟（F）。 數(shù)據(jù)表示為每組 8 只動(dòng)物的平均值±SEM，并通過多重 ANOVA（脾指數(shù)的單因素 ANOVA）進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)代表八個(gè)實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)生了類似的結(jié)果。* p <0.05;** p <0.01; *** p <0.001; **** p <0.0001

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文7）如圖 3A 所示，為了進(jìn)一步評(píng)估 CIA 模型的構(gòu)建，采用免疫染色的方法進(jìn)行評(píng)估，分別在 100*和 200*的放大下觀察。RA 的病理特征，包括炎性細(xì)胞浸潤，滑膜增生，軟骨破壞和骨侵蝕等。在正常組中，我們可以看到無炎性細(xì)胞親潤及滑膜增生，關(guān)節(jié)面光滑，無破損。在 CIA 組中我們可以明顯的看到關(guān)節(jié)面的破壞，毛刺狀，關(guān)節(jié)面不連續(xù)，關(guān)節(jié)軟骨和滑膜的破壞。在 CIA+MTX 組中我們可以觀察到其關(guān)節(jié)面沒有正常組光滑，但沒有看到明顯的關(guān)節(jié)面破壞。軟骨細(xì)胞排列也相對(duì)整齊。我們進(jìn)一步使用半定量分級(jí)量表進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)估。如圖 3B 所示，在 CIA 組中，增加的細(xì)胞浸潤和軟骨變性轉(zhuǎn)化為組織學(xué)評(píng)分為 5.13±0.35。CIA+MTX 組中組織學(xué)評(píng)分較低，為 2.25±0.45。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，這種差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p <0.05）。
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本文編號(hào)：2874933