【背景和目的】:骨質(zhì)疏松多發(fā)于老年群體及絕經(jīng)后的女性群體,分為年齡相關(guān)的骨質(zhì)疏松和絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松,患者骨密度降低,骨小梁數(shù)量減少,骨折風(fēng)險(xiǎn)增加。而且骨質(zhì)疏松骨折后易引起其他并發(fā)癥,影響患者生活質(zhì)量,帶來(lái)一系列社會(huì)經(jīng)濟(jì)學(xué)問(wèn)題。骨質(zhì)疏松是一種由骨代謝異常導(dǎo)致的退行性疾病,而骨代謝是由控制骨形成的細(xì)胞——成骨細(xì)胞,和調(diào)控骨吸收的細(xì)胞——破骨細(xì)胞共同作用的,骨質(zhì)疏松的發(fā)病主要是由于破骨細(xì)胞活性大于成骨細(xì)胞活性導(dǎo)致的。已應(yīng)用的治療骨質(zhì)疏松的藥物也主要是通過(guò)調(diào)控這兩種細(xì)胞的活性進(jìn)行治療。miRNA是一類(lèi)長(zhǎng)度為18-25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,主要通過(guò)降解mRNA的3’-UTR和抑制轉(zhuǎn)錄后翻譯來(lái)調(diào)控基因的表達(dá)。諸多研究證明miRNA能調(diào)控成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的增殖,分化和凋亡,同時(shí)miRNA也在骨質(zhì)疏松疾病的發(fā)生發(fā)展及診斷治療中起到重要作用。本研究通過(guò)芯片篩選出和絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松相關(guān)的miRNA,并研究其對(duì)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的調(diào)控,試圖為骨質(zhì)疏松的治療尋找新靶點(diǎn)和新的機(jī)制�！痉椒ā�:本研究利用了外加雌激素刺激和OVX導(dǎo)致的雌激素缺失模型,檢測(cè)了雌激素對(duì)骨髓單核巨噬細(xì)胞(BMM)增殖、凋亡和破骨分化的影響。并用雌激素受體抑制劑阻斷了雌激素受體,以驗(yàn)證雌激素對(duì)BMM增殖、凋亡和破骨分化的影響是否通過(guò)雌激素受體(ER)介導(dǎo)。隨后我們構(gòu)建了雙側(cè)卵巢切除(OVX)導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松小鼠模型,在假手術(shù)組(sham)和OVX組之間用miRNA芯片篩選出明顯變化的miR-146a。構(gòu)建miR-146a敲基因小鼠(miR-146a~(-/-)),并在野生型(WT)和miR-146a~(-/-)小鼠中構(gòu)建OVX模型,利用microCT對(duì)其骨微結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,同時(shí)對(duì)組織內(nèi)?血清內(nèi)?細(xì)胞內(nèi)相關(guān)標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)。體外過(guò)表達(dá)和降低miR-146a并檢測(cè)其對(duì)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化的影響。體外共培養(yǎng)WT-sham?WT-OVX和miR-146a~(-/-)-sham?miR-146a~(-/-)-OVX小鼠的成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞,檢測(cè)其培養(yǎng)上清中相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)�！窘Y(jié)果】:雌激素能抑制BMM增殖和破骨分化,促進(jìn)BMM凋亡,且這一作用是通過(guò)ER介導(dǎo)的。miR-146a在雌激素缺失的骨質(zhì)疏松小鼠中表達(dá)明顯升高。miR-146a miR-146a~(-/-)小鼠與WT小鼠骨量無(wú)明顯差異,但骨轉(zhuǎn)換率增加。MiR-146a抑制成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化。WT小鼠OVX后骨量減少,破骨細(xì)胞活性增強(qiáng);miR-146a~(-/-)小鼠OVX后骨量不僅沒(méi)有下降,反而上升,破骨細(xì)胞的活性未見(jiàn)增強(qiáng),同時(shí)其骨微環(huán)境中M-CSF?RANKL/OPG含量下降�！窘Y(jié)論】:miR-146a負(fù)調(diào)控成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞分化。在雌激素缺失引起的骨質(zhì)疏松中,敲除miR-146a能降低骨微環(huán)境中的M-CSF?RANKL/OPG含量,從而降低破骨細(xì)胞活性,保護(hù)骨量丟失。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R580
【部分圖文】：

