前言:在過去幾十年,肥胖的普及已成為一個流行問題,超重和肥胖被認(rèn)為2型糖尿病、血脂異常、動脈粥樣硬化等代謝性疾病的重要原因。近年來研究發(fā)現(xiàn)肥胖是一種慢性低度炎癥,這種慢性炎癥狀態(tài)與胰島素抵抗的發(fā)生密切相關(guān)。目前已有研究顯示Toll樣受體4(TLR4)是肥胖導(dǎo)致胰島素抵抗的關(guān)鍵樞紐。肥胖通過激活TLR4信號通路,活化相關(guān)炎癥因子,從而抑制胰島素信號通路傳導(dǎo)。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是綠茶發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)的主要成分,具有清除自由基、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗突變的作用。據(jù)現(xiàn)階段EGCG與肥胖的相關(guān)流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)EGCG能夠降低肥胖及糖尿病患者的體重及BMI指標(biāo)。本研究組既往研究結(jié)果表明EGCG干預(yù)肥胖大鼠脂肪組織及肝臟組織后,可通過負(fù)性調(diào)節(jié)TLR4信號通路減少炎癥反應(yīng)改善胰島素抵抗。但EGCG對于胰島素作用的主要靶器官骨骼肌的胰島素抵抗的改善情況尚不知曉。骨骼肌是胰島素刺激葡萄糖吸收及利用的主要場所,人體中80%葡萄糖是通過骨骼肌攝取及消耗的。骨骼肌作為胰島素作用的主要靶器官,在肥胖誘導(dǎo)的胰島素抵抗及2型糖尿病的發(fā)病中有著重要意義。本實驗選用肥胖大鼠后肢骨骼肌作為研究對象,探討EGCG對高脂飲食喂養(yǎng)大鼠骨骼肌組織中TLR4信號通路和胰島素信號通路的影響及其相關(guān)性,為改善胰島素抵抗及預(yù)防2型糖尿病提供理論依據(jù)。方法:4周齡雄性SD大鼠30只,在特定無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)籠中適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,隨后隨機(jī)分為2組:正常對照組(NC組,n=10)和高脂飲食組(n=20)。其中正常對照組喂養(yǎng)普通飼料(脂肪含量為10%);高脂飲食組喂養(yǎng)高脂飼料(脂肪含量為60%);大鼠喂養(yǎng)16周后稱重,正常對照組與高脂飲食組大鼠體重出現(xiàn)明顯差異(p0.05),將高脂飲食組進(jìn)一步隨機(jī)分為兩個亞組,單純高脂組(HFD組,n=10)和EGCG干預(yù)組(EGCG組,n=10)。隨后單純高脂組大鼠繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng);EGCG干預(yù)組大鼠開始高脂飼料添加EGCG喂養(yǎng),即每千克高脂飼料添加3.2gEGCG。正常對照組大鼠繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)。正常對照組(NC組,n=10)、單純高脂組(HFD組,n=10)、EGCG干預(yù)組(EGCG組,n=10)大鼠繼續(xù)喂養(yǎng)16周。喂養(yǎng)階段結(jié)束后,采用腹腔注射10%水合氯醛的方法分別對大鼠進(jìn)行麻醉。麻醉后,分離大鼠后肢骨骼肌,放入液氮中速凍,保存于-80℃的冰箱中。本實驗對以上三組大鼠后肢骨骼肌組織采用Real time PCR方法檢測GLUT4、TLR4、TRAF-6、IKKβ、TNF-αmRNA的表達(dá)水平;用Western方法檢測GLUT4、p-IRS-1 ser307、TLR4、TRAF-6、p-IKKβ、p-NF-κB、TNF-α蛋白的表達(dá)水平。并采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果:1、EGCG對肥胖大鼠骨骼肌組織中胰島素信號通路相關(guān)因子表達(dá)的影響。高脂飲食喂養(yǎng)32周后,單純高脂組(HFG組)GLUT4 mRNA及蛋白表達(dá)水平較正常對照組(NC組)下降,HFG組p-IRS-1ser307蛋白水平較NC組升高(p0.05),均具有統(tǒng)計學(xué)差異。EGCG干預(yù)16周后,EGCG干預(yù)組(EGCG組)GLUT4 mRNA及蛋白表達(dá)水平較HFG組升高(p0.05),EGCG組P-IRS-1ser307蛋白水平較HFG組降低(p0.05),均具有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果表明EGCG能夠改善肥胖大鼠骨骼肌組織中的胰島素信號通路傳導(dǎo)。2、EGCG對肥胖大鼠骨骼肌組織中TLR4信號通路相關(guān)因子表達(dá)的影響。高脂飲食喂養(yǎng)32周后,HFG組TLR4、TRAF-6、IKKβ、TNF-αmRNA水平較NC組上升(p0.05),HFG組TLR4、TRAF-6、p-IKKβ、p-NF-κB、TNF-α蛋白水平較NC組上升(p0.05),均具有統(tǒng)計學(xué)意義。EGCG干預(yù)16周后,EGCG組TLR4、TRAF-6、IKKβ、TNF-αm RNA水平較HFG組下降(p0.05),EGCG組TLR4、TRAF-6、p-IKKβ、p-NF-κB、TNF-α蛋白水平較HFG組下降(p0.05),具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果表明EGCG能夠下調(diào)肥胖大鼠骨骼肌組織中TLR4信號通路。3、EGCG對大鼠一般代謝指標(biāo)的影響。本實驗組前期研究結(jié)果表明,高脂飲食喂養(yǎng)32周后,HFD組大鼠體重、FINS、FFA、HOMA-IR高于NC組(p0.01)。EGCG干預(yù)16周后,EGCG組FINS、FFA、HOMA-IR較HFD組下降(p0.01)。EGCG組大鼠體重較HFD組有下降趨勢(p0.05),但是無統(tǒng)計學(xué)差異;三組大鼠FBG水平無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。上述結(jié)果表明HFD組游離脂肪酸水平及胰島素抵抗性較NC組均上升,EGCG干預(yù)后可降低肥胖大鼠游離脂肪酸水平,改善胰島素抵抗。結(jié)論:EGCG改善高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠骨骼肌組織中IRS-1絲氨酸磷酸化的表達(dá),上調(diào)GLUT4的表達(dá);負(fù)性調(diào)節(jié)了TLR4炎癥信號通路,改善炎癥狀態(tài)。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R589.2
【部分圖文】：

CG 對肥胖大鼠骨骼肌組織中 GLUT4 mRNA 表達(dá)照組；HFD 組：單純高脂組；EGCG 組：EGCG5；EGCG 組與 HFD 組之間比較, *p<0.05。相關(guān)因子蛋白水平的表達(dá)情況。 GLUT4 蛋白水平較 NC 組下降，EGCG 組均具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05，如圖 2A）。HF高，EGCG 組 P-IRS-1ser307 蛋白水平較 HF0.05,如圖 2B）。
【參考文獻(xiàn)】

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1 候麗瓊;趙鐵耘;張伊祎;;黃連素對肥胖胰島素抵抗大鼠骨骼肌胰島素抵抗的干預(yù)研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2015年06期

2 曹艷麗;暴素青;范雨鑫;白淑亭;單忠艷;;高脂飲食喂養(yǎng)對大鼠脂肪組織中TLR4炎癥信號通路的影響[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年15期

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本文編號：2849186