目的:探究Nur77敲除小鼠腸道菌群的變化與肥胖的關(guān)系,以及卡泊三醇聯(lián)合BRD9抑制劑(iBDR9)干預(yù)后是否發(fā)生轉(zhuǎn)變。方法:將7周齡野生型C57BL/6J小鼠和Nur77敲除小鼠,分別隨機(jī)分為兩組(對照組和干預(yù)組),每組7只鼠。適應(yīng)性養(yǎng)1周,野生小鼠對照組予以載體腹腔注射處理,野生小鼠干預(yù)組予以卡泊三醇聯(lián)合iBRD9腹腔注射給藥,Nur77敲除小鼠兩組處理方法與之相同,4組分別為野生小鼠對照組(WT-V),野生小鼠干預(yù)組(WT-T),Nur77敲除小鼠對照組(KO-V),Nur77敲除小鼠干預(yù)組(KO-T)。每周注射3次,共給藥12周。測小鼠體重、飲食、體成分、血清學(xué)水平以及糞便16SrRNA測序。結(jié)果:1、KO-V與WT-V相比體重顯著增多,KO-T與KO-V相比體重顯著減輕,四組小鼠飼料消耗量無顯著差異。2、KO-V體脂率顯著高于WT-V,Nur77敲除鼠干預(yù)后體脂率顯著降低,四組小鼠瘦體重率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、組間群落結(jié)構(gòu)差異顯著性檢驗(yàn),顯示KO-V與WT-V組間群落結(jié)構(gòu)有顯著性差異,KO-V與KOT組組間群落結(jié)構(gòu)有顯著性差異。4、組間差異物種分析,通過對WT-V-WT-T-KOV-KO-T的LEfSe分析,我們發(fā)現(xiàn)KO-V-KO-T的biomarker共有2個,包括Alistipes、Rikenellaceae;WT-V-KO-V的biomarker共有5個,包括Lachnospiraceae、Parvibacter、Alistipes、Rikenellaceae、Prevotellaceae。5、腸道菌群物種相對豐度,擬桿菌(Bacteroidetes)和厚壁菌門(Firmicutes)占細(xì)菌群體的主要部分(93.24%-97.43%)。KO-V較WT-V中擬桿菌含量高,KO-T擬桿菌降低,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。疣微菌門(Verrucomicrobia)KO-V較WT-V少,KO-T有比較明顯的增多,Akkermansiaceae科豐度與之相同,提示卡泊三醇聯(lián)合iBRD9干預(yù)后Nur77敲除小鼠腸黏膜屏障有所改善。6、Nur77敲除小鼠的腸黏膜連接蛋白mRNA相對表達(dá)量咬合蛋白(Ocln)和緊密連接蛋白3(Cldn3)降低,KO-T顯著增多,黏膜閉合小環(huán)蛋白-1(ZO-1)中KO-T較KO-V明顯增多;抗菌肽溶菌酶C(Lyz1)、胰島再生源蛋白IIIγ(Reg3γ)、磷脂酶A2Ⅱ族(Pla2g2)、血管生成素4(Ang4)mRNA相對表達(dá)量中,Reg3γ的mRNA相對表達(dá)量KO-V有明顯降低,KO-T明顯增多;KO-V較WT-V炎癥因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)的mRNA相對表達(dá)量均增多,KO-T組TNF-α和IL-6明顯減少。7、KO-V較WT-V血清LPS明顯增多,KO-T顯著下降,和腸道菌群擬桿菌趨勢相同。血清TNF-α、IL-1β在KOV較WT-V野生小鼠明顯增多,KO-T中IL-6有明顯改善。結(jié)論:Nur77敲除鼠發(fā)生的肥胖,可能與全身低度炎癥有關(guān),而血中及全身的低度炎癥可能來源于Nur77缺乏所致的腸道菌群紊亂、腸粘膜屏障功能受損,使腸道產(chǎn)生的LPS更易通過腸道粘膜屏障而吸收入血導(dǎo)致肥胖。卡泊三醇聯(lián)合iBRD9通過調(diào)節(jié)Nur77敲除鼠的腸道菌群、改善腸粘膜屏障功能,減少LPS的產(chǎn)生以及吸收入血,降低全身低度炎癥進(jìn)而減輕肥胖。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R589.2
【部分圖文】：

2.3.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析用GraphPadPrism 軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間多重比較采用法 Tukey's 法。檢驗(yàn)顯著性水平為雙側(cè) P<0.05。用 Spearman 相關(guān)性分析，進(jìn)行相關(guān)性分析。3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 小鼠體重變化及基礎(chǔ)血清測量3.1.1 小鼠體重、進(jìn)食量和體成分的測量從 17 周齡開始，Nur77 敲除小鼠體重顯著增加，給藥干預(yù)后顯著降低，與野生鼠體重接近（圖 1A）。而小鼠飼料消耗量無顯著差異（圖 1B）。體重的差異主要體現(xiàn)在體脂上，如圖 1C 所示，Nur77 敲除小鼠體脂肪率顯著增加，給藥干預(yù)后顯著降低，與野生鼠接近。小鼠瘦體重率無顯著差異（圖 1D）。

3.2.1 各組小鼠腸道微生物群落豐富度和多樣性分析使用 ACE 指數(shù)、Chao1 指數(shù)（圖 2A,B）估計(jì)微生物豐富度(Communityrichness)，使用Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)（圖2C,D）估計(jì)微生物多樣性(Communitydiversity)，通過 Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)，測得微生物豐富度和多樣性在各組間不具有明顯差異。

圖 3 小鼠的腸道微生物群結(jié)構(gòu)圖（A）為維恩圖顯示了群體間腸道微生物群中的獨(dú)特和共享的 OUT。圖（B）為使用基于加權(quán) UniFrac 距離的 PCoA 生成。3.2.2 各組小鼠組間差異物種分析利用 LDAEffectSize（LEfSe）分析對組間的物種豐度數(shù)據(jù)通過秩和檢驗(yàn)的方法檢測不同分組間的差異物種，并通過 LDA（線性判別分析）評估差異物種的影響大小（圖 4）。在科水平上，我們發(fā)現(xiàn) KO-V-KO-T 的生物標(biāo)志菌為 Rikenellaceae；WT-V-KO-V 的 為 Lachnospiraceae 、 Rikenellaceae 和 Prevotellaceae 。 Alistipes 為Rikenellaceae 的屬水平。
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本文編號：2858058