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文老齡人口還在以每年 800 萬(wàn)人的速度增加;有關(guān)專(zhuān)家預(yù)計(jì)，至 2050 年，我國(guó)老齡人口將達(dá)到總?cè)丝诘?1/3。根據(jù) WHO 的估計(jì)，50 歲以上女性中約 30%罹患此病，另外隨著人口老齡化發(fā)展，這個(gè)比例仍然在持續(xù)上升[11]。據(jù)預(yù)測(cè)中國(guó)大陸 2030 年骨質(zhì)疏松性骨折年發(fā)生 436 萬(wàn)例次，至 2050 年達(dá) 599 萬(wàn)例次，相應(yīng)的醫(yī)療支出達(dá) 178億美元和 254 億美元[1-6, 12]。女性一生發(fā)生骨質(zhì)疏松性，骨折的危險(xiǎn)性(40%)高于乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌和卵巢癌的總和，男性一生發(fā)生骨質(zhì)疏松性骨折的危險(xiǎn)性(13%)高于前列腺癌。患有骨質(zhì)疏松的患者日常生活中骨折發(fā)生率高達(dá) 40%，且主要發(fā)生在脊柱、髖部、腕部[8]。骨折造成的運(yùn)動(dòng)性和自主性缺失，顯著降低了患者生活質(zhì)量[13]，且脊柱骨折和髖部骨折會(huì)導(dǎo)致患者死亡率上升，主要原因是長(zhǎng)期臥床導(dǎo)致的肺炎和血管栓塞等并發(fā)癥[8]。骨質(zhì)疏松癥已經(jīng)成為我國(guó)所面臨的重要公共健康問(wèn)題。因此研究出有效的骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防與治療方法迫在眉睫。

臟和骨髓中檢測(cè)到受 NF-κB 調(diào)節(jié)的基因表達(dá)上調(diào)[51]免疫性失調(diào)、髓質(zhì)增生和自發(fā)性腫瘤[52]。關(guān)于 miR尚未有文獻(xiàn)報(bào)道，但 miR-146a 被證實(shí)在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)作用，主要通過(guò)靶向抑制 TRAF6[53]。我們已有的實(shí)驗(yàn)體內(nèi)破骨細(xì)胞活性明顯增強(qiáng)，且 miR-146a 敲除老年重。這些證據(jù)都支持我們提出的 miR-146a 與骨代謝調(diào)義在于可以探究 miR-146a 的新功能，同時(shí)可以為骨能靶點(diǎn)。與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動(dòng)態(tài)的，代謝水平很高的器官，骨組織中不僅有礦化統(tǒng)，同時(shí)伴隨著血管侵入，骨微環(huán)境中的諸多細(xì)胞因旁分泌途徑在不同細(xì)胞間發(fā)揮作用。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松

細(xì)胞用 4%對(duì)聚甲醛固定 30 分鐘，PBST 洗干凈后用 0.5%Triton-100 通透 15 分鐘 用 5%BSA 封閉 1 小時(shí)，加入 1：200 的 F4/80 一抗，4°C 過(guò)夜，PBST 洗干凈后加入熒光二抗，室溫孵育 1 小時(shí)，DAPI 染核，用 PBST 洗干凈，用熒光封片劑封片后在熒光顯微鏡下拍照。1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.2.1 BMM 與破骨細(xì)胞的鑒定分離小鼠的 BMM 并用其標(biāo)志物 F4/80 流式鑒定，發(fā)現(xiàn) F4/80 陽(yáng)性的細(xì)胞率達(dá)到 97.2%(圖 1.1A)。同時(shí)用 F4/80 免疫熒光染色鑒定分離的小鼠 BMM(圖 1.1B)。用75ng/ml 濃度的細(xì)胞因子 RANKL 誘導(dǎo)小鼠 BMM 破骨分化，5 天后形成成熟的破骨細(xì)胞，TRAP 染色鑒定成熟的破骨細(xì)胞。其中白色箭頭標(biāo)注為成熟破骨細(xì)胞，綠色箭頭標(biāo)注為正在分化過(guò)程的破骨細(xì)胞，黑色箭頭標(biāo)注為未分化的 BMM (圖 1.1C)。
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6 張鑒;王亦璜;王文超;張曦;;中藥骨舒康治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松患者的臨床效果觀察[J];臨床合理用藥雜志;2017年29期

7 李凌芳;;依普黃酮對(duì)防治女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的療效評(píng)價(jià)[J];中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥;2013年14期

8 薛守旺;王鋼;王佳;王濤;;云克聯(lián)合依降鈣素治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的臨床療效觀察[J];中國(guó)民族民間醫(yī)藥;2011年01期

9 梁文娜;李燦東;高碧珍;沈建英;廖凌虹;張凌媛;;天癸盛衰調(diào)控絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松物質(zhì)本源的探討[J];世界中醫(yī)藥;2011年02期

10 梁文娜;李燦東;高碧珍;沈建英;廖凌虹;張凌媛;;天癸盛衰調(diào)控絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松物質(zhì)本源的探討[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2011年08期

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6 董榮菂;預(yù)防絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松科學(xué)健身指導(dǎo)系統(tǒng)的研究與應(yīng)用[D];北京體育大學(xué);2005年

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9 張蓉;杜仲防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松及其機(jī)理研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

10 王俊玲;二仙湯治療骨質(zhì)疏松的系統(tǒng)評(píng)價(jià)及用于絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松治療的初步研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

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9 張煥堂;雷公藤口服液對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的影響及初步臨床觀察[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：2847808