研究目的:橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)是由致病因素誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生自身免疫性反應(yīng),最終導(dǎo)致甲狀腺濾泡結(jié)構(gòu)破壞和甲狀腺功能減退的自身免疫性甲狀腺疾病。本研究旨在探索HT患者甲狀腺組織中髓關(guān)聯(lián)蛋白14(Myeloid-Related Protein14,S100A9)對(duì)甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞和維持細(xì)胞間緊密連接的聯(lián)接粘附分子A(junctional adhesion molecule A,JAM-A)的影響,了解S100A9對(duì)HT致病中的作用,為臨床提供新的治療靶點(diǎn)。研究方法:1.獲取健康體檢者、單純性甲狀腺結(jié)節(jié)患者與HT患者的血清標(biāo)本各14例。通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)對(duì)上述血清中S100A9的含量情況測(cè)定。2.通過手術(shù)切除獲取單純性甲狀腺結(jié)節(jié)組織標(biāo)本與HT患者的甲狀腺標(biāo)本各7例。進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析,觀察S100A9蛋白和JAM-A蛋白的分布及表達(dá)情況。3.將S100A9小干擾(si-S100A9-100、si-S100A9-267)序列及陰性對(duì)照(si-Con)序列、S100A9過表達(dá)質(zhì)粒(pc DNA3.1 S100A9)及空載對(duì)照(pc DNA3.1)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染甲狀腺上皮細(xì)胞株Nthy-ori 3-1,48 h后用熒光定量PCR(q PCR)及蛋白印跡(Western blot,WB)的技術(shù)檢測(cè)S100A9與JAM-A的表達(dá)。4.S100A9的過表達(dá)質(zhì)粒及空載質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染入Nthy-ori 3-1 48 h后,倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化及數(shù)量,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。研究結(jié)果:1.與健康人或單純性甲狀腺結(jié)節(jié)對(duì)照相比,HT患者血清中S100A9濃度增高。2.HT患者甲狀腺組織標(biāo)本中的S100A9蛋白顯著高于單純性甲狀腺結(jié)節(jié)對(duì)照組(P0.001);相反,JAM-A的表達(dá)低于對(duì)照組(P0.001)。3.同對(duì)照比較,si RNA-S100A9轉(zhuǎn)染入甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞系Nthy-ori 3-1后,S100A9 m RNA水平明顯下降(P0.01),JAM-A m RNA水平未見明顯改變,而JAM-A蛋白水平升高;用pc DNA3.1 S100A9處理甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞系Nthy-ori 3-1,S100A9 m RNA水平顯著升高(P0.01),JAM-A m RNA表達(dá)未見明顯改變,而JAM-A蛋白水平下降。4.轉(zhuǎn)染成功48h后,與對(duì)照組比較,Nthy-ori 3-1中S100A9過表達(dá)后細(xì)胞變圓并且數(shù)量明顯減少(P0.01),流式結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡水平(早期凋亡+晚期凋亡)明顯升高(P0.001)。結(jié)論:HT患者甲狀腺組織中異常高表達(dá)的S100A9通過抑制JAM-A蛋白的表達(dá),以及促進(jìn)甲狀腺上皮細(xì)胞的凋亡,對(duì)正常甲狀腺濾泡結(jié)構(gòu)產(chǎn)生不良影響,參與了橋本氏甲狀腺炎的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R581.4
【部分圖文】：

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圖 4.2.2 S100A9、JAM-A 在甲狀腺組織內(nèi)的表達(dá)Figure 4.2.2 S100A9，JAM-A expression in the thyroid tissues注：收集 7 例單純性甲狀腺結(jié)節(jié)患者以及 7 例 HT 患者甲狀腺組織的切片，應(yīng)用免疫組化方法對(duì) S100A9、JAM-A 表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，（A）圖中所示即各組的代表性結(jié)果（棕色代表陽性表達(dá)）。陽性表達(dá)采用 Image-Pro plus 6.0 進(jìn)行定量分析, 數(shù)據(jù)用柱狀圖（B）表示，***P<0.001 vs 對(duì)照組.4.3 siRNA-S100A9促進(jìn)甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞JAM-A的表達(dá)為進(jìn) 步明確S100A9уJAM-A之間的關(guān)系，我們體外采用siRNA-S100A9（包括siRNA-S100A9 100、siRNA-S100A9 267）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染甲狀腺濾泡т皮細(xì)胞Nthy-ori 3-1，48 h后抽提細(xì)胞RNA，定量PCR驗(yàn)證S100A9干擾效果后進(jìn) 步檢測(cè)了JAM-A的表達(dá)。如圖所示（4.2 A-C），уcontrol組相比，siRNA-S100A9的干擾效果明顯（約40%），此外，Nthy-ori 3-1細(xì)胞進(jìn)行S100A9干擾之后，qPCR分

注：收集 7 例單純性甲狀腺結(jié)節(jié)患者以及 7 例 HT 患者甲狀腺組織的切片，應(yīng)用免疫組化方法對(duì) S100A9、JAM-A 表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，（A）圖中所示即各組的代表性結(jié)果（棕色代表陽性表達(dá)）。陽性表達(dá)采用 Image-Pro plus 6.0 進(jìn)行定量分析, 數(shù)據(jù)用柱狀圖（B）表示，***P<0.001 vs 對(duì)照組.4.3 siRNA-S100A9促進(jìn)甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞JAM-A的表達(dá)為進(jìn) 步明確S100A9уJAM-A之間的關(guān)系，我們體外采用siRNA-S100A9（包括siRNA-S100A9 100、siRNA-S100A9 267）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染甲狀腺濾泡т皮細(xì)胞Nthy-ori 3-1，48 h后抽提細(xì)胞RNA，定量PCR驗(yàn)證S100A9干擾效果后進(jìn) 步檢測(cè)了JAM-A的表達(dá)。如圖所示（4.2 A-C），уcontrol組相比，siRNA-S100A9的干擾效果明顯（約40%），此外，Nthy-ori 3-1細(xì)胞進(jìn)行S100A9干擾之后，qPCR分析顯示各組間JAM-A mRNA含量無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而WB實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于對(duì)照組，S100A9干擾組JAM-A蛋白表達(dá)明顯增多，顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.01）。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2845022