發(fā)布時間：2020-10-17 16:14

　　 研究目的:橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)是由致病因素誘導機體產(chǎn)生自身免疫性反應,最終導致甲狀腺濾泡結構破壞和甲狀腺功能減退的自身免疫性甲狀腺疾病。本研究旨在探索HT患者甲狀腺組織中髓關聯(lián)蛋白14(Myeloid-Related Protein14,S100A9)對甲狀腺濾泡上皮細胞和維持細胞間緊密連接的聯(lián)接粘附分子A(junctional adhesion molecule A,JAM-A)的影響,了解S100A9對HT致病中的作用,為臨床提供新的治療靶點。研究方法:1.獲取健康體檢者、單純性甲狀腺結節(jié)患者與HT患者的血清標本各14例。通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)對上述血清中S100A9的含量情況測定。2.通過手術切除獲取單純性甲狀腺結節(jié)組織標本與HT患者的甲狀腺標本各7例。進行免疫組織化學分析,觀察S100A9蛋白和JAM-A蛋白的分布及表達情況。3.將S100A9小干擾(si-S100A9-100、si-S100A9-267)序列及陰性對照(si-Con)序列、S100A9過表達質(zhì)粒(pc DNA3.1 S100A9)及空載對照(pc DNA3.1)質(zhì)粒轉染甲狀腺上皮細胞株Nthy-ori 3-1,48 h后用熒光定量PCR(q PCR)及蛋白印跡(Western blot,WB)的技術檢測S100A9與JAM-A的表達。4.S100A9的過表達質(zhì)粒及空載質(zhì)粒成功轉染入Nthy-ori 3-1 48 h后,倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化及數(shù)量,流式細胞術檢測細胞凋亡。研究結果:1.與健康人或單純性甲狀腺結節(jié)對照相比,HT患者血清中S100A9濃度增高。2.HT患者甲狀腺組織標本中的S100A9蛋白顯著高于單純性甲狀腺結節(jié)對照組(P0.001);相反,JAM-A的表達低于對照組(P0.001)。3.同對照比較,si RNA-S100A9轉染入甲狀腺濾泡上皮細胞系Nthy-ori 3-1后,S100A9 m RNA水平明顯下降(P0.01),JAM-A m RNA水平未見明顯改變,而JAM-A蛋白水平升高;用pc DNA3.1 S100A9處理甲狀腺濾泡上皮細胞系Nthy-ori 3-1,S100A9 m RNA水平顯著升高(P0.01),JAM-A m RNA表達未見明顯改變,而JAM-A蛋白水平下降。4.轉染成功48h后,與對照組比較,Nthy-ori 3-1中S100A9過表達后細胞變圓并且數(shù)量明顯減少(P0.01),流式結果顯示細胞凋亡水平(早期凋亡+晚期凋亡)明顯升高(P0.001)。結論:HT患者甲狀腺組織中異常高表達的S100A9通過抑制JAM-A蛋白的表達,以及促進甲狀腺上皮細胞的凋亡,對正常甲狀腺濾泡結構產(chǎn)生不良影響,參與了橋本氏甲狀腺炎的發(fā)生發(fā)展。
【學位單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R581.4
【部分圖文】：

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圖 4.2.2 S100A9、JAM-A 在甲狀腺組織內(nèi)的表達Figure 4.2.2 S100A9，JAM-A expression in the thyroid tissues注：收集 7 例單純性甲狀腺結節(jié)患者以及 7 例 HT 患者甲狀腺組織的切片，應用免疫組化方法對 S100A9、JAM-A 表達情況進行檢測，（A）圖中所示即各組的代表性結果（棕色代表陽性表達）。陽性表達采用 Image-Pro plus 6.0 進行定量分析, 數(shù)據(jù)用柱狀圖（B）表示，***P<0.001 vs 對照組.4.3 siRNA-S100A9促進甲狀腺濾泡上皮細胞JAM-A的表達為進 步明確S100A9уJAM-A之間的關系，我們體外采用siRNA-S100A9（包括siRNA-S100A9 100、siRNA-S100A9 267）瞬時轉染甲狀腺濾泡т皮細胞Nthy-ori 3-1，48 h后抽提細胞RNA，定量PCR驗證S100A9干擾效果后進 步檢測了JAM-A的表達。如圖所示（4.2 A-C），уcontrol組相比，siRNA-S100A9的干擾效果明顯（約40%），此外，Nthy-ori 3-1細胞進行S100A9干擾之后，qPCR分

注：收集 7 例單純性甲狀腺結節(jié)患者以及 7 例 HT 患者甲狀腺組織的切片，應用免疫組化方法對 S100A9、JAM-A 表達情況進行檢測，（A）圖中所示即各組的代表性結果（棕色代表陽性表達）。陽性表達采用 Image-Pro plus 6.0 進行定量分析, 數(shù)據(jù)用柱狀圖（B）表示，***P<0.001 vs 對照組.4.3 siRNA-S100A9促進甲狀腺濾泡上皮細胞JAM-A的表達為進 步明確S100A9уJAM-A之間的關系，我們體外采用siRNA-S100A9（包括siRNA-S100A9 100、siRNA-S100A9 267）瞬時轉染甲狀腺濾泡т皮細胞Nthy-ori 3-1，48 h后抽提細胞RNA，定量PCR驗證S100A9干擾效果后進 步檢測了JAM-A的表達。如圖所示（4.2 A-C），уcontrol組相比，siRNA-S100A9的干擾效果明顯（約40%），此外，Nthy-ori 3-1細胞進行S100A9干擾之后，qPCR分析顯示各組間JAM-A mRNA含量無明顯統(tǒng)計學差異，而WB實驗發(fā)現(xiàn)，相對于對照組，S100A9干擾組JAM-A蛋白表達明顯增多，顯示有統(tǒng)計學意義（P <0.01）。
【參考文獻】

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2 王榮;劉曉玲;;Toll樣受體與人細小病毒B19在橋本氏甲狀腺炎發(fā)病機制中的聯(lián)合作用[J];中國現(xiàn)代醫(yī)生;2015年08期

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本文編號：2845022